Возбудители женские народные: женский возбудитель народные средства — Элегантный возраст

Содержание

ᐅ Возбудитель для женщин быстрого действия народные средства

Возбуждающие капли Rendez Vous купил для меня супруг, ему очень сложно возбудить меня в постели. Попробовали – и испытали невероятные эмоции. У меня, наконец-то, получилось полностью расслабиться, я смогла получить настоящее наслаждение.

infobox rendez-vous.ru. rc rendez-vous.ru. оставить претензию к качеству товара или обслуживания. прикрепить файл. Rendez-Vous – это крупная сеть из более чем 80 розничных магазинов не только в Москве, но и в городах России, а также интернет-магазин обуви и аксессуаров. Победители конкурса Rendez-Vous и Mastercard побывали в Каннах. Босоножки от See by Chloé, ремешки на которых мы будем носить расстегнутыми. blog.rendez-vous.ru. Rendez-Vous (Рандеву) – это крупная сеть из более чем 70 розничных магазинов не только в Москве, но и в городах России, а также интернет-магазин обуви и. Агент Mail.Ru Браузер Амиго Юла Beepcar Delivery Club ICQ Maps.Me. rendez-vous.ru. Для того, чтобы мы смогли детально разобраться с ситуацией описанной вами, пожалуйста, пришлите нам номер вашего заказаe на электронную почту Infobox rendez-vous.ru. Приложение Rendez-Vous – ваш персональный онлайн-магазин мужской и женской обуви, сумок и аксессуаров. app rendez-vous.ru. Политика конфиденциальности. На главную! Мои эксперименты Женский возбудитель — развод или способ соблазнения? отзывы. Женский возбудитель — это средство, которое вызывает или усиливает сексуальное возбуждение у представительниц прекрасного пола. Женские возбудители являются отличным средством для возврата былой страсти, а также для проведения различных экспериментов в постели. Голосов: 14 Средняя оценка: 5,00. оставить отзыв. Все отзывы автора: 3063. отзыв считают полезным: 0. Дата отзыва: 17 января 2018. отзыв: Женский возбудитель самый эффективный форум. отзывы о женских возбудителях. Все прекрасно знают о том, что залог успешных отношений – это хороший секс. отзывы об использовании различных женских возбудителей. Женский возбудитель. Секс и вопросы, с ним связанные. Проблемы сексуальной жизни и их решение. Светка:не то что ниче не помогло- а даже моего родного возбуждения небыло.воопще -0 кстати отзывы там были типа;сносит крышу. Нейтральный отзыв на Женский возбудитель forte love в городе Москва, в категории Другое на тему: Покупал ради прикола, было просто интересно. Хотим с МЧ попробывать вместе возбудители. Посоветуйте, что реально действующее, а не просто реклама.Что лучше,таблетки,капли? — Леди Mail.Ru. Красотуля.ру — женский форум о сексе, женский сайт. Темы форума: семья, любовь, отношения, секс, интим, эротика. Состав, отзывы о нем. И чтобы реально сильный возбудитель, а не типа креветки поешьте, желание усилиться. .Ответить трудно. Эффект женского возбудителя Rendez Vous отзывы зарабатывает неоднозначные. Дело все в том, что кто-то уверяет в эффективности препарата, а некоторые говорят об обратном. Чему верить? Отыскать реальные отзывы об изучаемом возбудителе проблематично. Производитель «Рандеву» зачастую публикует массу заказных мнений положительного типа. Это необходимо для раскрутки товара. Тем не менее, среди реальных отзывов эффективность зачастую подтверждается. Девушки уверяют, что данные препарат работает. Результат виден быстро — где-то через 10 минут после употребления капель. Возбуждение вызывает все — голос мужчины, его взгляд, походка… Такой результат действительно повышает половое влечение. И, соответственно, благоприятно сказывается на сексе.

Отзывы Возбудитель для женщин быстрого действия народные средства

Реальные отзывы о женском возбудителе Rendez Vous отличить от лжи можно, если внимательно присмотреться к тому, что говорят люди. На самом деле все просто. Обычно в реальных отзывах говорят о плюсах и минусах «Рандеву». Препарат не расхваливают и не пытаются сделать из него панацею от фригидности. Откровенного негатива в адрес капель тоже не будет. Зачастую отзывы о женском возбудителе Rendez Vous подчеркивают, что препарат действует, но не так хорошо, как обещает производитель. Кроме того, воспользоваться им может любой человек. Поэтому не исключено, что «Рандеву» подмешают в напиток, пока девушка этого не видит. Пожалуй, это все недостатки капель. Rendez Vous — возбудитель без химии, который достоин внимания современных женщин. Он помогает возбудиться, расслабиться и достичь оргазма. Отзывы Возбудитель для женщин быстрого действия народные средства

К примеру, лекарства, в состав которых входит циметин, нитраты и некоторые иные вещества, абсолютно несовместимы со средством Рандеву. По этой причине прежде, чем начать использование возбудителя, следует проконсультироваться с врачом.

Поделюсь своим реальным отзывом об Возбудитель для женщин быстрого действия народные средства. Есть и определенная опасность, заключающаяся в том, что возможен прием женщиной возбудителя, не зная об этом. Это связано с отсутствием у препарата запаха, вкуса и цвета. По этой причине, если мужчина желает подарить своей возлюбленной волшебную ночь, стоит сказать ей об этом заранее.

Узнать подробнее о Возбудитель для женщин быстрого действия народные средства

Ещё ссылки где можно узнать о Возбудитель для женщин быстрого действия народные средства: купить мощный женский возбудительВозбудитель для женщин быстрого действия народные средства
Rendez Vous купить в Нефтекамске, Rendez Vous купить в Нефтекамске
Возбудитель для женщин быстрого действия народные средства,Rendez Vous купить в Астана, Где в Йошкар-оле купить женский возбудитель
Распутница женский возбудительСкачать akcent Rendez Vous.

Купить-Возбудитель для женщин быстрого действия народные средства

Ответить трудно. Эффект женского возбудителя Rendez Vous отзывы зарабатывает неоднозначные. Дело все в том, что кто-то уверяет в эффективности препарата, а некоторые говорят об обратном. Чему верить? Отыскать реальные отзывы об изучаемом возбудителе проблематично. Производитель «Рандеву» зачастую публикует массу заказных мнений положительного типа. Это необходимо для раскрутки товара. Тем не менее, среди реальных отзывов эффективность зачастую подтверждается. Девушки уверяют, что данные препарат работает. Результат виден быстро — где-то через 10 минут после употребления капель. Возбуждение вызывает все — голос мужчины, его взгляд, походка… Такой результат действительно повышает половое влечение. И, соответственно, благоприятно сказывается на сексе.
infobox rendez-vous.ru. rc rendez-vous.ru. оставить претензию к качеству товара или обслуживания. прикрепить файл. Rendez-Vous – это крупная сеть из более чем 80 розничных магазинов не только в Москве, но и в городах России, а также интернет-магазин обуви и аксессуаров. Победители конкурса Rendez-Vous и Mastercard побывали в Каннах. Босоножки от See by Chloé, ремешки на которых мы будем носить расстегнутыми. blog.rendez-vous.ru. Rendez-Vous (Рандеву) – это крупная сеть из более чем 70 розничных магазинов не только в Москве, но и в городах России, а также интернет-магазин обуви и. Агент Mail.Ru Браузер Амиго Юла Beepcar Delivery Club ICQ Maps.Me. rendez-vous.ru. Для того, чтобы мы смогли детально разобраться с ситуацией описанной вами, пожалуйста, пришлите нам номер вашего заказаe на электронную почту Infobox rendez-vous.ru. Приложение Rendez-Vous – ваш персональный онлайн-магазин мужской и женской обуви, сумок и аксессуаров. app rendez-vous.ru. Политика конфиденциальности. .Недавно столкнулась с неприятностью под названием «климакс». Кроме всех симптомов, основную проблему доставила сухость влагалища. Во время сексуальной близости с мужем стала испытывать дискомфортные ощущения.

Возбудитель для женщин быстрого действия народные средства

Возбудитель для женщин быстрого действия названия, Какие препараты возбуждающие женщин, Недорогой возбудитель для женщин, Женский возбудитель купить в аптеке великих лук, Женский возбудитель своими руками в домашних, Женские возбудители одесса, Как работает женский возбудитель в таблетках, Магазин Rendez Vous ростов на дону, Самый дешевый женский возбудитель в аптеке цена, Сильный женский возбудитель, Rendez Vous официальный сайт интернет.

Rendez Vous купить в Атырау, Возбудитель для женщин рандеву купить в барнауле
Возбудитель для женщин в аптеках новосибирска
Rendez Vous купить в Вологде
Контакты руководителей Rendez Vous
Rendez Vous отзывы сотрудников москва

В статье рассмотрим народные средства для возбуждения женщин. Если верить статистическим данным, то около 70% женщин имитируют наслаждение и оргазм. Около 25% дам делают это при каждом половом контакте. Улучшить сексуальную инициативность и либидо позволяют афродизиаки. Они способствуют устранению стресса, повышению энергии, приводят к сексуальному возбуждению. Возбудитель для женщин быстрого действия. Натуральные афродизиаки для женщин. Обсудить Редактировать статью. 4. Нет записей. В статье рассмотрим народные средства для возбуждения женщин. Если верить статистическим данным, то около 70% женщин имитируют наслаждение и оргазм. Возбудитель для женщин своими руками в домашних условиях. Древнейший афродизиак шпанская мушка. Современные изобретения. Максимально быстрым эффектом обладает возбудитель из Шпанской Мушки. Шпанская Мушка – это жук, половая секреция которого повышает женское либидо, в частности – усиливает оргазм. Народные отвары и рецепты, определенные продукты питания, и возбуждающие ароматы, витающие в воздухе — все это комплексно помогает решить проблему сниженного либидо и улучить качество интимной жизни. Однако к рецептам народной медицины будет полезно приложить немного ласки, чуткости и теплоты, щедро приправив этот салат любовью и романтикой. Женские возбудители предназначены для комплексного улучшения состояния организма, в частности – восстановления работы половой системы. Их прием помогает повысить чувствительность эрогенных зон, усилить выработку влагалищной секреции, продлить интимную близость с партнером. Какие возбудители для женщин можно купить. Для того чтобы повысить возбуждение у женщин, достаточно принять возбудитель, который можно приобрести в интернет аптеках. В предоставленном видеоролике вы можете узнать какие эрогенные зоны есть у женщины и как быстро возбудить ее. Как сделать капли своими руками. Возбуждающие капли своими руками готовятся из жука Шпанская Мушка. Сексуальная активность – важный показатель здоровья как для мужчин так и для женщин. Кроме того, интимные отношения определяют во многом качество жизни. Но что делать, если вам совершенно не хочется интимной близости, а сексуальные ласки не доставляют удовольствия? Снижение либидо или отсутствие сексуального желания, на сегодняшний день, становится все более распространенной проблемой не зависимо от гендерных различий. В предыдущей статье я уже говорила о том, что существуют психологические и физиологические причины нарушения влечения. Но чаще присутствуют одновременно несколько причин. Поэтом. Не является лекарственным средством. Действие. Биологически активная добавка Loveron — это действенное средство для повышения сексуальной активности у женщин. Оно не вызывает искусственного возбуждения, не влияет на работу репродуктивной функции и не вызывает привыкания при длительном применении. Лаверон для женщин не только повышает либидо, но и оказывает положительное влияние на другие системы организма, оказывая тонизирующий эффект и улучшая эмоциональное состояние. Препарат улучшает кровоснабжение органов малого таза, за счёт чего увеличивается чувствительность гениталий и ощущения во время сексуального контакта становятся гораздо более яркими. Читайте инструкцию по применению препарата Виагра таблетки 50 мг 12 шт на сайте интернет-аптеки Горздрав: состав, побочные действия, показания, противопоказания. Бесплатная доставка. Это, в свою очередь, приводит к увеличению уровня цГМФ, последующему расслаблению гладкомышечной ткани кавернозного тела и увеличению притока крови.Силденафил не оказывает прямого расслабляющего действия на изолированное кавернозное тело у человека, но усиливает эффект NO посредством ингибирования ФДЭ5, которая ответственна за распад цГМФ.Силденафил селективен в отношении ФДЭ5 in vitro, его активность в отношении ФДЭ5 превосходит активность в отношении других. Женщины – существа привередливые, а женское возбуждение — и подавно. Поэтому иногда даже игривого настроя, интимной обстановки и внимательного партнера бывает недостаточно, чтобы пробудить в девушке или даме сильное сексуальное желание. Что же делать?. Женский возбудитель, сделанный в домашних условиях: народные рецепты. Сегодня в аптеках предлагается множество препаратов и различных средств для усиления дамского возбуждения. Но почти все они имеют высокую стоимость и множество побочных эффектов. Поэтому есть смысл обратиться к народной медицине: в ее арсенале можно найти массу натуральных аналогов, которые тоже помогут усилить сексуальное желание. Действие. Влияние на женщин. Последствия употребления. Риск передозировки. Бутират (буратино, лимонад, бутик, бут, пляс-вода, ксюха, пробки) – психоактивное вещество из группы депрессантов нервной системы. В небольших дозах действие бутирата на организм напоминает эффекты приема алкоголя или экстази. Передозировка чревата опасными для жизни осложнениями. Характеристики. Бутират действует как отупляющее средство, при длительном приеме вызывает снижение интеллекта. Студенты перестают справляться с учебой, люди умственного труда не могут выполнять свои профессиональные обязанности. Наркотик перерабатывается в печени, поэтому возможны нарушения функций этого органа. В качестве биологически активной добавки к пище для женщин — источника фенольных соединений, флавоноидов и аллицина. Все показания. Вместе выгоднее!Этот товар входит в 1 набор. Набор ЛАВЕРОН для женщин из 2-х уп со скидкой 20%. 422.40₽. 621.18 ₽. Индивидуальная непереносимость компонентов продукта, беременность, кормлению грудью. Побочные действия. Нет. Приложения. хроническая усталость и быстрая утомляемость; психологические проблемы, связанные с отношениями; заболевания сердечно-сосудистой системы. Однако эффект, как правило, временный, и у женщины могут возникнуть неприятные ощущения от попадания геля. Таблетки для употребления внутрь более распространены. Они могут быть синтетическими или растительными. Что сделать, чтобы член стоял: народные средства. Лечить эректильную дисфункцию в домашних условиях можно, но этих методов бывает недостаточно, так как народными методами лечатся далеко не все болезни. Но они могут дополнять основную терапию.

Возбудитель для женщин в аптеках новосибирска Возбудитель для женщин быстрого действия народные средства

Rendez Vous купить в Атырау Возбудитель для женщин рандеву купить в барнауле Возбудитель для женщин в аптеках новосибирска Rendez Vous купить в Вологде Контакты руководителей Rendez Vous Rendez Vous отзывы сотрудников москва Rendez Vous интернет магазин москва каталог Женский возбудитель фильм

Rendez Vous спб Женский возбудитель барнаул

Возбудитель для женщин быстрого действия народные средства Rendez Vous купить в Вологде

Rendez Vous интернет магазин москва каталог
Женский возбудитель фильм
Rendez Vous спб
Женский возбудитель барнаул
Лучший женский возбудитель в каплях
Где в Северске купить женский возбудитель

обувной Rendez Vous, Название женских возбудителей продающихся в аптеке, Распутница женский возбудитель купить в москве, Женский возбудитель крем и гель использовать, Где купить возбудитель для женщины в липецке, Действует ли возбудитель на женщин, Женские возбудители совмещаемые с алкоголем, Возбудитель для женщин быстрого действия в каплях, Препараты возбуждающего действия, Rendez Vous купить в Брянске, Таблетки возбудители для женщин купить. Возбуждающие препараты для двоих в аптеке, Rendez Vous купить в липецке, Женский возбудитель форум женщин, Бывают ли женские возбудители, Где в Магадане купить женский возбудитель, Rendez Vous телефон горячей линии, Где в Нижнем Тагиле купить женский возбудитель, Rendez Vous купить в Смоленске, Женский возбудитель казань, Rendez Vous купить в Ярославле, Rendez Vous купить уфа. Где в Каменске-Уральском купить женский возбудитель, Rendez Vous интернет магазин официальный сайт, Заказать женский возбудитель в каплях по почте, Женский возбудитель в таблетках, Rendez Vous адреса магазинов, Возбудитель для женщин купить в интернет магазине, Где в Абакане купить женский возбудитель, Адреса где купить женский возбудитель, Где в воронеже купить женский возбудитель, Самый быстрый возбудитель для женщин, Женский возбудитель сайт.

народные возбудители для женщин как приготовить

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое народные возбудители для женщин как приготовить?

Вызвать страстное желание во время половой близости поможет препарат Rendez Vous, который в считанные минуты разбудит женскую чувственность. Кроме того, за счет ускорения кровообращения в области половых органов, средство позволит получить от половой близости больше удовольствия. Регулярный прием препарата ускоряет выработку женских половых гормонов, борется с проявлениями климакса.

Эффект от применения народные возбудители для женщин как приготовить

Для представительниц прекрасного пола интимная близость – это не только физиологическая необходимость, но и важная составляющая психологического комфорта. От качества половой жизни зависит жизненный тонус, настроение и даже здоровье женщины. Кроме того, регулярный и качественный секс является залогом ярких, крепких и счастливых отношений. Если вы заметили снижение полового влечения, чувствительности, отсутствие физического удовлетворения и разрядки от интимной близости, то вам помогут капли Rendez Vous – натуральный стимулятор сексуальной активности.

Мнение специалиста

Врачи-сексологи широко используют в своей практике данный препарат. В интернет сети можно найти множество положительных отзывов, как от врачей, так и от пациентов. Сертификаты и патенты качества гарантируют ожидаемую результативность и безопасность. Ознакомиться с ними можно на официальном сайте производителя. Не следует доверять аналогичным изделиям, перед тем как использовать их внимательно изучите состав и отзывы о продукте.

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ народные возбудители для женщин как приготовить необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Ника

Сексуальная составляющая очень важна для современной женщины. Отсутствие интимной жизни в жизни представительницы слабого пола зачастую провоцирует появление гинекологических заболеваний. Иногда снижение женской чувствительности приводит к неудовлетворенности и депрессии.

Елена

Возбуждающие капли Rendez Vous, инструкция к которым прилагается вместе с флаконом, используются за десять минут до интимной близости. Для снижения симптомов климакса капли принимают один раз в день. В стакан с водой рекомендуется добавлять 20 капель и выпивать незадолго до предполагаемого секса. Нельзя применять средство более одного раза в день. Ограничений по частоте применения у этого препарата нет, более того, при регулярном использовании чувствительность нормализуется намного эффективнее. Капли не вызывают привыкания, поэтому могут использоваться длительное время

Женские возбудители – это препараты, задача которых заключается в прямой стимуляции либидо. Дополнительно они улучшают состояние мышц и слизистой оболочки, устраняют хроническую сухость влагалища, восстанавливают нормальный уровень микрофлоры, а также положительно сказываются на работе нервной системы: подавляют стресс, снимают усталость, ликвидируют сонливость. Где купить народные возбудители для женщин как приготовить? Врачи-сексологи широко используют в своей практике данный препарат. В интернет сети можно найти множество положительных отзывов, как от врачей, так и от пациентов. Сертификаты и патенты качества гарантируют ожидаемую результативность и безопасность. Ознакомиться с ними можно на официальном сайте производителя. Не следует доверять аналогичным изделиям, перед тем как использовать их внимательно изучите состав и отзывы о продукте.
Сделать женский возбудитель своими руками в домашних условиях несложно. . Чтобы изготовить женский возбудитель по народным бабушкиным рецептам . Рис с морепродуктами. Возбудить женщину можно не только каплями или таблетками. Есть блюда, которые увеличивают кровоток в половых органах. Возбудитель для женщин из подручных средств, бабушкин рецепт возбудителя для женщин. . Женские возбудители приготовленные в домашних условиях из натуральных средств обеспечивают повышение длительности полового акта. Обычно их компонентами являются лекарственные растения. Народные отвары и рецепты, определенные продукты питания, и возбуждающие . Чтобы приготовить возбудитель для женщин в домашних условиях, нужно . Перед тем как приготовить возбудитель женский своими руками в домашних условиях, следует внимательно отнестись к выбранному рецепту. Либидо женщины зависит от многих факторов. На него влияет атмосфера, душевное состояние, личность партнера, находящегося рядом и многое другое. Если мужчина перепробовал все доступные ему сексуальные техники возбуждения. Возможно ли приготовить женский возбудитель в домашних условиях . Это ореховый возбудитель, сделанный для женщин в домашних условиях. . Да и сделать возбудитель своими руками или воспользоваться народным методом дешевле и проще. Использование современных возбуждающих средств помогает. Не обязательно готовить или покупать какую-то волшебную «микстуру» для того, чтобы пробудить в женщине сексуальное желание. Достаточно организовать для дамы сердца романтический ужин, с приятной обстановкой и блюдами, которые содержат природные афродизиаки. По традиции к ним причисляют. Лучшие возбудители для женщин, которые можно сделать в домашних условиях. . Лучший возбудитель для женщин быстрого действия в домашних условиях – по нашему мнению – это смесь орехов с мёдом. Возбудитель для женщин своими руками: просто и безопасно. Большинство рецептов женских возбудителей несложные . Перед тем как приготовить возбудитель женский своими руками в домашних условиях, следует внимательно отнестись к выбранному рецепту. Рецептов приготовления. Рецепт приготовления возбудителя. Чтобы сделать этот мощный возбудитель для женщин своими руками, нужно взять . Чтобы приготовить настойку необходимо взять . Как сделать мужской возбудитель в домашних условиях? Самодельный мастурбатор — как сделать игрушку в домашних. В статье рассмотрим народные средства для возбуждения женщин. . Принцип воздействия. Под воздействием возбудителей для женщин быстрого действия не только . Эффективность устриц зависит от способа, которым они приготовлены. Наибольшего эффекта можно достичь, употребляя их. Несложно приготовить возбудитель для женщин, если придерживаться простых правил. Точно решите для себя, чего именно хотите. . Народное средство для возбуждения женщин. Возбудитель для женщин быстрого действия.
http://www.zonazero.es/userfiles/vozbuditel_v_aptekakh_v_kapliakh_tsena1725.xml
http://www.otvorene-srdce.sk/userfiles/samyi_idealnyi_vozbuditel_dlia_zhenshchin5632.xml
http://mebel24.kiev.ua/pic/beshenyi_orgazm_u_zhenshchiny_pri_prieme_vozbuditelei8434.xml
http://kojrys.pl/pliki/est_li_vozbuditel_dlia_zhenshchin_otzyvy8943.xml
http://pspectr.ru/userfiles/zhenskii_vozbuditel_v_aptekakh_nazvanie_v_kapliakh4875.xml
Для представительниц прекрасного пола интимная близость – это не только физиологическая необходимость, но и важная составляющая психологического комфорта. От качества половой жизни зависит жизненный тонус, настроение и даже здоровье женщины. Кроме того, регулярный и качественный секс является залогом ярких, крепких и счастливых отношений. Если вы заметили снижение полового влечения, чувствительности, отсутствие физического удовлетворения и разрядки от интимной близости, то вам помогут капли Rendez Vous – натуральный стимулятор сексуальной активности.
народные возбудители для женщин как приготовить
Вызвать страстное желание во время половой близости поможет препарат Rendez Vous, который в считанные минуты разбудит женскую чувственность. Кроме того, за счет ускорения кровообращения в области половых органов, средство позволит получить от половой близости больше удовольствия. Регулярный прием препарата ускоряет выработку женских половых гормонов, борется с проявлениями климакса.
Всё о возбудителях и афродизиаках. . Виагра для женщин! . Таблетка от женской нехочухи. Екатерина Макарова. Такие стимуляторы именуются женскими возбудителями. На сегодняшний день различают четыре их группы. К одной из них и относятся возбуждающие капли для женщин. Кстати, именно каплям, вполне заслуженно присваивают первое место по быстродействию. Это объясняется тем, что у этих препаратов самая. Виды женских возбудителей и способ их применения. Если женщина не получает достаточного удовольствия в постели и не может полностью расслабиться, то можно использовать женский возбудитель для решения проблемы. Как сделать женский возбудитель в домашних условиях: народные рецепты. Как и сколько действует женский возбудитель для секса на женщину, какие противопоказания? Сильные возбудители для женщин в аптеках: таблетки, жвачки, капли, порошки. Содержание статьи. Как и сколько действует. Женщин. Мужчин. Как действует женский возбудитель. Виды женских возбудителей. Как пользоваться женским возбудителем. Когда следует применять возбуждающие средства. Что будет, если мужчина выпьет женский возбудитель. Rendez Vous — Лучший женский возбудитель c быстрым эффектом. . за просмотры фотографий! 02:18. Подсыпал девушке возбудитель )). 11 фев 201938 570 просмотров. Главный действующий компонент препарата силденафил способствует повышению потенции и лечению эректильной функции. . Препарат начинает действовать через полчаса после приёма. Принимать с алкогольными напитками его запрещено. Женский возбудитель — это препарат, усиливающий работу женских половых органов и отвечающий за желание женщины. . Давайте обо всем по порядку. Как действуют препараты для женского возбуждения? Как действует женский возбудитель на организм и почему не действует. . Женские возбудители – это препараты, задача которых заключается в прямой стимуляции . Иногда отсутствие эффекта от возбудителя наблюдается у женщин, которые страдают хроническими заболеваниями мочеполовой. Масштабный эксперимент с женскими возбудителями! . Действует как на мужчин (проверил на себе), так и на женщин. Подробно писал о нём в отзыве в своём первом посте об этом эксперименте: Возбуждающая таблетка Женская Виагра. Как соблазнить девушку? Заказать оригинал можно по ссылке ниже. Женский возбудитель создан для того чтобы возбудить женщину и расположить ее к занятию сексом. . Как действует женский возбудитель? Основное воздействие проявляется в следующем Женский возбудитель Rendez Vous (Рандеву) — комбинированный препарат, в состав которого входят как натуральные, так и синтетические ингридиенты. . Опыт и практика показывают, что возбудитель действует и на женщин — увеличивается сексуальное желание и чувствительность, выделяется больше смазки из. Выбираем самый эффективный женский возбудитель. Отзывы, цены в аптеках, плюсы и минусы, видео как действует . В большинстве своём, отзывы на женский возбудитель rendez vous положительные. Он позволяет женщине возбудиться за короткое время, почувствовать себя раскрепощенно и уверенно. 2 Как действует женский возбудитель. 3 Виды женских возбудителей. . Например, как женский возбудитель на просторах Интернета активно . Краткое описание. БАД, возбуждающий препарат для женщин на основе натуральных растительных средств. У женщин сексуальное влечение возникает не так просто, как у мужчин. Для быстрого возбуждения женщины идеально подойдут капли-афродизиаки. . Главная ▶ Блог ▶ Для женщин ▶ Какие есть возбуждающие капли для женского либидо?

народные возбудители для женщин

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое народные возбудители для женщин?

Классные капсулы, с их помощью я стала богиней любви и наконец-то получила предложение руки и сердца))) К тому в благодарность за столь бурные ночи, мой избранник теперь каждый день забрасывает меня подарками.

Эффект от применения народные возбудители для женщин

Распутница женский возбудитель мне порекомендовали на одном форуме, когда пожаловалась на свое либидо. Климакс, менопауза период естественный, но самочувствие не очень и эта сухость, вялость…Супружеский долг никто не отменял, и мужа я люблю, не хочу, чтобы ходил «налево». Капли принимала строго по инструкции, ни больше ни меньше, один раз в сутки по 20 капель на стакан воды. Уже после первого приема я ощутила такой прилив желания, набросилась на мужа сразу после работы. Он был в шоке, приятном, конечно! Я и сама от себя не ожидала такой активности, и смазки было предостаточно.

Мнение специалиста

Принимала Распутницу по рекомендации гинеколога. Я уже и забыла, каким приятным и расслабляющим может быть секс. Заново открыла для себя мужа. Оказывается, моя вторая половина еще очень даже ничего)))

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ народные возбудители для женщин необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Nika

Мы в браке уже достаточно много лет и переживали несколько кризисов, но в последнее время я очень переживала потому что мы стали слишком холодны. Распутница кардинально изменила наши отношения, вернула былой запал, страсть и любовь. Муж теперь торопится с работы и балует меня вкусными завтраками в постель.

Фекла Павловна

В составе препарата Распутница нет гормонов и синтетических веществ. Активные вещества Распутницы работают синергически, оказывая как самостоятельное воздействие на организм, так и комплексно с усилением эффекта друг друга.

Применять возбудитель Распутница, следует для соблазнения девушки и/либо для усиления ее ощущений во время секса. Применять следует по инструкции: Разбавить в воде несколько капель средства. За 10-20 минут до секса выпить. Наслаждаться результатом. Где купить народные возбудители для женщин? Принимала Распутницу по рекомендации гинеколога. Я уже и забыла, каким приятным и расслабляющим может быть секс. Заново открыла для себя мужа. Оказывается, моя вторая половина еще очень даже ничего)))
Возбудитель для женщин быстрого действия. . В статье рассмотрим народные средства для возбуждения женщин. Если верить статистическим данным, то около 70% женщин имитируют наслаждение и оргазм. Ореховый возбудитель для женщин. Данное средство станет отличным помощником для пар, которые хотят сделать свою половую жизнь более яркой. Он не поможет на первом свидании и начинает действовать спустя несколько употреблений, усиливая желание и страсть женщины на долгое время. Как сделать женский возбудитель: 5 лучших рецептов. Нетрадиционная медицина располагает десятками рецептов изготовления средств, усиливающих сексуальное влечение у женщин. Некоторые из них начинают действовать за считанные минуты, другие же приводят к нужному результату постепенно. СПОСОБЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ЖЕНСКОГО ВОЗБУДИТЕЛЯ В ДОМАШНИХ УСЛОВИЯХ+ видео брнус. . В качестве женского возбудителя, приготовленного в домашних условиях, можно использовать следующие блюда Чтобы изготовить женский возбудитель по народным бабушкиным рецептам, нужны природные ингредиенты. . Возбудить женщину можно не только каплями или таблетками. Есть блюда, которые увеличивают кровоток в половых органах. Так, для приготовления 4 порций риса потребуется: 200 г дикого риса; 10. Для возбуждения женщин не совсем обязательно принимать таблетки. Есть возбудитель для женщин быстрого действия в домашних условиях читайте как зделать здесь. Родиола розовая или настойка из красного корешка. Возьмите 100 гр сухого красного корня. Залейте 400 мл водки. После этого требуется настоять все это в течение 7 дней. Выпивать это нужно по 15 капель 3 раза в сутки за 20 минут до приема пищи. Длительность применения настойки от 2-4 недель. О других. Тело девушки — сложный механизм и не менее таинственный, чем сами женщины, даже учёным до сих пор не удалось разгадать все загадки, скрывающиеся в этих хрупких созданиях. Женские возбудители, совместимые с алкоголем: список. Женский возбудитель БАД: бывают ли? Как сделать самый эффективный, сильнейший женский возбудитель своими руками в домашних условиях: народные рецепты. Видео: Как возбудить женщину? Для каждой представительницы прекрасной. Возбудитель для женщин своими руками: просто и безопасно. Большинство рецептов женских возбудителей несложные, требуют недорогих и доступных ингредиентов. Есть, конечно, экзотические рецепты, но с ними лучше быть осторожнее, тем более, если ингредиенты незнакомые. Возбудитель для женщин своими руками в домашних условиях. Древнейший афродизиак шпанская мушка. . Как сделать возбудитель своими руками в домашних условиях. Народные средства для эрекции.
http://www.aplus.to/userfiles/vozbuditel_Kemerovo4687.xml
http://dlt-nkp.com/fileupload/vozbuditel_v_Dilizhane9651.xml

http://lodaloma.co.jp/fckeditor/userfiles/gde_zakazat_zhenskii_vozbuditel3387.xml
http://sport-power.com.ua/userfiles/intsest_podsypal_vozbuditelia3767.xml
Распутница женский возбудитель мне порекомендовали на одном форуме, когда пожаловалась на свое либидо. Климакс, менопауза период естественный, но самочувствие не очень и эта сухость, вялость…Супружеский долг никто не отменял, и мужа я люблю, не хочу, чтобы ходил «налево». Капли принимала строго по инструкции, ни больше ни меньше, один раз в сутки по 20 капель на стакан воды. Уже после первого приема я ощутила такой прилив желания, набросилась на мужа сразу после работы. Он был в шоке, приятном, конечно! Я и сама от себя не ожидала такой активности, и смазки было предостаточно.
народные возбудители для женщин
Классные капсулы, с их помощью я стала богиней любви и наконец-то получила предложение руки и сердца))) К тому в благодарность за столь бурные ночи, мой избранник теперь каждый день забрасывает меня подарками.
Женские возбудители – это препараты, задача которых заключается в прямой стимуляции либидо. Дополнительно они улучшают состояние мышц и слизистой оболочки, устраняют хроническую сухость влагалища. Побочные эффекты возбудителей — Мужской возбудитель быстрого действия: обзор . Мужской возбудитель, как обещает большинство производителей, значительно продлит половой акт и обеспечит острые оргастические. Для многих женщин и мужчин очень часто встает вопрос о состоянии сексуального возбуждения. Хорошо если вы заводитесь с пол оборота, а если это не так. Как же быть в этом случае? С этой целью был придуман женский. Никогда не замечал, что в каждой аптеке на стенде с гордым названием Планирование семьи стандартный набор: презервативы, смазки. Такие стимуляторы именуются женскими возбудителями. На сегодняшний день различают четыре их группы. К одной из них и относятся возбуждающие капли для женщин. Кстати, именно каплям, вполне заслуженно присваивают. Женские возбудители могут быть разных видов: капли, таблетки, жвачка. Также возбудитель можно приготовить в домашних условиях, либо купить в аптеке. Обзор популярных женских возбудителей. Рейтинг самых эффективных: Rendez Vous, Распутница, Шпанская мушка и другие. Какие можно купить в аптеках?

ᐅ Как приготовить возбудитель для женщин

Есть и определенная опасность, заключающаяся в том, что возможен прием женщиной возбудителя, не зная об этом. Это связано с отсутствием у препарата запаха, вкуса и цвета. По этой причине, если мужчина желает подарить своей возлюбленной волшебную ночь, стоит сказать ей об этом заранее.

Но гораздо безопасней и надежней использовать рецепты народной медицины и кулинарии, которые дают длительный эффект. Фитотерапевтический женский возбудитель своими руками. Как вывести осот с огорода народными средствами. ГлавнаяПолезные советыРазноеСделай сам. Существует не так много рецептов приготовления женского возбудителя в домашних условиях. Какие женские возбудители лучше купить в аптеке: в таблетках, каплях или порошках. Как возбудить девушку народными средствами — какими рецептами воспользоваться и как приготовить самостоятельно. Как сделать женский возбудитель в домашних условиях: народные рецепты. Женский возбудитель самый эффективный, лучший своими руками: рецепт. Женские возбудители: отзывы. Бабушкин рецепт женского возбудителя состоит из ряда ингредиентов . Как возбудить девушку народными средствами — какими рецептами воспользоваться и как приготовить самостоятельно. Статьи о потенции. Женщинам. Рецепты по приготовлению женского возбудителя в домашних условиях. Да и сделать возбудитель своими руками или воспользоваться народным методом дешевле и проще. Женские природные возбудители ⇩. Как действуют и зачем нужны натуральные афродизиаки? ⇩. Бабушкин рецепт ⇩. Эректильная дисфункция — лечение в… Простатиты у мужчин: лечение народными… Тем не менее, существуют народные средства и составы, которые помогают решить данную проблему. Приготовить женский возбудитель в домашних условиях не так уж и сложно – главное правильно подобрать эффективный рецепт. Но народная фантазия вкупе с природной изобретательностью сделали своё дело, благодаря чему на свет появилось множество снадобий, способных заменить Виагру. Вот рецепт одного из самых эффективных женских возбудителей Ародизиаки и аптечные средства. Как сделать женский возбудитель в домашних условиях. Как повысить либидо. Действительно, существует масса эффективных рецептов, которыми можно воспользоваться. King Fox женский возбудитель. Купить. +7 показать номер. Женский возбудитель Серебряная Лиса Silver Fox в каплях 12шт. Купить женский возбудитель Silver Fox для повышения сексуального влечения! . Растворённый в воде возбудитель для женщин Сильвер Фокс не имеет привкуса, аромата. женский возбудитель Silver Fox начинает действовать уже через 5 минут после приема. Растворённый в воде возбудитель для женщин Сильвер Фокс не имеет . В наличии. Купить. +7 показать номер. ЧЕРЕЗ КОРЗИНУ — получи скидку!!! Silver Fox женский возбудитель является афродизиаком природного происхождения. Silver Fox купить можно, как очень сильное возбуждающее средство, поэтому превышать допустимую дозу категорически запрещено. Женский возбудитель сильвер фокс выгодно отличается от аналогов своим быстрым заметным эффектом. Серебряная лиса для женщин, купить которую можно круглосуточно. Возбудители для женщин в Белгороде цены в аптеке, фото, мнение и где купить. Список возбудителей для женщин в Белгороде в аптеке. Фото Женская Виагра 4 таблетки. Однако не так давно на отечественный рынок попал природный женский возбудитель из Таиланда — товар с названием Silver Fox. Подробнее. Купить в аптеке: Silverfox (Сильвер Фокс) купить в аптеках Белгорода порой нельзя или. купить фокс женский возбудитель. Натуральные компоненты нового средства быстро и безопасно решат все деликатные мужские проблемы и улучшат здоровье в целом. Ищете где купить женский возбудитель в Белгороде? . Каталог Женских Возбудителей. Серебряная Лиса (Silver Fox). Количество. Цена за единицу. Стоимость. Бонусы. Купить. Если вы хотите купить сильвер фокс, серебряная лиса или купить Silver Fox по 100 руб, возбудители для женщин и женский возбудитель, или возбуждающие капли для женщин. Купить Афродизиак Серебряная Лиса можно в нашей Аптеке, сделав заявку по телефону: +7 (499) 506-08-46 либо отправив онлайн заявку для оформления заказа. Данный женский возбудитель — просто находка для мужчин. Silver Fox — Женский возбудитель. Картинка. Наименование. Количество. Купить. Силвер Фокс – женский аналог Виагры, предназначенный для устранения сексуальных расстройств. Хотите купить дешевле? Мы можем вам предложить гибкую систему скидок. По какой цене вы хотите приобести товар? . Детальное описание. Женский возбудитель Silver fox (Серебряная лисица) — новый препарат для женщин бразильского. Теле2. Натуральные средства для мужского и женского здоровья оптом и в розницу. при заказе от 10 упаковок. В наличииОптом и в розницу. Купить. Перезвоните мне. .Недавно столкнулась с неприятностью под названием «климакс». Кроме всех симптомов, основную проблему доставила сухость влагалища. Во время сексуальной близости с мужем стала испытывать дискомфортные ощущения.

Отзывы Как приготовить возбудитель для женщин

Rendez Vous станет идеальным вариантом профилактики для девушек, которых неуверенность и скованность сопровождает не только в половой, но и повседневной жизни. Кроме того, он подходит для женщин, которые страдают фригидностью. Отзывы Как приготовить возбудитель для женщин

Разрешается использовать средство и в профилактических целях, чтобы избежать снижения сексуального влечения. В особенности это актуально для женщин, которых в скором времени ждет наступление климакса. Меры профилактики подразумевают прием в следующей дозе: принимается по 5 капель средства дважды в день.

Поделюсь своим реальным отзывом об Как приготовить возбудитель для женщин. Эффективность женского возбудителя Rendez Vous подтверждается преимущественно отзывами покупателей. Препарат не имеет никаких документальных оснований, указывающих на целебные свойства капель. Как мы уже говорили, некоторые дамы жалуются на «Рандеву». Они подчеркивают, что после употребления возбудителя результат оказался нулевым. Может ли такое быть? Да. Нарушения эффективности действия капель вызваны индивидуальными особенностями организма. Поэтому нельзя точно сказать, кому Rendez Vous покажется бесполезной тратой денег. К счастью, основная масса девушек довольна действием препарата. Обязательно обратите внимание на то, какой эффект вы желаете получить. От этого зависит способ применения возбудителя. Если целью применения препарата является повышение либидо, то необходимо принять капли за 15 минут до предполагаемого сексуального контакта. А если вы хотите снизить симптомы климакса, то потребуется применять Рандеву до 5 раз в сутки.

Узнать подробнее о Как приготовить возбудитель для женщин

Ещё ссылки где можно узнать о Как приготовить возбудитель для женщин:Русский человек на Rendez Vous фоменкоКак приготовить возбудитель для женщин
Недорогой возбудитель для женщин, Недорогой возбудитель для женщин
Заказать женский возбудитель Rendez Vous, Женский возбудитель феромон
Возбудитель для женщин рассказыВозбудитель для женщин в сексшопе.

Купить-Как приготовить возбудитель для женщин

Возбудитель для женщин беларусь

Ключевые теги: женские возбудитель рейтинг, продажа женский возбудитель, возбудители для женщин стерлитамак.

Какие лекарства для женщин возбудитель, рандеву женский возбудитель цена, возбудитель женский аудио, какие лекарства для женщин возбудитель, есть реальный женский возбудитель.

Принцип действия Blue Wizard

Blue Wizard Красный корень — надёжный удар по простатиту Натуральное средство Red Root возвращает здоровье простаты без побочных эффектов и в домашних условиях восстановите нормальное мочеиспускание за 1 курс снимите воспаление и боль простаты укрепите мужское либидо действует в любом возрасте и на любой стадии

Продажа женский возбудитель как женский возбудитель действует на мужчину, возбуждающие капли для женщин в спб. Порно женская возбудитель реально работает женский возбудитель, возбудитель для женщин в аптеках купить спб запрещённый женский возбудитель. Купить Blue Wizard возбуждающие капли для женщин в Краснодаре женский возбудитель волгоград, rendez vous женский возбудитель купить челябинск.

Официальный сайт Blue Wizard возбуждающие капли для женщин

Состав Blue Wizard

Можно ли купить в аптеке женский возбудитель возбудитель для женщин в каплях название, женский возбудитель rendez vous вся правда. Купить женские возбудители в харькове продаю женский возбудитель, возбудитель женский рассказы найти женский возбудитель. Реально работает женский возбудитель таблетки возбудитель для женщин, женский возбудитель купить в харьков. Продаю женский возбудитель есть реальный женский возбудитель, возбуждающие интимные средства для женщин.

Результаты клинических испытаний Blue Wizard

Купить женский возбудитель в каплях в курске доза применения конского возбудителя для женщин, возбудитель для женщин в каплях название. Обзор женского возбудителя очень возбуждающее средство для женщин, таблетки возбудитель для женщин в аптеке купит женский возбудитель в воронеже. Возбудитель для женщин в нальчике как можно возбуждать женщину сексу, женский возбудитель в ростове.

Мнение специалиста

Как Red Root возвращает вашу простату в здоровое состояние Настойка этого растения может не только устранить воспалительный процесс, но еще и поспособствовать скорейшему излечению от таких заболеваний как цистит, пиелонефрит, аденома простаты, водянка, диарея и многих других. Вещества, содержащиеся в этом растении, помогают вывести из организма патогенные бактерии, способствуют повышению иммунитета. Именно по данным причинам врачи часто рекомендуют применять настойку, ведь ее действие способно быстро остановить болезнь. Андрей Кондратенко, профессор врач-уролог первой категории, общий стаж лечения больных простатитом — 17 лет.

Женские возбудители из подручных средств найти женский возбудитель, доступный женский возбудитель. Народные возбудители для женщин лекарство для женщины возбудитель, продаю женский возбудитель возбудитель таблетка для женщин. Безотказные женские возбудители женские возбудители недорогие, купить порошковый женский возбудитель.

Способ применения Blue Wizard

Капсулы: Принимать внутрь по 1 капсуле 2 раза в день за 30 мин до еды. Запивая большим количеством воды Курс лечения: 30 дней

Возбудители для женщин которые можно купить в аптеке в россии женские возбудители из подручных средств, женский возбудитель в лекарствах. Rendez vous женский возбудитель купить челябинск очень возбуждающее средство для женщин, таблетки возбудитель для женщин в аптеке народные возбудители для женщин. Специальный женский возбудитель таблетки возбудитель для женщин, специальный женский возбудитель.

Как заказать Blue Wizard?

Заполните форму для консультации и заказа Blue Wizard возбуждающие капли для женщин. Оператор уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 1-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении

Найти женский возбудитель таблетки возбудитель для женщин, возбудитель женский музыка. Женский возбудитель в нижнем новгороде купить рандеву женский возбудитель цена, женский возбудитель купить в харьков лекарство для женщины возбудитель. Где можно купить возбудитель для женщин в москве специальный женский возбудитель, женский возбудитель владивосток. Женские возбудители недорогие возбудитель женский капли интернет магазин, доступный женский возбудитель.

Можно ли купить в аптеке женский возбудитель, женский возбудитель купить в харьков, возбудитель таблетка для женщин, как можно возбуждать женщину сексу, женские возбудители детонатор, женский возбудитель купить в харьков, купить женский возбудитель в аптеке ярославль.
Официальный сайт Blue Wizard возбуждающие капли для женщин

Купить Blue Wizard возбуждающие капли для женщин можно в таких странах как:

Россия, Беларусь, Казахстан, Киргизия, Молдова, Узбекистан, Украина, Эстония, Латвия, Литва, Болгария, Венгрия, Германия, Греция, Испания, Италия, Кипр, Португалия, Румыния, Франция, Хорватия, Чехия, Швейцария, Азербайджан , Армения ,Турция, Австрия, Сербия, Словакия, Словения, Польша

Тоже пользовался Blue Wizard, понравился. Часто не вставал, особенно, когда подопью. Решил пройти полный курс. Даже утренняя эрекция появилась, которой сто лет уже не было.

Прочитал об Blue Wizard на официальном сайте. Впечатляет! Оставил заявку пока по акции дают. Да и такое средство точно нужно иметь в аптечке

Извиняюсь, не заметил на сайте сначала информацию про наложенный платеж. Тогда все в порядке точно, если оплата при получении. Пойду, оформлю себе тоже заказ.

Эффективный и безопасный возбудитель для женщин

Ключевые теги: хороший возбудитель для женщины, возбудитель для женщин владивосток, форум женский возбудитель серебряная лиса.

Цена на женский возбудитель в украине, женский возбудитель где купить в тюмени, женские возбудители без палева, таблетки возбудители для женщин в аптеке, где купить женский возбудитель в воронеже.

Принцип действия Blue Wizard

Цена на женский возбудитель в украине женский возбудитель смазка, женские возбудители купить украина. Женский возбудитель самый эффективный спрей женский возбудитель в секс шопе, какие самые лучшие женский возбудитель какой лучший женский возбудитель на форумах. Возбудитель для женщин владивосток возбудитель женский в чите, отзывы о женском возбудителе серебряная лиса.

Официальный сайт Blue Wizard возбуждающие капли для женщин

Состав Blue Wizard

Женский возбудитель ангел страсти женский возбудитель где купить в омске, аудио женский возбудитель aew audio exciter for. Silver fox женский возбудитель купить молдове купить женский возбудитель в аптеках москвы и, купить женский возбудитель в липецке можно ли принимать женские возбудители мужчине. Женские возбудители в тюмени возбудитель для женщин в аптеке название, rendez vous женский возбудитель купить в кемерово. Женский возбудитель цена где купить женский возбудитель в аптеках города, как приобрести женский возбудитель.

Результаты клинических испытаний Blue Wizard

Возбудитель для женщин в аптеке название женский возбудитель кривой рог купить, женские возбудители как действуют. Женские возбудители в тюмени женский возбудитель ангел страсти, возбудитель для женщин в каплях быстрого действия в аптеке купить женский возбудитель в аптеках москвы и. Какой возбудитель для женщины купить в обычной аптеке rendez vous женский возбудитель купить в кемерово, таблетки возбудители для женщин в аптеке.

Мнение специалиста

Купить возбудитель для женщины в харькове женские возбудители купить во владивостоке, какой возбудитель для женщин купить отзывы. Купить женский возбудитель в аптеках москвы и женские возбудители как действуют, натуральный возбудитель для женщины сильнодействующие капли возбуждающие для женщин. Таблетки возбудители для женщин в аптеке , существуют ли на самом деле женский возбудитель.

Способ применения Blue Wizard

Женский возбудитель в белгороде купить простые возбудители для женщин, возбуждающие капли для мужчин и женщин. Женский возбудитель русский секс капли для женщин возбудитель серебряная, какие самые лучшие женский возбудитель женский возбудитель сильного действия. Возбуждающие капли для женщин челябинск женские возбудители купить в ташкенте, цена на женский возбудитель в украине.

Как заказать Blue Wizard?

Возбудитель для женщин в аптеке название женские возбудители купить украина, какой возбудитель для женщины купить в обычной аптеке. Моментальный женский возбудитель возбудитель для женщин в белоруссии, купить возбудитель для женщин быстрого действия в воронеже какой возбудитель для женщин купить отзывы. Возбуждающие капли для женщин челябинск возбудители для женщин купить в зеленограде, купить женский возбудитель таблетки. Женские возбудители в тюмени возбуждающие капли для мужчин и женщин, сильнодействующие капли возбуждающие для женщин.

Купить возбудитель для женщин быстрого действия в воронеже, народные женские возбудители, возбудитель для женщин в каплях быстрого действия в аптеке, мужские и женские возбудитель, какой лучший женский возбудитель на форумах, возбудитель спрей для женщин, возбуждающие капли для женщин челябинск.
Официальный сайт Blue Wizard возбуждающие капли для женщин

Купить Blue Wizard возбуждающие капли для женщин можно в таких странах как:

Противомикробная активность видов Asteraceae в отношении бактериальных патогенов, выделенных от женщин в постменопаузе

Аннотация

Назначение

Исследование антибактериального действия водных экстрактов Bidens sulphurea , Bidens pilosa и Tanacetum vulgare , видов семейства сложноцветных, широко используемых для лечения мочеполовых инфекций.

Методы

Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) и минимальная бактериальная концентрация (МБК) экстрактов по отношению к стандартным штаммам Staphylococcus aureus (ATCC25923), Enterococcus faecalis (ATCC29212), Escherichia coli (ATCC0007uginosa) и (ATCC27853) и против бактерий, выделенных из культур вагинального секрета и мочи женщин в менопаузе с диагнозом рецидивирующей инфекции мочевыводящих путей (rUTI), определяли с помощью микроразведки бульона.

Результаты

Значения МИК трех экстрактов против грамположительных и грамотрицательных стандартных бактериальных штаммов варьировались от 7,81 до 125,00 мг / мл ^–1, а значения МБК — от 7,81 до 500,00 мг / мл ^–1. Однако B . sulphurea оказался более эффективным. В образцах мочи три экстракта подавляли рост коагулазонегативных Staphylococcus spp. И B . pilosa оказался наиболее активным экстрактом против E . coli по сравнению с другими. Для образцов вагинального секрета нет значительных различий в ингибировании коагулазо-положительных Staphylococcus spp. и P . Среди экстрактов найдено mirabilis . Т . vulgare и B . sulphurea были более эффективны в ингибировании коагулазонегативных Staphylococcus spp. по сравнению с B . пилоса . E . coli был более восприимчив к B . sulphurea по сравнению с экстрактом B . pilosa и T . vulgare экстрактов.

Заключение

Настоящие результаты свидетельствуют о потенциальном медицинском использовании видов сложноцветных, особенно B . sulphurea , в качестве терапевтического средства против бактерий, связанных с rUTI.

Образец цитирования: Кьявари-Фредерико, М. Н., Барбоса Л. Н., Карвалью душ Сантуш I, Ратти да Силва Г., Фернандес де Кастро А., де Кампос Бортолуччи В. и др.(2020) Антимикробная активность видов Asteraceae в отношении бактериальных патогенов, выделенных от женщин в постменопаузе. PLoS ONE 15 (1): e0227023. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0227023

Редактор: Томаш М. Карпинский, Познанский университет медицинских наук, ПОЛЬША

Поступила: 10 июля 2019 г .; Принята к печати: 10 декабря 2019 г .; Опубликовано: 6 января 2020 г.

Авторские права: © 2020 Chiavari-Frederico et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все данные содержатся в рукописи.

Финансирование: Авторы выражают благодарность Universidade Paranaense, программе для выпускников по лекарственным растениям и фитотерапии в основном вниманию и программе для специалистов по зоотехнике с упором на биологически активные продукты за финансовую поддержку.Эта работа была поддержана грантами Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq; № 800435 / 2018-4), Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES; № PNPDRUBAUCA (ARCA) (№ PNPD20132409-400480) ; № 47661.491.48325.12122016).

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Сокращения: КОЕ, колониеобразующий агрегат; МАР, множественная устойчивость к антибиотикам; MBC, минимальная бактериальная концентрация; MIC, минимальная ингибирующая концентрация; рути, Инфекции мочевыводящих путей

1.Введение

Инфекции мочевыводящих путей (ИМП) являются наиболее распространенными бактериальными инфекциями у женщин, и их частота повышается в период постменопаузы, главным образом из-за более низкой продукции эстрогена [1]. Среди типов ИМП рецидивирующие инфекции мочевыводящих путей (РУМП) являются одной из самых распространенных проблем в урологии. Недавние исследования показали, что РУМИ следует рассматривать как отличные от первичных ИМП [2].

Среди основных возбудителей рутинных инфекций — аэробные грамотрицательные бактерии, присутствующие в кишечной микробиоте, в том числе представители семейства Enterobacteriaceae, такие как роды Escherichia , Enterobacter , Klebsiella , Serratia Proteus , Salmonella и Shigella [3].При внебольничных ИМП на Escherichia coli приходится примерно 85% случаев. При хронических инфекциях и аномалиях мочевыводящих путей, связанных с больницей или структурой, наблюдается более равномерное распределение различных энтеробактерий с более высокой распространенностью ИМП, вызываемых Proteus spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp., Pseudomonas spp. И грамположительные Staphylococcus saprophyticus и Enterococcus spp.[4].

Бактериальная резистентность микроорганизмов, выделенных от инфекций мочевыводящих путей человека, хорошо известна, что приводит к снижению терапевтической эффективности, делая такие методы лечения неэффективными и дорогостоящими, продлевая течение болезни, увеличивая частоту осложнений и повышая уровень смертности. [5]. Таким образом, отсутствие новых терапевтических агентов, заменяющих те, которые стали неэффективными, вынудило искать новые альтернативы более эффективному лечению ИМП.

Лекарственные противомикробные препараты растительного происхождения для лечения ИМП являются обширным источником потенциальных лекарств, таких как семейство сложноцветных, которое насчитывает около 1600 родов и 23000 видов [6]. Среди основных видов этого семейства, широко используемых для лечения мочеполовых путей и бактериальных инфекций, являются Bidens sulphurea (Cav.) Sch. Bip., Bidens pilosa L. и Tanacetum vulgare L. [7–9].

Б . sulphurea , широко известный как желтый космос или «космо-амарело», «пикао-гранде» и «астра делает Мексику», является однолетним травянистым видом из Мексики, но он считается инвазивным, интенсивно распространенным и натурализованным на территориях Бразилии. . Его традиционно используют в Бразилии для лечения бактериальных инфекций и воспалений почек и мочевого пузыря [10–12]. Б . pilosa , широко известное как «picão-preto», «pica-pica» и «amor-de-mulher» [7], представляет собой небольшое однолетнее прямостоячее растение, произрастающее в Южной Африке и широко распространенное по всей территории мир [7,13].Этот вид традиционно используется в Бразилии для лечения бактериальных инфекций, воспалений и мочеполовых инфекций [7–9]. Т . vulgare , широко известное как «катинга-де-мулата», — это местное многолетнее растение, широко распространенное в Европе и Западной Азии [14]. Он широко используется в бразильской народной медицине для лечения бактериальных инфекций, цистита и почечных инфекций [8,14].

Несмотря на популярное использование этих видов для лечения бактериальных инфекций и инфекций мочеполовых путей, терапевтическая активность этих видов еще не исследована.В настоящем исследовании оценивалась потенциальная антимикробная активность водных экстрактов, которые были получены путем инфузий этих видов животных, как рекомендовано в народном использовании, против бактерий, собранных из образцов мочи и вагинальных выделений у женщин в постменопаузе с диагнозом rUTI.

2. Материалы и методы

2.1. Набор пациентов

До сбора клинических образцов исследование было одобрено Комитетом по этике исследований с участием людей UNIPAR (CAEE no.218.2.0000.0109). Участники предоставили устное и письменное согласие на сбор мочи и вагинального секрета для исследовательских целей. В исследование были включены женщины в постменопаузальном периоде (45–70 лет) с диагнозом ИМП (три эпизода ИМП за предыдущие 12 месяцев или два эпизода за последние 6 месяцев) [15]. Женщины со структурно-генетическими аномалиями в половой или мочевыводящей системах, генитальные дистопии выше, чем стадия 2 количественной оценки пролапса тазовых органов [16], генетический или лекарственный иммунодефицит, неврологический дефицит, влияющий на функцию мочевыводящих путей, или злокачественное заболевание тазовых органов, или женщины, которые имели пациенты, которые уже прошли лучевую терапию органов малого таза и принимали антибиотики в течение последних 4 недель на момент сбора образцов, были исключены из исследования [17].

2.2. Сбор клинических образцов

Всего было собрано 15 образцов мочи и 15 образцов вагинального секрета с использованием стерильных контейнеров и тампонов, содержащих среду Эймса с активированным углем (Transystem ^™, Copan Italia, Brescia, Италия), соответственно. Образцы были взяты у 15 пациентов, которые посещали частную клиническую практику с мая по июль 2018 года. Каждому участнику был выдан распечатанный лист с подробным описанием метода, который будет использоваться для сбора мочи.Его проинструктировали вымыть руки и очистить область гениталий водой с мылом, выбросить первую струю и собрать образцы мочи в стерильном контейнере. Сразу после сбора образцы были отправлены в Лабораторию профилактической ветеринарной медицины и общественного здравоохранения UNIPAR, Бразилия. Образцы транспортировались в ледяных условиях.

2.3. Идентификация клинических образцов

образцов мочи высевали на чашки, содержащие маннитоловый солевой агар и агар МакКонки, и инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов для выделения грамположительных и грамотрицательных аэробных бактерий.Сначала мазки помещали в пробирки, содержащие 3 мл среды Brain Heart Infusion (BHI), и инкубировали в печи при 37 ° C в течение 24 часов. После этого их высевали на чашки в соответствии с процедурой для образцов мочи. Впоследствии были выполнены макроскопические и микроскопические анализы и биохимические тесты [18]. Грамположительные каталаза-положительные кокки подверглись анализу на коагулазу для классификации коагулазо-положительных и коагулазонегативных Staphylococcus . Семейство Enterobacteriaceae было идентифицировано биохимически с использованием набора биохимических тестов из набора Enterobacteria Kit (NewProv, Парана, Бразилия) в соответствии с инструкциями производителя.

2.4. Определение чувствительности к противомикробным препаратам

Устойчивость к антибиотикам и чувствительность идентифицированных организмов определяли методом дисковой диффузии [19] с коммерчески доступными дисками метронидазола (50 мкг / диск), амоксициллина (10 мкг / диск), норфлоксацина (10 мкг / диск) и оксациллина. (10 мкг / диск). Образцы размораживали и добавляли в культуральную среду для выращивания каждого изолята и инкубировали. После роста бактериальный посевной материал подвергали падронизации на McFarland 0.5 и высевали на агар Мюллера-Хинтона с помощью стерильного тампона. Через 15 мин диски, пропитанные антимикробными препаратами, инкубировали при 37 ° C в течение 18–24 ч. Антибактериальную активность оценивали путем измерения диаметра зон задержки роста (в миллиметрах; включая диаметр диска 6,5 мм) для каждого из микроорганизмов. Зоны ингибирования измеряли в трех экземплярах.

2,5. Индекс множественной антибиотикорезистентности

Индекс множественной антибиотикорезистентности (MAR) каждого штамма был рассчитан по формуле Krumperman (1983) [20]: a / b , где a — количество антибиотиков, к которым конкретный изолят был устойчив, b — общее количество протестированных антибиотиков.

2.6. Растительный материал и препарат экстракта

Ботанический материал ( B . sulphurea и B . pilosa ) был получен из Медицинского сада Университета Паранаенсе (UNIPAR; S23 ° 47’55 ”, W53 ° 18’48”), Умуарама, PR , Бразилия. По одному экземпляру каждого вида зарегистрировали в Лекарственном саду Кампуса 2 UNIPAR (№ 131 и 40 соответственно). Воздушные части Т . vulgare были собраны в муниципальном питомнике Саудади-ду-Игуасу, PR, Бразилия (S25 ° 41’30.069 ”, W52 ° 37’06.207”), а эксикат был депонирован в гербарии Федерального технологического университета Параны в Дуа-Визиньюсе, PR, Бразилия (№ DVPR006294). Все виды были собраны в мае 2018 г. Водные экстракты растений были получены путем инфузии в соответствии с рекомендациями общепринятого использования [12] с небольшими изменениями. Высушенный и измельченный растительный материал (100 г, материал был измельчен в ножевой мельнице до гранулометрии 850 мкм) подвергали процессу экстракции путем настаивания 1 л кипящей воды.Экстракцию проводили до тех пор, пока экстракционная среда не достигала комнатной температуры (24 часа). Остаток отделяли фильтрованием, и супернатант ресуспендировали в этаноле (экстракт 1: 3 / этанол) для осаждения белков и полисахаридов, получая осадок и этанольный супернатант из инфузии (48 часов осаждения). После полного удаления органического растворителя ротационным выпариванием (3 часа / 400 мл; 45 ° C) экстракт подвергали лиофилизации (72 часа; -42 ° C).Конечные выходы экстрактов B . sulphurea , B . pilosa и T . vulgare составляли 21,43%, 17,45% и 23,13% соответственно. Экстракты хранили в морозильной камере до использования.

2.7. Газовая хроматография / масс-спектрометрия

Химические составляющие образцов экстракта были идентифицированы с использованием газофазного хроматографа (Agilent 7890 B), соединенного с масс-спектрометром (Agilent 5977 A), оборудованного капиллярной колонкой Agilent HP-5MS UI (30 м × 0.250 мм × 0,25 мкм). Для анализа вводили объем 1,0 мкл раствора, который был приготовлен растворением 20 мг B . sulphurea , B . pilosa и T . Использовали экстракты vulgare в 1,0 мл метанола. Аналитические условия были следующими: температура инжектора 280 ° C, работающая в шлицевом режиме (1: 2), линия передачи 280 ° C, поток газа-носителя (гелий) не менее 1 мл. Начальная температура колонки составляла 80 ° C (1 мин) с линейным изменением 2 ° C мин. ^–1 до достижения 185 ° C.Температура оставалась на уровне 185 ° C в течение 1 мин с последующим нагреванием при 9 ° C мин. ^-1 до достижения 275 ° C. Температура оставалась на уровне 275 ° C в течение 2 минут с последующим нагреванием при 25 ° C мин. ^-1 до 300 ° C. Затем температуру поддерживали на уровне 300 ° C в течение 1 мин. Выписки из Б . sulphurea , B . pilosa и T . vulgare подвергали сканированию с ионизацией электронным ударом при 70 эВ с соотношением масса / заряд 40–600 (m / z).Температура источника ионизации и температура квадруполя составляли 230 ° C и 150 ° C соответственно. Соединения были идентифицированы путем сравнения их масс-спектров с библиотекой NIST 11.0 и сравнения индексов удерживания (IR), которые были получены с помощью гомологической серии стандартов н-алкана (C7-C28; [21]).

2,8. Минимальная ингибирующая концентрация и минимальная бактерицидная концентрация экстрактов

Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) и минимальную бактериальную концентрацию (МБК) экстрактов против стандартных штаммов и бактерий, выделенных из культур вагинального секрета и мочи, определяли методом микроразбавления в бульоне с использованием бульона Мюллера-Хинтона в соответствии с CLSI [19 ] с модификациями.Растительный экстракт растворяли в Tween 80 (2%) и разводили в культуральной среде до начальной концентрации 500 мг / мл ^-1. Затем были приготовлены серийные десятичные разведения (1: 2) путем добавления культуральной среды для достижения концентраций в диапазоне 0,97 мг / мл ^-1. Таким образом, конечный объем 100 мкл (культуральная среда плюс экстракт) распределяли по 96-луночным планшетам, а также контроли культуральной среды и культуральной среды с экстрактом и твином. Бактерии были стандартизированы на McFarland 0.5 и инокулят доводят до ~ 10 ⁵ КОЕ / мл. Тесты проводили в трех экземплярах, и планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов. Считывание проводили после добавления 10 мкл 10% разбавленного хлорида 2,3,5-трифенилтетразолия с последующей инкубацией при 37 ° C в течение 30 минут. Рост бактерий рассматривался, когда лунки имели розовый оттенок после инкубации [22]. МИК была самой низкой концентрацией экстракта, которая подавляла рост бактерий. МБК определяли путем пересева 10 мкл культуры из каждой отрицательной лунки на чашках с агаром Мюллера-Хинтона, как описано выше [23].

2.9 Статистический анализ

Различия между группами оценивали с помощью дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Тьюки . Статистически значимыми считались значения p <0,05. Результаты выражаются как среднее значение ± стандартная ошибка среднего (SEM). Статистический анализ проводился с использованием программы Statistica 13.3.

3. Результаты

3.1. Влияние антибиотиков на бактериальные возбудители и их индекс MAR

Тридцать два образца бактерий были выделены у 15 женщин в постменопаузе, у которых была диагностирована рутинная инфекция, преимущественно из мочи (10; 31.25%) и вагинальные выделения (22; 68,75%). В образцах мочи и вагинального секрета были выявлены грамположительные ( Staphylococcus spp.) И грамотрицательные ( Escherichia coli и Proteus mirabilis ) бактерии.

Устойчивость идентифицированных организмов к антибиотикам определялась методом дисковой диффузии с использованием антибиотиков, которые обычно используются для лечения ИМП. В таблице 1 показан процент образцов мочи и вагинальных выделений, устойчивых к антибиотикам.В целом, мы наблюдали изоляты с множественной лекарственной устойчивостью, в основном из вагинальных выделений (48; 57,83%) и мочи (18; 51,42%).

Таблица 1. Процент устойчивости к антибиотикам (R) грамположительных бактерий ( Staphylococcus spp) и грамотрицательных бактерий ( Escherichia coli , Proteus mirabilis ), выделенных из образцов мочи и вагинального секрета пациенток в менопаузе с диагнозом инфекции мочеполовых путей.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0227023.t001

Результаты индекса MAR показали, что все протестированные изоляты мочеполовых путей Staphylococcus spp. (19 изолятов), E . coli (11 изолятов) и P . mirabilis (3 изолята) имел очень высокий индекс MAR (> 0,2; Таблица 2), что указывает на то, что образцы были отнесены к группе высокого риска.

3.2. Химический состав экстрактов

Таблица 3 показывает профиль газовой хроматографии и вероятный химический состав B . pilosa , T . vulgare и B . sulphurea экстрактов соответственно. Б . pilosa содержал β-ситостерин (22,33%, C ₂₉ H ₅₀ O, Mw = 414,39) в качестве наиболее распространенного соединения, этилизоаллохолат (17,52%, C ₂₆ H ₄₄ O _5)., Mw = 436,31), артеметин (12,84%, C ₂₀ H ₂₀ O ₈, Mw = 388,00), β-каротин (12,51%, C ₄₀ H ₅₆, Mw = 536.00), затем бетулин (11,18%, C ₃₀ H ₅₀ O ₂, Mw = 442,38), декановая кислота 1,1a, 1b, 4,4a, 5,7a, 7b, 8,9- декагидро-4a, 7b-дигидрокси-3- [гидроксиметил] -1,1,6,8-тетраметил-5-оксо-9a- H -циклопропа [3,4] бенз [1,2-e] азулен- 9,9a-диилэфир, [1aR (1aα, 1bβ, 4aβ, 7aα, 7bα, 8α, 9β, 9aα)] (8,53%, C ₄₀ H ₆₄ O ₈, Mw = 672,00), стигмастерин ( 4,02%, C ₂₉ H ₄₈ O, Mw = 412,37), 3,4,3 ‘, 4’-тетрагидроспириллоксантин (3,40%, C ₄₂ H ₆₄ O ₂, Mw = 600.49), этиловый эфир гексадекановой кислоты (2,35%, C ₁₇ H ₃₄ O ₂, Mw = 270,26), метиллиноленат (1,57%, C ₁₉ H ₃₂ O ₂, Mw = 292,24), фитол (1,18%, C ₂₀ H ₄₀ O, Mw = 296,30) и 7,8-эпоксиланостан-11-ол, 3-ацетокси (1,02%, C ₃₂ H ₅₄ O ₄, Mw = 502,40). Т . vulgare содержал артеметин (15,74%, C ₂₀ H ₂₀ O ₈, Mw = 388.00), веррукарол (15,61%, C ₁₅ H ₂₂ O ₄, Mw = 266,15), фитол (14,03%, C ₂₀ H ₄₀ O, Mw = 269,30), 7,8- Эпоксиланостан-11-ол, 3-ацетокси (13,12%, C ₃₂ H ₅₄ O ₄, Mw = 502,40), олеаноловая кислота (10,19%, C ₂₆ H ₄₄ O ₅, Mw = 456,36), затем следует этилизоаллохолат (9,31%, C ₂₆ H ₄₄ O ₅, Mw = 436,31), стигмастерола ацетат (7,43%, C ₃₁ H ₅₀ O ₂, Mw = 454.38), эргостерол (6,39%, C ₂₈ H ₄₄ O, Mw = 396,33), метиловый эфир гексадекановой кислоты (3,71%, C ₁₇ H ₃₄ O ₂, Mw = 270,26) и бетулин (0,58%, C ₃₀ H ₅₀ O ₂, Mw = 442,38). Б . sulphurea содержал артеметин (C ₂₀ H ₂₀ O ₈, Mw = 388,00) в качестве наиболее распространенного соединения (23,28%), за которым следовал 5-метилгептан-2-амин (19,39%, C ₈). H ₁₉ N, Mw = 129.15), β-ситостерин (17,15%, C ₂₉ H ₅₀ O, Mw = 414,39), изогумулон (8,18%, C ₂₁ H ₃₀ O ₅, Mw = 362,00), костунолид ( 6,54%, C ₁₅ H ₂₀ O ₂, Mw = 232,15), фитол (5,98%, C ₂₀ H ₄₀ O, Mw = 296,30), 7,8-эпоксиланостан-11-ол , 3-ацетокси (5,39%, C ₃₂ H ₅₄ O ₄, Mw = 502,40), этиловый эфир гексадекановой кислоты (3,90%, C ₁₇ H ₃₄ O ₂, Mw = 270 .26), метиловый эфир октадекановой кислоты (1,89%, C ₁₉ H ₃₈ O ₂, Mw = 294,47), этилизоаллохолат (1,86%, C ₂₆ H ₄₄ O ₅, Mw = 436,31), метиловый эфир тридекановой кислоты (1,43%, C ₁₇ H ₃₄ O ₂, Mw = 270,26), 9,19-циклохлоэстен-3,7-диол, 4,14-диметил-, 3-ацетат (1,38%, C ₃₁ H ₅₂ O ₃, Mw = 472,39), олеаноловая кислота (0,82%, C ₂₆ H ₄₄ O ₅, Mw = 456.36) и палюстровой кислоты (0,46%, C ₂₀ H ₃₀ O ₂, Mw = 302,22). После определения состава экстрактов мы оценили их бактерицидную эффективность в клинических образцах и проверили, подтверждается ли их популярное использование их этноботанической эффективностью против ИМП.

3.3. Антибактериальная активность

,00

Значения MIC для B . pilosa , T . vulgare и B . sulphurea Экстракты (таблица 4) против стандартных штаммов грамположительных и грамотрицательных бактерий варьировались от 7.81 до 125,00 мг мл ^-1. Значения МБК варьировались от 7,81 до> 500,00 мг / мл ^-1. Однофакторный дисперсионный анализ показал значительную разницу в активности против S . aureus ( F _2,6 = 8,64, p <0,05), P . aeruginosa ( F _2,6 = 7,79, p <0,05) и E . coli ( F _2,6 = 67,00, p <0.001) между экстрактами. Нет существенной разницы в ингибировании E . Среди экстрактов обнаружено faecalis бактерий ( F _2,6 = 4,19, p = 0,07). Апостериорный тест Тьюки показал, что экстракты B . pilosa (MIC = 13,02 мг / мл ^-1) и B . sulphurea (MIC = 7,81 мг / мл ^-1) были наиболее активными против S . aureus по сравнению с T . vulgare (MIC = 41,66 мг / мл ^-1; p <0,05). П . aeruginosa был более восприимчив к B . sulphurea (7,81 мг / мл ^-1) по сравнению с другими экстрактами ( p <0,05). E . coli значительно ингибировалась ( p <0,05) экстрактами T . vulgare (52,08 мг мл ^-1) и B . sulphurea (31.25 мг мл ^-1).

Таблица 4. Антибактериальная активность грамположительных и грамотрицательных бактериальных штаммов, выраженная как минимальная ингибирующая концентрация (MIC, мг / мл ^-1) и минимальная бактерицидная концентрация (MBC, мг / мл ^-1).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0227023.t004

В таблице 4 показаны результаты скрининга in vitro антибактериальной активности водных экстрактов против бактерий, выделенных из образцов мочи и вагинального секрета. от женщин в постменопаузе.В образцах мочи на коагулазо-отрицательные Staphylococcus spp. Не было обнаружено значительных различий между экстрактами ( F _2,12 = 1,72, p = 0,21). Односторонний дисперсионный анализ показал значительную разницу между экстрактами E . coli ( F _2,9 = 4,21, p <0,05) и P . mirabilis ( F _2,6 = 12,00, p <0,01).Апостериорный тест Тьюки показал, что экстракт B . pilosa (58,59 мг / мл ^-1) оказался наиболее активным против E . coli ( p <0,05) по сравнению с T . vulgare (125,00 мг мл ^-1) и B . sulphurea (78,12 мг / мл ^-1). Б . sulphurea (5,85 мг / мл ^-1) способствовал лучшему ингибированию ( p <0.05) из П . mirabilis по сравнению с экстрактами T . vulgare (125,00 мг мл ^-1) и B . pilosa (166,66 мг / мл ^-1).

Коагулазо-положительный и -отрицательный Staphylococcus spp. был выявлен в образцах вагинального секрета (Таблица 5). Не было обнаружено значительных различий между экстрактами в ингибировании коагулазо-положительных Staphylococcus spp. ( Факс _2,3 = 2.35, p = 0,24) и P . mirabilis ( F _2,3 = 6,0745, p = 0,08813). Значительная разница была обнаружена между группами в ингибировании коагулазонегативных Staphylococcus spp. ( F _2,30 = 4,82, p <0,05). Апостериорный тест Тьюки показал, что T . vulgare (8,78 мг / мл ^-1) и B . sulphurea (3,14 мг / мл ^-1) были более эффективны в ингибировании коагулазонегативных Staphylococcus spp.по сравнению с B . pilosa (37,63 мг / мл ^-1).

Таблица 5. Антибактериальная активность грамположительных и грамотрицательных бактерий, выделенных из образцов мочи и вагинального секрета пациенток в менопаузе с диагнозом инфекции мочеполовых путей, выражается как минимальная ингибирующая концентрация (МИК, мг / мл ^-1) и минимальная бактерицидная концентрация (МБК, мг / мл ^-1).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0227023.t005

По поводу запрета E . coli , односторонний дисперсионный анализ показал значительную разницу между экстрактами ( F _2,18 = 7,80, p <0,05). E . coli была более восприимчивой к экстракту B . sulphurea (62,5 мг / мл ^-1) по сравнению с экстрактами B . pilosa (102,67 мг / мл ^-1) и T . vulgare (116.07 мг мл ^-1). Значения МБК для клинических образцов варьировались от 7,81 до> 250,00 мг / мл ^-1.

4. Обсуждение

Инфекции, поражающие мочеполовые пути, вызываются грамположительными и грамотрицательными бактериями и часто встречаются как у молодых, так и у пожилых женщин. Дефицит эстрогенов играет важную роль в развитии бактериурии [24]. Эти инфекции представляют собой серьезную проблему для общественного здравоохранения, поскольку они рецидивируют у многих пациентов и могут привести к серьезным последствиям, таким как сепсис, пиелонефрит, повреждение почек, преждевременные роды и полирезистентные штаммы [2,25].Инфекции мочевыводящих путей также часто приводят к хроническим рецидивам, что приводит к частому применению антибиотиков или длительной антимикробной профилактике, что подвергает пациентов последствиям хронического использования этих лекарств и долгосрочным изменениям нормальной микробиоты влагалища и желудочно-кишечного тракта [ 26]. Хотя РУИ обычно не опасны для жизни, высокая заболеваемость значительно увеличивает расходы на здравоохранение и может негативно повлиять на качество жизни пациентов [2].

На основе этого тревожного роста уропатогенов, устойчивых к существующим лекарствам, и побочных эффектов антибиотиков, необходимо разработать новые терапевтические агенты, которые менее дороги и имеют меньше побочных эффектов [24].Предотвращение рецидивов инфекций мочеполовых путей и улучшение качества жизни пациентов было целью многих исследовательских групп [2]. Лечение травами может быть эффективным решением для эффективного лечения заболеваний, вызываемых бактериями [27].

Лекарственные растения содержат большое количество небольших молекул, обладающих антибиотическими свойствами, особенно терпеноидов, гликозидов, флавоноидов и полифенолов. Большинство этих небольших молекул обладают низкой активностью по сравнению с действием обычных антибиотиков, производимых бактериями и грибами.Однако, несмотря на менее сильные эффекты растительных производных, многие растения могут успешно бороться с инфекциями из-за синергетического действия их различных фармакологически активных соединений [28]. В настоящем исследовании наблюдались такие синергические противомикробные эффекты сырых экстрактов.

Препараты для перорального введения Б . pilosa , B . sulphurea и T . vulgare широко используются в сиденьях [7,12,14].В настоящем исследовании оценивалось действие экстрактов этих растений, приготовленных путем инфузии, против штаммов бактерий, выделенных из образцов мочи и вагинального секрета женщин в менопаузе с диагнозом ИМП, с целью проверки их популярного использования. Такое научное подтверждение полезно для пациентов, потому что использование инфузионных препаратов этих растений в форме сидячих ванн для лечения ИМП может быть связано с меньшим количеством системных побочных эффектов по сравнению с нынешними антибиотиками, которые используются в клинической практике.Важно отметить, что лекарственные растения считаются недорогими вариантами [29], что облегчило бы доступ пациентов к таким альтернативам лечения ИМП. Такие инфекции обычно рецидивируют и имеют высокую лекарственную устойчивость.

В настоящем исследовании повышенный индекс MAR наблюдался для Staphylococcus spp. (От 0,25 до 1,00), E . coli (от 0,33 до 1,00) и P . mirabilis (0,33), которые были выделены из образцов мочи и вагинального секрета.Согласно Крумперману [20], индекс MAR ≥ 0,2 наблюдается, когда изоляты подвергаются воздействию источников высокого риска заражения людей или животных. Интересно, что, несмотря на относительно высокие показатели устойчивости исследованных образцов, экстракты эффективно подавляли рост коагулазонегативных Staphylococcus spp. в образцах мочи и подавлял рост как коагулазо-положительных, так и -отрицательных Staphylococcus spp. в образцах вагинального секрета женщин в менопаузе, которым был поставлен диагноз ИМП.Этот эффект был более очевиден для экстракта B . sulphurea , с промежуточным действием T . vulgare . Коагулазонегативный Стафилококк считается комменсалом у человека, и его роль как этиологического агента в различных инфекционных процессах была признана, особенно при инфекциях мочевыводящих путей [30,31].

В дополнение к вовлечению Staphylococcus spp. в развитии ИМП энтеробактерии являются одной из основных причин ИМП [32].Бактерицидное и бактериостатическое действие Б . sulphurea видов также наблюдались против бактерий, особенно E . coli и P . mirabilis , которые были выделены из образцов мочи и вагинального секрета пациентов с рутинными инфекциями. Такой эффект важен, потому что ИМП имеют тенденцию к рецидивам или хронизации, и более 85% этих инфекций вызваны уропатогенным E . coli [33].

В дополнение к проявлению антибактериальной активности против грамотрицательных ( P . aeruginosa и E . coli ) стандартных штаммов, бактериостатический эффект B . sulphurea также наблюдалась с меньшей интенсивностью в T . vulgare и B . pilosa экстрактов. Бактериостатические препараты подавляют рост бактерий в окружающей среде, и действия иммунной системы необходимы для их устранения [34].Помимо бактериостатических эффектов, ранее сообщенные антиоксидантные эффекты этих лекарственных растений могут также модулировать иммунный ответ за счет увеличения интерлейкина-2, лимфоцитов и Т-клеток и уменьшения перекисного окисления липидов и синтеза простагландинов [35].

Предыдущий фитохимический анализ B . sulphurea идентифицировал фенольные соединения, феруловую кислоту, кофейную кислоту и сесквитерпеновые лактоны [36,37]. В Б . pilosa , присутствуют флавоноиды, терпеноиды, фенилпропаноиды, порфирины, а также алифатические и ароматические соединения.[38]. В Т . vulgare фенольные соединения, терпеноид, кофеилхиновая кислота, дугланин, людовицин и β-туйон могут быть найдены [39,40]. Хроматографический анализ экстрактов, оцениваемых в этом исследовании, показал, что артеметин, флавоноид с антиоксидантным действием [41], был основным компонентом экстрактов B . серы (21%), т . vulgare (11%) и B . pilosa (11%). Об антимикробной активности артеметина сообщалось и в других исследованиях [42,43].β-ситостерин, мощный антимикробный фитостерин, был обнаружен в экстрактах B . серы (15%) и B . pilosa (6%), но не в экстракте T . vulgare [44,45]. Кроме того, присутствие 5-метилгептан-2-амина, изогумулона, костунолида, тридекановой кислоты и метилового эфира октадекановой кислоты наблюдалось только в B . sulphurea экстракт. Антимикробное действие этих соединений хорошо описано в литературе [46–49].Действие этих соединений объясняет более высокий антимикробный эффект B . Экстракт sulphurea по сравнению с T . vulgare и B . пилоса .

5. Заключение

Этномедицинская форма Bidens pilosa , B . Препараты sulphurea и Tanacetum vulgare продемонстрировали антибактериальную активность в отношении стандартных штаммов и бактерий, выделенных из культур вагинального секрета и мочи женщин в менопаузе с диагнозом рецидивирующей инфекции мочевыводящих путей.Однако B . sulphurea оказался более эффективным. Таким образом, эти результаты предполагают потенциальное медицинское использование вида Asteraceae, B . sulphurea , как терапевтическое средство против бактерий, вызывающих рутинные инфекции.

Благодарности

Авторы благодарят Ану Карину Варгас Соарес, Аилтона да Круз Мело и Рикардо Феррейру да Силву за их помощь в проведении экспериментов, а также UNIPAR и Fundação Araucaria за предоставление исследовательского гранта и стипендий, которые позволили провести это исследование.

Ссылки

1. Каретто М., Джаннини А., Руссо Э., Симончини Т. Профилактика инфекций мочевыводящих путей после менопаузы без антибиотиков. Maturitas. Elsevier Ireland Ltd; 2017; 99: 43–46. pmid: 28364867
2. Джанг Дж.Ф., Куо ХК. Последние достижения в области рецидивирующих инфекций мочевыводящих путей от патогенеза и биомаркеров до профилактики. Цзы Чи Мед Дж. 2017; 29: 131–137.
3. Коста ЛК, де Ф Белен Л., де Фе Силва П.М., душ С. Перейра Х., да Силва Жуниор Э.Д., Лейте Т.Р. и др.Infecções urinárias em pacientes ambulatoriais: prevalência e perfil de resistência aos antimicrobianos. Rbac. 2010. 42: 175–180.
4. Mazili PML, Carvalho Júnior AP, Almeida FG. Infecção do trato urinário. Rev Bras Med. 2011; 68: 74–81.
5. Блейк Дж. Менопауза: практика, основанная на доказательствах. Лучшая практика Res Clin Obstet Gynaecol. 2006; 20: 799–839. pmid: 17084674
6. Bessada SMF, Barreira JCM, Oliveira MBPP. Виды Asteraceae с наиболее выдающейся биоактивностью и их потенциальное применение: обзор.Ind Crops Prod. Elsevier B.V .; 2015; 76: 604–615.
7. Борхес С.К., Матос Т.Ф., Морейра Дж., Россато А.Э., Занетт В.К., Амарал ПА. Bidens pilosa L. (Asteraceae): традиционное использование в сообществе южной Бразилии. Rev Bras Plantas Med. 2013; 15: 34–40.
8. Коэльо Де Соуза Г., Хаас А.П., фон Позер Г.Л., Шаповал Э.С., Элизабетски Э. Этнофармакологические исследования противомикробных средств на юге Бразилии. J Ethnopharmacol. 2004. 90: 135–143. pmid: 14698521
9.Oliveira DF, Pereira AC, Figueiredo HCP, Carvalho DA, Silva G, Nunes AS и др. Антибактериальная активность экстрактов растений из южных регионов Бразилии. Фитотерапия. 2007. 78: 142–145. pmid: 17169500
10. Медейрос Н.Ф., Сейшас Д.П., Батиста Дж.К., Алмейда В.Р., Сантос ЮК. Регулирование в зависимости от плотности у сорняка Bidens sulphurea (Cav.) Sch. Бип. (Сложноцветные). J Environ Anal Prog. 2017; 2: 7–10.
11. Dias HJ, Vieira TM, Carvalho CE, Aguiar GP, Wakabayashi KAl, Turatti ICC, et al.Скрининг отобранных растительных экстрактов на их антимикробную активность против оральных патогенов. Int J Дополнение Alt Med. 2017; 6: 00188.
12. Oliveira SGD, Moura FRR, Demarco FF, Nascente PS, Pino ABD, Lund RG. Этномедицинское исследование по фитотерапии с участием специалистов и пациентов из отделений базовой медицинской помощи в единой системе здравоохранения Бразилии. Журнал этнофармакологии. 2012; 140: 428–437. pmid: 22338646
13. Бартоломе А.П., Вильясеньор И.М., Ян В.С.. Bidens pilosa L. (Asteraceae): ботанические свойства, традиционное использование, фитохимия и фармакология. Доказательная база данных Complement Altern Med. 2013; 2013.
14. Се Г, Щепеткин ИА, Куинн МТ. Иммуномодулирующая активность кислых полисахаридов, выделенных из Tanacetum vulgare L. Intenational Immunopharmacol. 2007; 7: 1639–1650.
15. Neilson JP. Эстрогены для предотвращения рецидивов инфекции мочевыводящих путей у женщин в постменопаузе.Obstet Gynecol. 2008; 112: 689–690. pmid: 18757671
16. Персу К., Чаппл С.Р., Цауни В., Гуту С., Джеавлет П. Система количественной оценки пролапса тазовых органов (POP-Q) — новая эра в постановке тазового пролапса. J Med Life. 2011; 4: 75–81. pmid: 21505577
17. Томас-Уайт К., Форстер С.К., Кумар Н., Ван Куикен М., Путонти К., Старес М.Д. и др. Культивирование бактерий женского мочевого пузыря показывает взаимосвязанную урогенитальную микробиоту. Nat Commun. Springer US; 2018; 9: 1–7. pmid: 29674608
18.Конеман Э, Аллен С. Diagnostico Microbiologico: Texto Y Atlas En Color. 6-е изд. Médica, Panamericana, редакторы. Буэнос-Айрес: Медика Панамерикана; 2008.
19. Институт клинических и лабораторных стандартов (2015) Стандарты эффективности тестирования чувствительности к противомикробным препаратам: 25-е информационное приложение (M100-S25), CLSI, Wayne, PA.
20. Крумперман PH. Множественное индексирование устойчивости к антибиотикам Escherichia coli для выявления источников фекального загрязнения пищевых продуктов с высоким риском.Appl Environ Microbiol. 1983; 46: 165–170. pmid: 6351743
21. Адамс Р.П. Идентификация компонентов эфирных масел методом газовой хроматографии / масс-спектроскопии. 4-е изд. Allured Bussiness Media, США; 2012.
22. Duarte MCT, Figueira GM, Sartoratto A, Rehder VLG, Delarmelina C. Анти-кандидозная активность бразильских лекарственных растений. Журнал этнофармакологии; 2005. 97: 305–311. pmid: 15707770
23. Сильва Д.Р., Эндо Э.Х., Накамура К.В., Свидзинский Т.И., Де Соуза А. и др.Химический состав и антимикробные свойства Piper ovatum Vahl. Молекулы. 2009. 14: 1171–1182. pmid: 117
24. Раз Р. Инфекция мочевыводящих путей у женщин в постменопаузе. Корейский Дж. Урол. 2011; 52: 801–808. pmid: 22216390
25. Флорес-Мирелес А.Л., Уокер Дж. Н., Капарон М., Халтгрен С.Дж. Инфекции мочевыводящих путей: эпидемиология, механизмы заражения и варианты лечения. Nat Rev Microbiol. 2015; 13: 269–284. pmid: 25853778
26.Костакиоти М., Халтгрен С.Дж., Хаджифрангискоу М. Молекулярный план уропатогенной вирулентности Escherichia coli дает ключи к разработке терапевтических средств против вирулентности. Вирулентность. 2012; 3: 592–593. pmid: 23154288
27. Шармин Р., Хоссейн М.Н., Рахман М.М., Фойсал М.Дж., Миа М.Ф. In-vitro антибактериальная активность водного экстракта трав против множественной лекарственной устойчивости Klebsiella sp. выделен из клинических образцов человека.Int Curr Pharm J. 2012; 1: 133–137.
28. Хемаисвария С., Крутивенти А.К., Добл М. Синергизм между натуральными продуктами и антибиотиками против инфекционных заболеваний. Фитомедицина. 2008; 15: 639–652. pmid: 18599280
29. Раскин И., Рыбницкий Д.М., Комарницкий С., Илич Н., Пулев А., Борисюк Н. и др. Растения и здоровье человека в ХХI веке. Trends Biotechnol. 2002. 20: 522–531. pmid: 12443874
30. Zeeuwen PLJM, Kleerebezem M, Timmerman HM, Schalkwijk J.Микробиом и кожные заболевания. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2013; 13: 514–520. pmid: 23974680
31. Мур К.Н., Дэй Р.А., Альберс М. Патогенез инфекций мочевыводящих путей: обзор. J Clin Nurs. 2002; 11: 568–574. pmid: 12201883
32. Мартино MDV, Toporovski J, Mímica IM. Métodos bacteriológicos de triagem em infacções do trato urinário na infância e adolescência. Jornal Brasileiro de Nefrologia. 2002; 24: 71–80.
33. Фоксман Б.Эпидемиология инфекции мочевыводящих путей. Нат Рев Урол. 2010. 7: 653–660. pmid: 21139641
34. Кохански М.А., Дуайер Д.Дж., Коллинз Дж.Дж. Как антибиотики убивают бактерии: от мишеней до сетей. Nat Rev Microbiol. 2010; 8: 1–24.
35. Рыцарь JA. Обзор: свободные радикалы, антиоксиданты и иммунная система. Ann Clin Lab Sci. 2000. 30: 145–158. pmid: 10807157
36. Сильва Б.П., Непомуцено М.П., Варела Р.М., Торрес А., Молинилло Дж.М.Г., Алвес ПЛКА и др.Исследование фитотоксичности Bidens sulphurea Sch. Бип. как предварительный подход к борьбе с сорняками. J. Agric. Food Chem. 2017; 65, 25: 5161–5172. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.7b01922 pmid: 28605187
37. Деба Ф., Суан Д.Т., Ясуда М., Тавата С. Гербицидная и фунгицидная активность и идентификация потенциальных фитотоксинов из Bidens pilosa L. var. radiata Scherff. Биология и борьба с сорняками 2007; 7, 77–83. https://doi.org/10.1111/j.1445-6664.2007.00239.x
38. Бартоломе А.П., Вильясеньор И.М., Ян В.С.. Bidens pilosa L. (Asteraceae): ботанические свойства, традиционное использование, фитохимия и фармакология. Доказательная дополнительная и альтернативная медицина. 2013; 1–51. http://dx.doi.org/10.1155/2013/340215
39. Баранаускене Р., Казернавичюте Р., Пукальскене М., Мажджерене Р., Венскутонис ПР. Агроочистка Tanacetum vulgare L. в ценные продукты и оценка их антиоксидантных свойств и фитохимического состава.Промышленные культуры и продукты. 2014; 60, 113–122. https://doi.org/10.1016/j.indcrop.2014.05.047
40. Росселли С., Бруно М., Раймондо Ф.М., Спадаро В., Варол М., Копарал А.Т. и др. Цитотоксический эффект эвдесманолидов, выделенных из цветков Tanacetum vulgare ssp. Siculum. Молекулы. 2012; 17, 8186–8195. https://doi.org/10.3390/molecules17078186 pmid: 22777187
41. Шридеви В.К., Чохан Х.С., Сингх Н.К., Сингх С.К. Антиоксидантное и гепатопротекторное действие этанольного экстракта Vitex glabrata на индуцированное тетрахлорметаном повреждение печени у крыс.Nat Prod Res. 2012; 26: 1135–1140. pmid: 22054305
42. Эрнандес М.М., Херасо К., Вильярреал М.Л., Варгас-Ариспуро И., Аранда Э. Биологическая активность сырых растительных экстрактов из Vitex trifolia L. (Verbenaceae). J Ethnopharmacol. 1999; 67: 37–44. pmid: 10616958
43. Цутия Х., Сато М., Миядзаки Т., Фудзивара С., Танигаки С., Охьяма М. и др. Сравнительное исследование антибактериальной активности фитохимических флаванонов против метициллин-резистентного Staphylococcus aureus .J Ethnopharmacol. 1996; 50: 27–34. pmid: 8778504
44. Сен А., Дхаван П., Шукла К.К., Сингх С., Теджовати Г. Анализ ИК, ЯМР и антимикробной активности β-ситостерина, выделенного из Momordica charantia . Sci Secur J Biotechnol. 2012; 1: 9–13.
45. Chattopadhyay D, Arunachalam G, Mandal AB, Sur TK, Mandal SC, Bhattacharya SK. Антимикробная и противовоспалительная активность фольклора: Экстракт листьев Mallotus peltatus . J Ethnopharmacol.2002. 82: 229–237. pmid: 12242000
46. Балан Р.С., Падмини В., Лаванья А., Поннувель К. Оценка антимикробной активности глицинатных и карбонатных производных холестерина: Синтез и характеристика. Сауди Фарм Дж. 2016; 24: 658–668. pmid: 27829808
47. Чой К., Кочи Дж., Ортега М., Джеффри Б., Ривьер Дж., Монтейро-Ривьер Н. Оценка механической токсичности гексагидроизогумулона в гепатоцитах собак, проксимальных канальцах почек, мезенхимальных стволовых клетках костного мозга и энтероцитоподобных клетках.Int J Vet Heal Sci Res. 2016; 04: 88–103.
48. Алаагиб РМО, Аюб СМЗ. О химическом составе и антибактериальной активности Saussurea lappa (Asteraceae). Pharma Innov J. 2015; 4: 73–76.
49. Каннан Р.Р., Арумугам Р., Анантараман П. Химический состав и антибактериальная активность индийских морских трав против патогенов мочевыводящих путей. Food Chem. Elsevier Ltd; 2012; 135: 2470–2473. pmid: 22980830

Путь Toll лежит в основе полового диморфизма хозяина по устойчивости к грамотрицательным и грамположительным бактериям у спарившихся дрозофил

Резюме

Предпосылки

Все чаще признается, что половой диморфизм хозяина вызывает сильные различия в исходе инфекционного заболевания, но механизмы, лежащие в основе иммунологических различий между мужчинами и женщинами, остаются плохо изученными.Здесь мы использовали Drosophila melanogaster для оценки и анализа полового диморфизма врожденного ответа на системную бактериальную инфекцию.

Результаты

Мы продемонстрировали половой диморфизм восприимчивости к инфекции широким спектром грамположительных и грамотрицательных бактерий. Мы обнаружили, что как девственные, так и спарившиеся самки более подвержены большинству, но не всем инфекциям, чем спарившиеся самцы. Мы более подробно исследовали более низкую устойчивость самок к инфекции Providencia rettgeri , грамотрицательной бактерией, которая естественным образом инфицирует D.Меланогастер . Мы обнаружили, что у женщин больше фагоцитов, чем у мужчин, и что удаление гемоцитов не устраняет диморфизм устойчивости к P. rettgeri , поэтому наблюдаемый диморфизм не является следствием различий в клеточном ответе. Путь Imd имеет решающее значение для продукции антимикробных пептидов в ответ на грамотрицательные бактерии, но мутанты по передаче сигналов Imd продолжали демонстрировать диморфизм, хотя оба пола демонстрировали сильно сниженную устойчивость.Вместо этого мы обнаружили, что путь Toll ответственен за диморфизм устойчивости. Путь Toll диморфен по геномной конститутивной экспрессии генов и по индуцированному ответу на инфекцию. Передача сигналов Toll является диморфной как по конститутивной передаче сигналов, так и по индуцированной активации в ответ на инфекцию P. rettgeri . Диморфизм активации пути может быть определенно отнесен к опосредованной персефоне иммунной стимуляции, при которой путь Toll запускается в ответ на факторы вирулентности патогенного происхождения.Мы также обнаружили, что в отсутствие передачи сигналов Toll самцы становятся более восприимчивыми, чем самки, к грамположительному энтерококку Enterococcus faecalis . Это изменение восприимчивости между мужскими и женскими мутантами пути Toll по сравнению с хозяевами дикого типа подчеркивает ключевую роль пути Toll в половом диморфизме D. melanogaster в устойчивости к инфекции.

Заключение

В целом, наши данные демонстрируют, что активность Toll-пути различается у мужчин и женщин D.melanogaster в ответ на бактериальную инфекцию, таким образом идентифицируя передачу сигналов врожденного иммунитета как детерминант диморфизма полового иммунитета.

Электронные дополнительные материалы

Онлайн-версия этой статьи (doi: 10.1186 / s12915-017-0466-3) содержит дополнительные материалы, которые доступны авторизованным пользователям.

Ключевые слова: Половой диморфизм, Врожденный иммунитет, Антимикробные пептиды, Drosophila melanogaster , Toll pathway

Предпосылки

Наиболее разительными различиями между людьми в популяции часто являются различия между полами.Такой диморфизм часто характеризуется очевидными различиями в морфологии и поведении, а также рядом различий в физиологических функциях, включая иммунитет, метаболизм и исход болезни [1]. Пол хозяина влияет как на динамику инфекций [2], так и на симптомы хозяина [3], с возможным влиянием на адаптацию паразита к хозяину, когда передача является предвзятой по признаку пола [4]. Несмотря на множество примеров полового диморфизма исходов болезней [3, 5, 6], характеристика этих различий в значительной степени упускается из виду в медицинских исследованиях и исследованиях природных систем [7–11].Здесь мы использовали Drosophila melanogaster , чтобы понять основы полового диморфизма врожденной иммунной системы.

D. melanogaster — мощная модельная система с четко выраженным врожденным иммунным ответом [12]. Клеточный ответ на бактерии состоит из защитного фагоцитоза специализированных клеток, называемых плазматоцитами (функциональный эквивалент макрофагов млекопитающих). Гуморальный ответ у взрослых характеризуется окислительной меланизацией и производством антимикробных пептидов (АМП).Продукция AMP регулируется двумя путями, Imd и Toll, которые гомологичны TNF позвоночных и Toll-подобным путям, соответственно [12]. Путь Imd активируется при обнаружении пептидогликана, продуцируемого грамотрицательными бактериями, тогда как путь Toll реагирует на пептидогликан большинства грамположительных бактерий и на протеазы, секретируемые во время патогенных инфекций [13]. Активация каждого из этих путей приводит к ядерной транслокации факторов транскрипции в семействе NF-κB, вызывая устойчивый транскрипционный ответ на инфекцию [14, 15]. D. melanogaster демонстрирует половой диморфизм в исходе болезни. Недавние исследования показали, что мужчины и женщины различаются по реакции на кишечную [16] и системную бактериальную инфекцию [17, 18], а также на инфекцию патогенными грибами [19, 20] и вирусами [21]. Однако молекулярная основа этого диморфизма остается неизвестной.

Здесь мы устанавливаем, что инфицирование широким спектром грамположительных и грамотрицательных бактерий приводит к половому диморфизму как в беспородных, так и в инбредных популяциях спарившихся D.Меланогастер . Это связано не только с описанной ранее [22–24] повышенной восприимчивостью самок при спаривании. Мы подробно анализируем генетическую и механистическую основу диморфного ответа на инфекцию Providencia rettgeri , грамотрицательным бактериальным патогеном, который естественным образом инфицирует диких D. melanogaster . Мы обнаружили, что сигнальный путь Toll сексуально диморфен в геномной конститутивной экспрессии генов и в индуцированном ответе на инфекцию. Более высокая экспрессия сигнальных генов Toll и более высокая активность передачи сигналов Toll, опосредованной персефонами, объясняют более высокую устойчивость мужчин по сравнению с женщинами.

Методы

Хозяева и генотипы

D. melanogaster выращивали до зрелого возраста на глюкозно-дрожжевой среде (100 г / л дрожжей, 100 г / л глюкозы, 1% агар). На 2-й день после заражения взрослые особи были изолированы в группах по пять самцов и пять самок в каждой пробирке. Все эксперименты проводились со спарившимися особями через 5-8 дней после эклозии, если не указано иное. Хозяйство и эксперименты проводились при 24 ° C (± 1 ° C) с циклом 12 ч: 12 ч свет: темнота. Мы использовали разные D.melanogaster генотипов — Canton-S (запас Bloomington # 1), Oregon R (Bloomington stock # 5) и w ¹¹¹⁸ (запас Bloomington # 6326) как лабораторные штаммы «дикого типа» и аутбредная популяция, полученная из глобальной Diversity Lines [25, 26] любезно предоставлены Дж. Эйролесом и А. Кларком. Для маркировки фагоцитов мы использовали репортерные линии Hemolectin-Gal4> UAS-GFP , eater-nls :: GFP , Peroxidasin-Gal4> UAS-GFP и eater-Gal4> UAS-dsred [27 –29] . Чтобы проверить вклад различных компонентов врожденного иммунитета в половой диморфизм в выживаемости до инфекции, мы использовали серию нулевых мутантов, а именно (1) PPO1 ^{до н.э.} fj ¹ вес ¹ [30] и тройной мутант PPO1 ^Δ, 2 ^Δ, 3 ¹ [31, 32], которые имеют недостаточную меланизацию, (2) PGRP-LE ¹¹² ; +; PGRP-LC ^ΔE [33], imd ¹⁰¹⁹¹ [34], dTAK1 ^D10 [35] и Relish E20 [36], которые имеют недостаточную функцию пути Imd, и (3) spz ^rm7 / TM6C [37], модSP ^α33 [38] и psh ¹ [39], которые имеют недостаточную функцию пути Toll.Чтобы проверить вклад клеточного иммунитета, мы использовали мух с истощенными фагоцитами, созданными путем индукции проапоптотического гена Bax в Hml-экспрессирующих гемоцитах ( Hml-Gal4> UAS-GFP , UAS-bax , Gal80ts ) [40, 41]. Мы избежали потенциально пагубных последствий истощения фагоцитов для развития, выращивая мух при температуре 18 ° C до окукливания, а затем переводя только что выведенных взрослых особей на 29 ° C в течение 3 дней, стимулируя экспрессию токсина bax. Затем мух с истощенными фагоцитами возвращали к температуре 25 ° C на 2 дня перед инъекцией.Поскольку у взрослых особей D. melanogaster отсутствует кроветворный орган, эти мухи оставались без фагоцитов даже после возвращения к температуре 25 ° C (дополнительный файл 1: рисунок S4A).

Бактериальные штаммы и инфекция

Мы использовали различные бактериальные штаммы, включая грамотрицательные и грамположительные бактерии, которые, как известно, различаются по вирулентности у D. melanogaster . Для грамотрицательных бактерий мы использовали Pectinobacterium carotovora carotovora 15 (ранее известную как Erwinia carotovora carotovora 15 ), Ecc15 -GFP [42] и Escherichia coli (штамм pEGFP, Mach2-T1). вирулентность (т.е., не убивает в низкой дозе), а также штаммы двух видов Providencia , выделенных из выловленных в дикой природе D. melanogaster [43, 44], а именно P. rettgeri (штамм Dmel и его GFP-трансформированное производное, используемое в экспериментах по визуализации), которое является умеренно вирулентным (т. Е. Убивает 80–50% зараженных мух при низкой дозе), и P. alcalifaciens (штамм Dmel ), который является высокопатогенным (т.е. , все мухи, зараженные низкой дозой, погибают в течение суток).Для грамположительных бактерий мы использовали Enterococcus faecalis , умеренно вирулентную бактерию, выделенную из выловленных в дикой природе D. melanogaster [45] и Staphylococcus aureus (PIG1), высоковирулентной бактерии. Жидкие культуры каждой бактерии выращивали до насыщения в течение ночи при 37 ° C, за исключением Ecc15 , который выращивали при 29 ° C. Насыщенные культуры осаждали, затем ресуспендировали и разбавляли в фосфатно-солевом буфере (PBS, pH 7,4) до оптической плотности (OD) 0.1 (длина волны 600 нм), если не указано иное. Мы вводили 23 нл бактериальной суспензии в брюшную полость каждой мухи с помощью Nanoject II (Drummond), что соответствует дозе приблизительно 3000 жизнеспособных бактерий на муху (для OD = 0,1). В качестве лечения ран использовали инъекцию такого же объема стерильного PBS. Мухи, которым вводили PBS, во время экспериментов демонстрировали минимальную смертность или ее отсутствие. Мух анестезировали CO ₂ в течение менее 5 минут во время процедуры инъекции, а затем наблюдали вскоре после инъекции, чтобы подтвердить восстановление после манипуляций.Количество индивидуумов и экспериментальных повторений указано как «df +1» для фактора «Эксперимент» в каждом анализе, приведенном в подписях к рисункам.

Выживаемость хозяина

Мы отслеживали выживаемость хозяина после инъекции в группах из 50 самцов и 50 самок, содержащихся вместе в 900-миллилитровых пластиковых коробках с неограниченным доступом к пище, отслеживая выживаемость ежедневно в течение 10 дней, если не указано иное. Мы сосредоточили наше исследование на первых 10 днях заражения, чтобы избежать взаимодействия между влиянием «пола» и «возраста» в ответ на инфекцию.Люди, жившие через 10 дней, регистрировались как цензурированные наблюдения. В экспериментах, в которых сравнивался половой диморфизм между генетическими линиями, инъецированные особи содержались поодиночке во флаконах, чтобы избежать возможных мешающих эффектов плотности из-за разницы в уровне смертности среди групп. Различия в выживаемости хозяев были проанализированы с использованием смешанной модели пропорциональных рисков Кокса, где «Пол» и «Доза» были главными эффектами, а «Репликация» — случайным эффектом с использованием пакета R «Выживание» [46]. Кокс.zph из того же пакета использовалась, чтобы убедиться, что данные соответствуют предположениям подхода пропорциональных опасностей.

Бактериальная нагрузка

Для мониторинга бактериальной нагрузки мух индивидуально гомогенизировали в 500 мкл стерильного PBS с помощью HT-гомогенизатора (OPS Diagnostics). Затем гомогенат разводили 1:10 в PBS и 50 мкл этой суспензии высевали на агар LB, используя автопланшетный спиральный планшет WASP II (Microbiology International). Планшеты инкубировали в течение ночи при 37 ° C (эндогенная микробиота не появлялась на чашках LB в это время), и бактериальные колонии подсчитывали с помощью автоматического счетчика колоний EZ-Count (Microbiology International) для оценки количества жизнеспособных бактерий на муху.Различия в бактериальной нагрузке сравнивали с помощью теста Краскела – Уоллиса или Вилкоксона, когда это было возможно. Поскольку непараметрические тесты могут быть недостаточными, мы дополнительно выполнили параметрический тест Welsh t . Когда в анализ были включены «Время после закачки» и «Линия», мы использовали линейную модель, предполагающую гауссово распределение ошибки. Остаточная ошибка проверялась на нормальность и гомоскедастичность, и при необходимости необработанные данные подвергались преобразованию Бокса – Кокса. Чтобы включить «Replicate» как случайный эффект, мы использовали обобщенную линейную смешанную модель с функцией HLfit из пакета R «spaMM» [47].В этом случае P значений были получены на основе выбора модели и были заданы отношения правдоподобия (LR2).

Количественная оценка гемолимфы

Для оценки количества гемолимфы у самцов и самок мы взвешивали 3–5-дневных мух индивидуально на микровесах Mettler Toledo (MX5) с точностью до микрограмма до и после удаления гемолимфы. Мы удалили гемолимфу, разделив грудную клетку и брюшко отдельных мух и поглотив гемолимфу при контакте с Kimwipe (Kimberly Clark), как описано ранее [48].

Подсчет фагоцитов и фагоцитоз

Для количественного определения гемоцитов Hml-Gal4> UAS-GFP , eater-nlsGFP и Pxn-Gal4> UAS-GFP мух декапитировали PBS ( II; Драммонд) для отделения сидячих фагоцитов от тканей. Затем группы из 5 или 15 мух одного пола отбирали кровь на предметное стекло, которое отображали на микроскопе Zeiss (визуализатор Axioplot Zeiss) [49]. Для каждого слайда подсчитывали количество фагоцитов на 25 мм ², используя программное обеспечение Zeiss ‘Zen.Мы проанализировали разницу в количестве фагоцитов между самцами и самками с помощью парных тестов Вилкоксона, спаривая самцов и самок одного генотипа и манипулируя ими параллельно. Чтобы оценить долю фагоцитов, активно участвующих в фагоцитозе, мы вводили мухам 23 нл 1 мг / мл pHrodo-меченного мертвого E. coli (Molecular Probes, кат. № {«type»: «entrez-protein», «attrs «: {» text «:» P35361 «,» term_id «:» 548429 «,» term_text «:» P35361 «}} P35361), который становится флуоресцентным после созревания фагосомы, и подсчитали количество фагоцитов, содержащих меченые бактерии, используя тот же процедура.Чтобы подтвердить, что P. rettgeri фагоцитируется фагоцитами, мы вводили бактерии, несущие плазмиду, экспрессирующую GFP, мухам-хозяевам, специфически экспрессирующим dsRed в фагоцитах ( eater-Gal4> UAS-dsred ). Мы регистрировали события фагоцитоза с помощью конфокальной микроскопии (визуализатор Axioplot Zeiss).

Оценка времени до контроля бактериальной пролиферации (t¯c)

Мы оценили среднее время, необходимое хозяину для контроля бактериальной пролиферации (t¯c), как это было сделано ранее [50].Короче говоря, мы построили модель, которая состоит из трех моделей: одна описывает рост бактерий внутри хозяина, одна моделирует уменьшение количества бактерий, если хозяин контролирует инфекцию, а третья моделирует вероятность того, что данная муха контролирует или не может контролировать инфекционное заболевание. Затем эти модели были подогнаны к эмпирическим данным траекторий роста бактерий у самцов и самок с использованием восьми индивидуально посаженных мух в час после инъекции для оценки т . ^c для каждого пола.Доверительные интервалы для оценок параметров были получены путем начальной загрузки эмпирических данных для каждой временной точки и повторной оценки параметров модели.

Выделение
РНК и создание библиотеки
Мы измерили полный транскрипционный ответ у мужчин и женщин Canton S через 8 часов после начала инфекции. Мухам вводили приблизительно 3000 бактерий в суспензии в 23 нл PBS, как описано выше. Часть мух препарировали для удаления их репродуктивного тракта перед выделением РНК.Каждый образец представлял собой пул из 25 мух одного пола, гомогенизированных в 1 мл TRIzol (Life Technologies). Незараженных мух одновременно лечили так же, как и мух, которым вводили инъекцию, за исключением того, что они подвергались воздействию только CO ₂ и не получали инъекции. Мы количественно оценили экспрессию в трех биологических повторностях незараженных и инфицированных пулов. Шесть дополнительных групп по 25 неинфицированных мух каждого пола были добавлены для оценки конститутивной экспрессии пути Toll. Эти дополнительные пулы подвергались воздействию CO ₂ одновременно с исходными пулами, но были гомогенизированы через 24 и 72 часа после анестезии.Качество РНК и библиотеки определяли с помощью анализатора фрагментов AATI. Библиотеки готовили с использованием набора Lexogen Quantseq 3 ’mRNA-Seq Library Prep kit, следуя инструкциям производителя. Секвенирование выполняли на платформе Illumina Hiseq 2500 Rapid Run Mode в Cornell Life Sciences Sequencing Core с односторонними считываниями 50 пар оснований.
Отображение считывания, нормализация и количественная оценка различий экспрессии
Для каждого образца было сгенерировано не менее 5 миллионов считываний последовательностей.Качество чтения оценивалось с помощью fastqc для контроля качества, а чтения были обрезаны с помощью Trimmomatic ([51], версия 0.32). Затем обрезанные считывания картировали в эталонный геном D. melanogaster (версия 6.80) с использованием выравнивателя STAR RNA-seq ([52], версия 2.4.1a). Подсчеты были рассчитаны с использованием «htseq» ([53], версия 0.6.1). Мы охарактеризовали разницу между мужчинами и женщинами в транскрипционном ответе на инфекцию взаимодействием между лечением (неоспоримое против инфицированного) и полом (самец против инфицированного).женский). Тогда модель была . Число считываний = Лечение + Секс + Лечение * Пол . Мы выполнили анализ с помощью пакета R «DEseq2» [54] и визуализировали значимых кандидатов (т.е. значение P ниже 0,05 после коррекции FDR) на графиках вулканов с использованием пакета R ggplot2 [55]. Данные тепловой карты были созданы с помощью пакета «Heatmap3» с настройками по умолчанию для расчета кластеризации [56]. Анализ обогащения генной онтологии (GO) был выполнен с помощью программного обеспечения Gorilla (доступно по адресу http: // cbl-gorilla.cs.technion.ac.il/) для поиска категорий GO, которые обогащены в «целевом» наборе (здесь список женских генов, по-разному экспрессируемых в инфицированном хозяине по сравнению с неинфицированным) по сравнению с «фоновым» набором ( здесь список мужских генов, по-разному экспрессируемых в инфицированном хозяине по сравнению с неинфицированным) с использованием стандартной гипергеометрической статистики [57].
Количественная оценка экспрессии гена хозяина с помощью RT-qPCR
Для оценки активности пути Toll мы использовали qPCR для измерения экспрессии дрозомицина , гена антимикробного пептида, строго регулируемого путем Toll [13], с использованием праймеров CGTGAGAACCTTTTCCAATATGATG ) и TCCCAGGACCACCAGCAT (обратный).Чтобы оценить активность пути Imd, мы измерили экспрессию диптерицина , гена антимикробного пептида, строго регулируемого путем Imd [13], с использованием праймеров GCGGCGATGGTTTTGG (прямой) и CGCTGGTCCACACCTTCTG (обратный). Вариация содержания кДНК между образцами контролировалась анализом эталонного гена RpL32 (прямой праймер: GACGCTTCAAGGGACAGTATCTG, обратный праймер: AAACGCGGTTCTGCATGAG), который, как было показано, не реагировал на инфекцию [58]. Мы получили суммарную РНК от групп от восьми до десяти мух через 24 и 72 часа после инъекции P.rettgeri или PBS. Во втором эксперименте мы получили общую РНК от групп из четырех мух через 8 ч после инъекции P. rettgeri (до того, как случилась какая-либо смерть) или неоспоримых контрольных особей. Мух гомогенизировали в 1 мл TRIzol (Life Technologies), сразу хранили при –80 ° C и выделяли РНК по стандартному протоколу. Один микрограмм РНК, обработанной ДНКазой (Promega), подвергали обратной транскрипции с использованием MLV-RT (Promega). Полученная таким образом кДНК служила шаблоном для количественной ПЦР с использованием набора SSO Advanced SYBR Green (Bio-Rad) при незначительной модификации инструкций производителя.
Результаты
Половой диморфизм восприимчивости к инфекции хозяина является повсеместным
Чтобы проверить, является ли D. melanogaster половым диморфизмом в выживаемости в ответ на инфекцию, мы сначала вводили генетически разнообразную популяцию, а также несколько инбредных популяций D. melanogaster с грамотрицательными ( P. rettgeri и P. alcalifaciens ) и грамположительными ( E. faecalis и S.aureus ) бактерии различной вирулентности. Во всех случаях мы обнаружили существенные различия в выживаемости между самцами и самками из этой беспородной популяции (рис.). Самки, как правило, чаще, чем самцы, умирали от инфекции и от инъекционной раны (рис.), Независимо от генотипа дикого типа (рис. И дополнительный файл 2: рис. S1A) и начальной бактериальной дозы (рис. И дополнительный файл 2: рис. S1B). , В). Интересно, однако, что половой диморфизм восприимчивости хозяина полностью изменился после заражения S.aureus (рис.). Это указывает на то, что самки не слабее в целом, а, скорее, более восприимчивы к большинству бактериальных патогенов. Мы посчитали, что самки в нашем исследовании могут быть с ослабленным иммунитетом, поскольку спаривание и размножение, как ранее было показано, подавляют иммунитет у самок D. melanogaster [22–24]. Чтобы проверить эту гипотезу, мы сравнили выживаемость спарившихся самок и самок после спаривания после заражения P. rettgeri . Смертность девственных самок была промежуточной между смертностью самцов и самок (рис.). Этот результат предполагает, что брачный статус самки способствует половому диморфизму в выживании, но его недостаточно, чтобы полностью учесть этот эффект. Чтобы дополнительно охарактеризовать половой диморфизм хозяина с точки зрения восприимчивости, мы сосредоточились на естественном патогене Drosophila , который демонстрирует умеренный уровень вирулентности, грамотрицательной бактерии P. rettgeri .
Половой диморфизм в выживаемости до заражения беспородной популяции. a Выживаемость при заражении грамотрицательными бактериями P.rettgeri . Самки были более восприимчивы, чем самцы (Cox-ph: df = 1, χ ² = 23,26, P <0,0001). b Выживаемость при заражении грамположительными бактериями Enterococcus faecalis . Самки были более восприимчивы, чем самцы (Cox-ph: df = 1, χ ² = 5,96, P = 0,015). c Выживаемость при заражении грамотрицательными бактериями P. alcalifaciens . Самки были более восприимчивы, чем самцы (Cox-ph: df = 1, χ ² = 42.49, P <0,0001). d Выживаемость при заражении грамположительными бактериями Staphylococcus aureus . Самцы были более восприимчивы, чем самки (Cox-ph: df = 1, χ ² = 7,37, P = 0,006). e Выживаемость после инъекции PBS (стерильный раствор, используемый для бактериальной суспензии). Самки были немного более восприимчивы, чем самцы (Cox-ph: df = 1, χ ² = 5,66, P = 0,02). f Выживаемость генотипа Canton S при заражении грамотрицательными бактериями P.rettgeri . Самки были более восприимчивы, чем самцы (Cox-ph: Sex : df = 1, χ ² = 49,42, P <0,0001). г Выживаемость генотипа Oregon R после заражения грамотрицательными бактериями P. rettgeri . Самки были более восприимчивы, чем самцы (Cox-ph: Sex : df = 1, χ ² = 16.09, P <0,0001). h Выживаемость генотипа w ¹¹¹⁸ при заражении грамотрицательными бактериями P.rettgeri . Самки были более восприимчивы, чем самцы (Cox-ph: Пол : df = 1, χ ² = 4,36, P = 0,036). i Доза-реакция при выживаемости Canton S до инфекции P. rettgeri . Самки были более восприимчивы, чем самцы (Cox-ph: Пол : df = 1, χ ² = 96,97, P <0,0001), и доза оказала влияние на выживаемость ( Доза : df = 1, χ ² = 8,09, P = 0,004). Этот эффект зависел от пола хозяина, поскольку 100-кратной разницы в начальной дозе было недостаточно, чтобы устранить диморфизм в выживаемости ( Доза * Пол : df = 1, χ ² = 5.64, P = 0,017). j Выживаемость спарившихся самцов и самок и девственных самок после заражения грамотрицательными бактериями P. rettgeri . Спарившиеся самцы более устойчивы, чем спарившиеся самки (Cox-ph с поправкой на несколько тестов: Пол : df = 1, z = 4,6, P <0,001) и девственные самки (Cox-ph с поправкой на множественные тесты: Пол . : df = 1, z = 2.34, P = 0,045). Разница в выживаемости спарившихся и девственных самок была незначительной (Cox-ph с поправкой на множественные тесты: Пол : df = 1, z = 2.31, P = 0,054)
Самки менее эффективны в контроле роста патогенов
Чтобы выяснить, различаются ли самцы и самки по их способности контролировать пролиферацию патогенов, мы заразили самцов и самок P. rettgeri и количественно определили количество бактерий. нагрузка в каждом отдельном (рис.). Сначала мы отслеживали половой диморфизм бактериальной нагрузки у хозяина дикого типа (Canton S) в разные моменты времени инфицирования (рис.) И определили, что нагрузка, по-видимому, стабилизируется между 2 и 3 днями после инъекции, в то же время, когда смертность хозяина стабилизировалась (рис.). Выжившие мухи переносят стойкую инфекцию и не уничтожают бактерии. В то время как мы не обнаружили половой диморфизм устойчивости до фазы хронической персистенции (8, 16 и 24 часа), женщины несли более чем в 10 раз бактериальную нагрузку во время хронической фазы инфекции (3, 5, 7 и 10 дней). ; Инжир. ). Эта разница в бактериальной нагрузке во время хронической фазы инфекции также наблюдалась в нашей беспородной популяции через 3, 10 и 30 дней после инъекции (рис.) И у других инбредных генотипов дикого типа через 10 дней после инъекции (рис.). Чтобы убедиться, что разница в бактериальной нагрузке не связана с половым диморфизмом размеров тела, мы взвесили общую массу и гемолимфу самцов и самок трех генотипов дикого типа (дополнительный файл 3: Рисунок S2). Самки были только примерно на 20% крупнее самцов и имели примерно в два раза больше гемолимфы, чем самцы, тогда как разница в бактериальной нагрузке была 10-кратной. Таким образом, бактериальная нагрузка не зависит от размера мух. Недавно мы показали, что мухи умирают при фиксированной бактериальной нагрузке, называемой бактериальной нагрузкой при смерти (BLUD) [50], которая представляет собой максимальное количество бактерий, которое муха может выдержать перед смертью.Мы количественно оценили BLUD для самцов и самок, проверяя инфицированных хозяев каждые 30 минут и определяя бактериальную нагрузку в недавно погибших мухах в каждой точке наблюдения. Мы не обнаружили половой диморфизм в BLUD генотипов Canton S или Oregon R (рис.), Что позволяет предположить, что мужчины и женщины умирают с одинаковой бактериальной нагрузкой.
Половой диморфизм по устойчивости к P. rettgeri . а P. rettgeri load в Canton S (CS) улетает в течение 10 дней после заражения.В целом женщины несли больше бактерий, чем мужчины. Мы не обнаружили различий в бактериальной нагрузке в ранние временные точки (критерий Вилкоксона: 8 ч: W = 151,5, P = 0,1102; 16 ч: W = 151, P = 0,1148; 24 ч: W = 60, ). P = 0,52). Однако через 48 часов после инъекции, когда смертность стабилизировалась и инфекция может считаться хронически устойчивой, женщины несли более тяжелое бремя, чем мужчины (тест Вилкоксона: 2 дня: W = 99,5, P = 0,01; 3 дня: W = 171.5, P = 0,0007; 5 дней: W = 202,5, P = 0,0002; 7 дней: W = 188, P = 0,0003; 10 дней: W = 152, P = 0,0005). б P. rettgeri нагрузка при инъекции мухам из беспородной популяции. Самки несли больше бактерий, чем самцы во время хронической фазы инфекции P. rettgeri в трех независимых экспериментах, посвященных трем различным временным точкам инфекции (критерий Вилкоксона: 3 дня: W = 262,5, P = 0.01; 10 дней: W = 1162, P <0,0001; 30 дней: W = 2148, P <0,0001). c P. rettgeri загружают через 10 дней после инъекции мухам генотипов дикого типа. Для трех генотипов самки несли больше бактерий, чем самцы во время хронической фазы инфекции P. rettgeri (критерий Вилкоксона: CS: W = 350, P <0,0001; w ¹¹¹⁸: W = 692,5, P = 0,0001; Орегон R (OrR): W = 513, P = 0,0001). d Бактериальная нагрузка после смерти (BLUD; +30 мин максимум) у CS и OrR мух обоих полов. Мы не обнаружили значительного полового диморфизма у P. rettgeri нагрузки при смерти (валлийский тест t : CS: df = 255,28, t = –1,77, P = 0,08; OrR: df = 235,58, t = 0,6, P = 0,54). Оба пола погибли от одной и той же бактериальной нагрузки. Черные линии в b, c и d обозначают средние значения. Графики скрипки представляют собой распределение данных, квартилей и медианы.Тесты Вилкоксона, сравнивающие медианы: * P <0,05, **** P <0,0001 и нс: P > 0,05. и Динамика P. rettgeri внутри хозяина у самцов и самок CS летает между 8 и 16 часами после инъекции. В обеих повторностях экспериментов ( i и ii ) самцы контролировали размножение бактерий раньше самок (оценочно t ). ^c, или время контроля, представлено вертикальными красными линиями, а доверительный интервал вокруг оценки заштрихован серым цветом).Каждая точка представляет бактериальную нагрузку на одну муху, сплошная линия представляет стандартный рост популяции бактерий Бараньи, сопоставленный с белыми точками (см. Методы и [50]). Интенсивность красного в точках представляет предполагаемую вероятность того, что хозяин контролировал инфекцию (см. Методы и [50]).
Затем мы сосредоточились на начальной фазе инфекции, чтобы лучше понять корреляцию между размножением бактерий внутри хозяина и половым диморфизмом. в выживании. Ранее мы показали, что выживаемость при заражении P.rettgeri для каждого человека зависит от времени, когда иммунный ответ становится эффективным и может контролировать бактериальную пролиферацию (время для контроля) [50]. Используя нашу ранее опубликованную модель смеси и подход бутстрапа к почасовым данным бактериальной нагрузки с 8-го по 16-й час после инъекции (см. Методы), мы оценили среднее время для контроля t¯c у мужчин и женщин (рис.). Отдельные самцы мух с большей вероятностью контролировали инфекцию (показано красными точками на рис.) Как популяция, а самцы начинали контролировать инфекцию раньше, чем самки (рис.). Мы обнаружили, что t¯c различается на 2–3 часа между самцами и самками, с небольшим или отсутствующим перекрытием между доверительными интервалами при оценке t¯c, что соответствует разнице примерно в 5–8 бактериальных удвоений [43] до контроля. .
Наши данные предполагают, что половой диморфизм восприимчивости к инфекции был обусловлен половым диморфизмом роста бактерий внутри хозяина. Мы считали, что различия в росте бактерий могут быть связаны с разницей в ресурсах, доступных бактериям, заражающим мужчин и женщин.Чтобы исследовать это, мы вводили P. rettgeri живым хозяевам или хозяевам, которые были убиты декапитацией либо в момент инъекции, либо за 1 час до инъекции. Поскольку мертвые хозяева не могут вызвать индуцируемый иммунный ответ, мы рассудили, что половой диморфизм роста бактерий будет поддерживаться у мертвых хозяев, если он был обусловлен различиями в ресурсах, доступных патогену у хозяев мужского и женского пола, но потерян, если диморфный ответ был вызван индуцируемыми ответами.Мы не наблюдали никакой разницы в росте бактерий у мертвых хозяев мужского и женского пола, несмотря на половой диморфизм у живых хозяев (дополнительный файл 4: Рисунок S3). Таким образом, мы пришли к выводу, что половой диморфизм был обусловлен различиями в активном контроле пролиферации, например, врожденным иммунным ответом.
Клеточный иммунитет и меланизация не ответственны за половой диморфизм в ответ на
P. rettgeri
Гемоциты осуществляют защитный фагоцитоз и способствуют устойчивости к патогенам [40, 59, 60].Таким образом, мы спросили, могут ли половые различия в количестве фагоцитов и эффективности фагоцитоза лежать в основе половой диморфной реакции на P. rettgeri . Сначала мы подтвердили, что P. rettgeri можно фагоцитировать путем инъекции GFP-меченного P. rettgeri мухам, экспрессирующим dsRed в их фагоцитах (eater-dsRed), и наблюдения совместной локализации зеленой и красной флуоресценции под конфокальной микроскопией (дополнительный файл 1: Рисунок S4B). Мы наблюдали, что самки трех разных D.У генотипов melanogaster , которые экспрессируют GFP специфически в своих фагоцитах, было больше фагоцитов, чем у мужчин (дополнительный файл 1: Рисунок S4C, левая панель), что противоположно тому, что можно было бы ожидать, если бы дифференциальный фагоцитоз был ответственным за диморфизм. Затем мы проверили, различаются ли самцы и самки по эффективности фагоцитоза, используя мертвые pHrodo-меченные E. coli , которые флуоресцируют красным только тогда, когда находятся в фаголизосомном компартменте с низким pH. Мы не обнаружили разницы в количестве фагоцитов с бактериями в их фаголизосомном компартменте (дополнительный файл 1: рисунок S4C, правая панель), что указывает на отсутствие разницы в способности к фагоцитозу.Наконец, мы непосредственно проверили потребность в фагоцитах для выживания хозяина инфекции P. rettgeri путем измерения выживаемости (рис. Ai) и бактериальной нагрузки (рис. Aii) мух дикого типа по сравнению с мухами, гемоциты которых были генетически удалены у взрослых особей. сцена. Мы наблюдали незначительное влияние удаления фагоцитов на выживаемость инфекции или на системную патогенную нагрузку у обоих полов, и диморфизм сохранялся даже в отсутствие фагоцитов (рис.). Эти коллективные результаты предполагают, что фагоцитоз не является ключевым иммунным ответом, который порождает иммунный половой диморфизм.
Фагоцитоз, меланизация и путь Imd не объясняют половой диморфизм. a Половой диморфизм в выживаемости для P. rettgeri все еще присутствует, когда хозяева не могут фагоцитировать бактерии. i Выживаемость мух, лишенных фагоцитов, по сравнению с их генетическим контролем после заражения P. rettgeri (OD = 0,1). Самки обеих линий были более восприимчивы, чем самцы, и отсутствие фагоцитов не влияло на вероятность выживания после инфекции (Cox-ph: Line: df = 1, χ ² = 1.01, P = 0,32; Пол : df = 1, χ ² = 18,41, P = 0,02; Линия * Пол : df = 1, χ ² = 0,45, P = 0,50). ii P. rettgeri Рост у мух, лишенных фагоцитов и находящихся под их генетическим контролем. Даже если P. rettgeri было фагоцитировано, этот иммунный ответ не оказал значительного влияния на рост бактерий ни в ранние временные точки (Линейная регрессия: Линия : df = 1, F = 0,28, P = 0.59; Время : df = 1, F = 577,82, P <0,0001; Пол : df = 1, F = 3,63, P = 0,05; Время * Пол : df = 1, F = 0,0003, P = 0,99; Линия * Пол : df = 1, F = 0,039, P = 0,84), ни через 10 дней после инъекции (Линейная регрессия: Линия : df = 1, F = 0,62, P = 0,43; Пол : df = 1, F = 20,36, P <0,0001; Линия * Пол : df = 1, F = 1,07, P = 0.3). b Половой диморфизм в выживаемости для P. rettgeri все еще присутствует, когда хозяева не способны меланизировать бактерии. i Мутант с потерей функции черных клеток (Cox-ph: Sex : df = 1, χ ² = 5,15, P = 0,02). ii Тройной мутант PPO1 ^Δ, 2 ^Δ, 3 ¹ потеря функции (Cox-ph: Sex : df = 1, χ ² = 4,46, P = 0,03). c Половой диморфизм при выживаемости до P.rettgeri все еще присутствует, когда хозяева не могут вызвать Imd-ответ против бактерий. Самки были более восприимчивы к P. rettgeri , чем самцы для четырех протестированных мутантов. i Мутант с потерей функции Imd (Cox-ph: Sex : df = 1, χ ² = 156,24, P <0,0001). ii Relish , лишенный функции мутант (Cox-ph: Sex : df = 1, χ ² = 230,99, P <0,0001). iii Мутант с двойной потерей функции PGRP-LC , PGRP-LE (Cox-ph: Пол : df = 1, χ ² = 71.9, P <0,0001). iv P. rettgeri рост в мутанте с потерей функции Relish . Инфекция началась с одинакового количества бактерий у обоих полов (линейная регрессия: , пол : df = 1, F = 1,02, P = 0,32). Популяции бактерий со временем росли (, время : df = 1, F = 766,96, P <0,0001), но рост значительно отличался между полами ( время * пол : df = 1, F = 5,32, . Р = 0.02). Ответ Imd не объясняет половой диморфизм восприимчивости к P. rettgeri .
Затем мы проверили роль иммунорегулируемой меланизации [31] как потенциально способствующей диморфизму восприимчивости к инфекции P. rettgeri . Мы сравнили выживаемость между самцами и самками в мутантах с дефицитом меланизации «Черные клетки» и у мух, дефицитных по всем трем пропенолоксидазам (ключевым ферментам меланизации). В обоих случаях самки с дефектом меланизации были более восприимчивы к инфекции, чем самцы с дефектом (рис.), предполагая, что меланизация не играет роли в диморфизме. В целом, наши результаты показывают, что половой диморфизм устойчивости к инфекции P. rettgeri не связан с различиями в клеточном иммунитете или иммунной меланизации между мужчинами и женщинами.
Путь
Imd является центральным для контроля роста
P. rettgeri , но не отвечает за диморфизм восприимчивости
Грамотрицательные бактерии индуцируют путь Imd, который имеет решающее значение для выживания этих инфекций [13].Более того, было показано, что гены, регулируемые путем Imd, имеют более высокую экспрессию у самцов D. melanogaster , чем у самок [61]. Поэтому мы проверили, ответственен ли путь Imd за наблюдаемый половой диморфизм восприимчивости к инфекции P. rettgeri , инфицировав несколько мутантов, дефицитных по активности пути Imd, с помощью P. rettgeri и наблюдая за их выживаемостью. Мы использовали мутанты с потерей функции нескольких генов, участвующих в пути Imd, а именно Imd ( Imd ¹⁰¹⁹¹) [34], Приправы ( Отн. ^E20) [36], dTAK1 ( dTAK1 ^D10) [35], и двойной мутант для PGRP-LC и PGRP-LE ( PGRP-LE ¹¹²; +; ПГРП-ЛК ^ΔE) [33].Отдельное тестирование этого полного набора мутантов имеет эффект опроса пути в нескольких точках и оценки роли пути Imd в нескольких генетических фонах. Все мутантные штаммы были гораздо более восприимчивы к инфекции P. rettgeri , чем штаммы дикого типа, при этом 100% мутантных особей умирали менее чем за 48 часов, что подтверждает, что путь Imd абсолютно необходим для борьбы с P. rettgeri . инфекционное заболевание. Тем не менее, для всех протестированных мутантов Imd самки мух по-прежнему умирали значительно быстрее, чем самцы, и диморфизм сохранялся (рис.и Дополнительный файл 5: Рисунок S5A). Интересно, что экспоненциальный рост P. rettgeri у Imd-дефицитных хозяев в течение 16 часов также был быстрее у самок, чем у самцов (рис. Civ), а половой диморфизм присутствовал в бактериальной нагрузке через 8 и 12 часов после инъекции у . Наслаждайтесь мутантами (дополнительный файл 5: рисунок S5B). Это говорит о том, что в отсутствие пути Imd хозяева все еще сохраняют некоторую способность контролировать инфекцию, и эта способность является сексуально диморфной. Таким образом, мы заключаем, что, хотя путь Imd важен для защиты от P.rettgeri , он не лежит в основе наблюдаемого полового диморфизма.
Различие в индукции пути Toll вызывает половой диморфизм в восприимчивости

Канонически считается, что путь Toll лежит в основе устойчивости к грамположительным бактериям и грибам [12, 13], но также может активироваться при заражении патогенными грамотрицательными бактериями [ 62] и при ранении [63–66]. Чтобы проверить, способствует ли путь Toll половому диморфизму в иммунитете, мы инфицировали нуль-мутанты spzle ( spz ) [37], который кодирует лиганд Toll в Drosophila , и отслеживали выживаемость как самцов, так и самок.Нулевые мутанты spz проявляли умеренную восприимчивость к инфекции P. rettgeri , но, что более важно, они не проявляли полового диморфизма в выживаемости (рис.). Этот результат указывает на то, что для диморфной восприимчивости к инфекции P. rettgeri необходим функциональный путь Toll.

Путь Toll отвечает за половой диморфизм при выживании. a Половой диморфизм восприимчивости у мутантов с потерей функции для пути Toll ( мутантов spetzle ).Вероятность смерти от инфекции P. rettgeri была одинаковой для хозяев женского и мужского пола (Cox-ph: Пол : df = 1, χ ² = 1,12, P = 0,29). b Половой диморфизм восприимчивости у мутантов с потерей функции для ветви ModSP пути Toll. Самки были более восприимчивы, чем самцы (Cox-ph: Sex : df = 1, χ ² = 7,66, P = 0,005). Распознавание P. rettgeri компонентом ModSP пути Toll не является причиной полового диморфизма восприимчивости. c Половой диморфизм восприимчивости у мутантов с потерей функции для персефонной ветви пути Toll. Вероятность смерти от инфекции P. rettgeri не различалась между самками и самцами-хозяевами (Cox-ph: Пол : df = 1, χ ² = 0,11, P = 0,74). Распознавание фактора вирулентности патогенных грамотрицательных бактерий P. rettgeri по пути Толля допускает половой диморфизм. d Половой диморфизм восприимчивости у мутантов с потерей функции для ветви ModSP и для ветви Персефоны пути Toll.Самки были менее восприимчивы к инфекции E. faecalis , чем самцы для обеих мутантных линий; самцы, но не самки, мутант по ветви Персефоны, где вероятно, умрут раньше, чем самцы, мутант по ветви ModSP (Cox-ph: Line: df = 2, χ ² = 3,71, P = 0,05; Пол : df = 1, χ ² = 72,45, P <0,0001; Линия / пол : df = 2, χ ² = 7,46, P = 0,006). Распознавание факторов повреждения хозяина или вирулентности, вероятно, будет более важным, чем прямое распознавание патогенных бактерий. e Относительная экспрессия дрозомицина до RpL32 у обоих полов в ответ на инфекцию P. rettgeri . Ответная реакция (то есть разница в экспрессии дрозомицина между незараженным и инфицированным) была более сильной через 8 часов после инъекции у самцов дикого типа и мутантов для m odSP (взаимодействие Пол x Обработка : Canton S: df = 1, F = 13,68, P = 0,002; modSP : df = 1, F = 17.18, P = 0,0048), но этот диморфизм отсутствовал у мутантов Persephone и spaetzle ( psh : df = 1, F = 0,35, P = 0,46; spz : df = 1 , F = 0,03, P = 0,86)

Критическим этапом активации пути Toll является расщепление Spz, которое позволяет ему связываться с рецептором Toll и активировать его. Это расщепление может быть стимулировано одним из двух механизмов [38, 39]. Во-первых, распознавание стереотипных компонентов клеточной стенки грибов и грамположительных бактерий приводит к протеолитической активации сериновой протеазы ModSP, которая инициирует каскад протеолитических событий, в конечном итоге приводящих к процессингу Spz (ветвь ModSP, см. Иллюстрацию на рис. .) [38]. Альтернативно, путь Toll может быть активирован путем распознавания факторов вирулентности или повреждения ткани хозяина через расщепление отдельной сериновой протеазы, Персефоны, что также приводит к процессингу spz («ветвь Psh», см. Иллюстрацию на рис.) [ 39, 67, 68]. Мы спросили, какая ветвь пути отвечает за Toll-опосредованный половой диморфизм, нарушая каждую ветвь независимо. У мутантов modSP самки продолжают умирать значительно быстрее от P.rettgeri , чем самцы, хотя диморфизм незначительно ослаблен (рис.). В отличие от этого, однако, потеря функции гена persephone полностью устраняет половой диморфизм в выживаемости инфекции P. rettgeri (рис.). Мы подтвердили эти результаты с помощью РНКи, нацеленной на транскрипты ModSP и персефоны (дополнительный файл 6: рисунок S6A). Таким образом, обнаружение инфекции P. rettgeri Персефоной позволяет распознать инфекцию по пути Toll, и ее диморфная активность в конечном итоге приводит к разнице в восприимчивости к этой инфекции между мужчинами и женщинами.

Ответ полного транскриптома на инфекцию предполагает основную роль конститутивной экспрессии пути Toll в половом диморфизме. a Разница в транскрипции в ответ на инфекцию у мужчин и женщин в целом. b Различия в транскрипции в ответ на инфекцию в тушах (т. Е. Репродуктивные ткани были удалены перед сбором РНК) самцов и самок. Эти графики вулканов представляют гены в соответствии с диморфизмом ответа (т.е., взаимодействие Пол и Лечение в нашей модели) и значимость различия. Синие точки — это гены, ответная реакция которых (то есть разница между незараженным и инфицированным) значительно более активна у мужчин (или снижается у женщин). Красные точки — это гены, ответная реакция которых значительно более активна у женщин (или снижается у мужчин). Серые точки не являются значимыми генами после коррекции FDR для множественного тестирования. c Иллюстрация пути Toll и полового диморфизма его конститутивного выражения на основе общедоступного метаанализа [72].Цифры в скобках представляют соотношение экспрессии генов самцов и самок у целых мух. Самцы конститутивно экспрессируют гены в той части пути, который специфичен для иммунной функции, на более высоких уровнях, чем самки (часть пути вне клетки-хозяина, «только Imm. Only»), а самки в большей степени экспрессируют гены, которые используются в эмбриональном развитии. (часть пути внутри клетки-хозяина, Imm. & Dev.). d Конститутивная экспрессия генов, принадлежащих к пути Toll, в девяти биологических повторностях пула из 25 неинфицированных самцов или самок мух.Конститутивная экспрессия специфичных для мужчин генов, участвующих только в иммунитете (черный), и специфическая для женщин конститутивная экспрессия генов, общих для иммунных функций и эмбрионального развития (серый), были подтверждены в образцах, включая экспрессию генов в репродуктивных тканях (i), но исчезли, когда эти ткани были удалены путем препарирования перед транскрипционным анализом (ii). Градиент на тепловых картах представляет уровень экспрессии (синий: низкий и красный: высокий)

Путь Toll является центральным для иммунного ответа против грамположительных бактерий [12, 13].Чтобы проверить, является ли активность Toll в целом диморфной, мы проверили, вызывает ли путь Toll диморфизм в ответ на инфекцию грамположительной бактерией E. faecalis . Как и P. rettgeri , этот естественный патоген D. melanogaster вызывал большую смертность у самок, чем у самцов-хозяев дикого типа (рис. И дополнительный файл 2: рис. S1C). Женские и мужские мутанты по пути Toll были одинаково восприимчивы к инфекции E. faecalis , что снова указывает на то, что путь Toll необходим для иммунного диморфизма.Кроме того, когда мы вводили мутантным самцам и самкам мух по modSP или персефон с E. faecalis , мы наблюдали неожиданное изменение направления полового диморфизма по сравнению с инфекцией у мух дикого типа. Самцы умерли немного, но значительно раньше, чем самки (рис.), Причем самцы нулевые для Персефона умерли раньше, чем самцы нулевые для modSP (рис.). Это открытие указывает на то, что в ответ на инфекцию E. faecalis ветви ModSP и Persephone играют роль в половом диморфизме.

Наши данные предполагают, что активность или активация пути Toll может различаться у мужчин и женщин, что, как мы могли ожидать, может вызвать разницу в продукции AMP. Поэтому мы оценили уровни экспрессии гена антимикробного пептида, контролируемого Toll ( Drosomycin ) [13]. Индукция дрозомицина намного сильнее у мужчин, чем у женщин, как через 24, так и через 72 часа после инъекции (дополнительный файл 6: Рисунок S6B), что указывает на устойчивую и диморфную активацию пути Toll в ответ на грамотрицательный P .rettgeri инфекция. Эта половая диморфная активация была потеряна у мутантов Psh и Spz , но не у мутантов ModSP (рис.). Мутация Spz устранила диморфизм уровней экспрессии AMP более полно, чем мутация Psh . Наши результаты предполагают, что ветвь Psh / Toll контролирует диморфную экспрессию генов антимикробных пептидов.

Роль Psh в диморфизме восприимчивости показывает, что чувствительность к повреждению или бактериальной вирулентности является ключевой в иммунном диморфизме D.Меланогастер . Чтобы проверить, обусловлен ли наблюдаемый половой диморфизм в иммунитете патогенной бактериальной инфекцией, мы оценили способность мужчин и женщин Canton S справляться с инфекцией нелетальными бактериями E. coli и Ecc15 (выживаемость> 95% ). Эти грамотрицательные бактерии должны активировать путь Imd, но не предполагается, что они активируют путь Toll через ветви ModSP (восприятие пептидогликана) или персефону (обнаружение повреждений).В соответствии с этой гипотезой мы не увидели разницы между мужчинами и женщинами в устойчивой нагрузке Ecc 15 или E. coli в течение 3-дневного курса (дополнительный файл 7: рисунок S7). Эти данные косвенно подтверждают модель, в которой иммунный каскад Персефона / Толл, который реагирует на факторы вирулентности, является центральным для диморфизма врожденного иммунитета Drosophila .

Транскрипционная реакция на инфекцию является половой диморфной

Продемонстрировав, что путь Toll в первую очередь отвечает за половой диморфизм в ответ на инфекцию, мы затем предприняли транскриптомный анализ, чтобы определить, могут ли другие процессы вносить вторичный вклад в диморфизм.Мы использовали RNA-seq для количественной оценки изменений в экспрессии генов у самцов и самок через 8 часов после инъекции, с данными, полученными либо от всей мухи, либо от рассеченных туш, у которых были удалены репродуктивные тракты и гонады. Полученные данные доступны и могут быть просмотрены на нашем веб-сайте (http://flysexsick.buchonlab.com/) или в дополнительном файле 8: Таблицы S1 и Дополнительном файле 9: Таблица S2. Когда экспрессия была количественно определена для всего тела, мы обнаружили четыре гена, для которых реакция значительно различалась между мужчинами и женщинами-хозяевами после коррекции FDR, измеренной взаимодействием между Sex и Treatment в статистическом анализе.Эти гены представляют собой дросомицин , дефенсин , CG4267 и takeout (рис. И дополнительный файл 10: рис. S8A). Дросомицин и Дефенсин кодируют антимикробные пептиды и находятся ниже пути Toll [13]. Наблюдение, что эти гены были более высоко экспрессированы у мужчин, чем у женщин, подтверждает роль пути Toll в установлении диморфизма. CG4267 , участвующий в липидном катаболическом процессе, также сильнее индуцировался у мужчин. Takeout , участвующий в гомеостазе питания [69], подавлялся при инфицировании у мужчин, но не регулировался дифференцированно у женщин.

Поскольку наши измерения транскрипции были взяты для всего тела, очевидные различия в ответе транскрипции могли быть вызваны или замаскированы различиями в экспрессии генов в репродуктивной ткани между мужчинами и женщинами. Поэтому мы выполнили РНК-секвенирование на тушах самцов и самок, у которых были отрезаны репродуктивные тракты.Мы снова обнаружили, что экспрессия дрозомицина более сильно отвечала у мужчин, чем у женщин (фиг., Дополнительный файл 10: фиг. S8B). Мы дополнительно подтвердили, что специфический для мужчин ответ выноса не зависел от наличия репродуктивного тракта. Напротив, диморфный ответ Defensin исчез в отсутствие репродуктивной ткани, указывая на то, что дефенсин диморфно регулируется в репродуктивном тракте с более сильной экспрессией у мужчин.Анализ диморфной реакции туши также выявил дополнительные гены с диморфной реакцией на инфекцию, которые не были идентифицированы у целых мух. Трансферрин 1 был более активным у женщин, что предполагает диморфную роль секвестрации железа в ответ на инфекцию. Три чувствительных к стрессу гена, регулируемых путем Jak-Stat, TurandotM , TurandotA и TurandotC , были сильно индуцированы инфекцией у мужчин.Однако даже при отсутствии репродуктивной ткани было несколько генов с явно выраженной половой диморфной регуляцией (то есть, взаимодействие между Лечение и Пол было значительным). Мы провели анализ обогащения ГО, в котором сравнили обогащение категорий ГО, которые дифференцированно регулируются после заражения самок, с теми, которые дифференцированно регулируются после заражения самцов. Единственными категориями GO, которые затем по-разному обогащались у мужчин и женщин, были категории, участвующие в антибактериальном гуморальном ответе (таблицы и).Это было верно независимо от того, был ли удален репродуктивный тракт, и поддерживает интерпретацию, согласно которой различия в активности пути Toll в первую очередь ответственны за диморфизм устойчивости.

Таблица 1

Обогащенный анализ генной онтологии экспрессии генов в ответ на P. rettgeri у целых мух

79 защита 000 ответ

GO-термин	Описание	P значение ^a	FDR q значение ^b	Обогащение ( N , B , n , b ) ^c
4.09 × 10 ^–8	4,71 × 10 ^–5	2,70 (181, 38, 37, 21)
GO: 0009617	реакция на бактерии	2,35 × 10 ^–7	1,36 × 10 ^–4	2,73 (181, 34, 37, 19)
GO: 0043207	ответ на внешний биотический стимул	1,18 × 10 ^–6	4,52 × 10 ^{— 4}	2,45 (181, 40, 37, 20)
GO: 0009607	ответ на биотический стимул	1.18 × 10 ^–6	3,39 × 10 ^–4	2,45 (181, 40, 37, 20)
GO: 0051707	реакция на другие организмы	1,18 × 10 ^–6	2,71 × 10 ^–4	2,45 (181, 40, 37, 20)
GO: 0051704	мультиорганизный процесс	2,03 × 10 ^–6	3,91 × 10 ^{— 4}	2,39 (181, 41, 37, 20)
GO: 0006955	иммунный ответ	2.29 × 10 ^–6	3,77 × 10 ^–4	2,68 (181, 31, 37, 17)
GO: 0009605	реакция на внешний стимул	5,7 × 10 ^–6	8,22 × 10 ^–4	2,28 (181, 43, 37, 20)
GO: 0002376	Процесс иммунной системы	7,72 × 10 ^–6	9,9 × 10 ^–4	2,52 (181, 33, 37, 17)
GO: 0006950	реакция на стресс	1.56 × 10 ^–5	1,8 × 10 ^–3	2,10 (181, 49, 37, 21)
GO: 0042742	защитный ответ на бактерию	3,43 × 10 ^–5	3,6 × 10 ^–3	2,53 (181, 29, 37, 15)
GO: 0050896	ответ на стимул	5,73 × 10 ^–5	5,51 × 10 ^–3	1.81 (181, 65, 37, 24)
GO: 0098542	защитный ответ на другие организмы	5.94 × 10 ^–5	5,28 × 10 ^–3	2,45 (181, 30, 37, 15)
GO: 0050829	защитный ответ на грамотрицательные бактерии	2,8 × 10 ^–4	2,31 × 10 ^–2	2,88 (181, 17, 37, 10)
GO: 0002682	регуляция процессов иммунной системы	3,07 × 10 ^–4	2,36 × 10 ^–2	4,19 (181, 7, 37, 6)
GO: 0050776	регуляция иммунного ответа	3.07 × 10 ^–4	2,22 × 10 ^–2	4,19 (181, 7, 37, 6)
GO: 0031347	регулирование ответных действий защиты	6,73 × 10 ^–4	4,57 × 10 ^–2	3,42 (181, 10, 37, 7)
GO: 0019731	антибактериальный гуморальный ответ	9,88 × 10 ^–4	6,33 × 10 ^–2	2,75 (181, 16, 37, 9)

Таблица 2

Таблица обогащения экспрессии генов Go в ответ на P.rettgeri в рассеченных мухах

^{1 ответ}

GO term	Описание	P значение ^a	FDR q значение ^b	Обогащение ( N , B , n , b ) ^c
4,77 × 10 ^–5	7,8 × 10 ^–2	1,57 (331, 35, 181, 30)
GO: 0050896	ответ на стимул	6.02 × 10 ^–5	4,92 × 10 ^–2	1,31 (331, 95, 181, 68)
GO: 0006959	гуморальный иммунный ответ	1,62 × 10 ^–4	8,81 × 10 ^–2	1,62 (331, 26, 181, 23)
GO: 0002376	Процесс иммунной системы	2,44 × 10 ^–4	9,99 × 10 ^–2	1,49 (331, 38, 181, 31)
GO: 0006950	реакция на стресс	3.5 × 10 ^–4	1,15 × 10 ^–1	1,31 (331, 78, 181, 56)
GO: 0009617	реакция на бактерии	3,69 × 10 ^–4	1,01 × 10 ^–1	1,45 (331, 43, 181, 34)
GO: 0009605	реакция на внешний стимул	4,03 × 10 ^–4	9,41 × 10 ^–2	1,39 (331, 54, 181, 41)
GO: 0043207	ответ на внешний биотический стимул	4.49 × 10 ^–4	9,18 × 10 ^–2	1,40 (331, 51, 181, 39)
GO: 0009607	ответ на биотический стимул	4,49 × 10 ^–4	8,16 × 10 ^–2	1,40 (331, 51, 181, 39)
GO: 0051707	реакция на другие организмы	4,49 × 10 ^–4	7,34 × 10 ^{— 2}	1,40 (331, 51, 181, 39)
GO: 0019731	гуморальный антибактериальный ответ	7.21 × 10 ^–4	1,07 × 10 ^–1	1,71 (331, 16, 181, 15)

Половой диморфизм устойчивости к инфекции мог быть результатом существенных различий между полами до заражения . Поэтому мы исследовали транскриптомные различия между мужчинами и женщинами при отсутствии инфекции. Мы особенно сосредоточились на генах, связанных с Toll-путем. Наша гипотеза заключалась в том, что половой диморфизм в активации пути Toll может быть объяснен сексуально диморфной конститутивной экспрессией генов, кодирующих компоненты сигнального каскада Toll, тем самым вызывая диморфизм иммунного ответа.Компонент внутриклеточной передачи сигналов пути Toll дополнительно необходим для формирования дорсовентрального паттерна эмбриона Drosophila в яичнике самки [70]. Рецепторы распознавания образов (например, PGRP-SA, GNBP1, GNBP3), а также сериновые протеазы пути Toll (например, Persephone, ModSP, Grass, SPE) необходимы для активации Spz во время иммунного ответа (показано за пределами клетка-хозяин на рис. и обозначенная как «только Imm.» на рис.), тогда как Spz активируется независимым процессом, ведущим к пасхальной сериновой протеазе во время развития [71].Гены, кодирующие активацию Toll и нижестоящую внутриклеточную передачу сигналов, участвуют как в иммунной, так и в онтогенетической передаче сигналов (включая Spaetzle , Myd88 , tube , Pelle , Cactus , проиллюстрированные в клетке-хозяине на фиг. ‘Imm. & Dev.’ На рис.). Чтобы оценить возможность того, что гены, кодирующие компоненты пути Toll, конститутивно экспрессируются диморфным образом, мы предприняли два подхода. Во-первых, мы извлекли уровни экспрессии этих ключевых генов из опубликованных наборов транскриптомных данных, полученных от мужчин или женщин [72].Эти данные показали, что гены, кодирующие компоненты пути передачи сигналов Toll, конститутивно экспрессируются половым диморфным образом. Гены пути Toll, вовлеченные в иммунную активацию AMP, экспрессировались в основном мужским образом (соотношение M / F экспрессии: Spe : 1,8, трава : 1,5, modSP : 1,5, GNBP3 : 1.25, PGRP-SA : 1.46, GNBP1 : 1, персефона : 1, рис.). Однако гены нижестоящего пути, вовлеченные как в иммунную, так и в зародышевую активность Toll-пути, были значительно смещены в сторону самок (соотношение M / F экспрессии: spetzle : 0.5, Myd88 : 0,76, трубка : 0,43, таблетка : 0,43, рис.). Во-вторых, мы оценили наши собственные данные выражения из неоспоримого состояния (рис.). Мы обнаружили, что пол и участие в иммунном ответе были основными детерминантами иерархической кластеризации экспрессии генов (гены «только Imm.» Против генов «Imm. Dev.» У мужчин и женщин, рис. Di), подтверждая результаты, наблюдаемые в метаанализ. Однако эта закономерность отсутствовала, когда экспрессия в репродуктивном тракте была удалена из образцов (рис.Dii). Это убедительно свидетельствует о том, что разница в онтогенетических РНК обусловлена отложением материнских клеток в яйцах и не является частью системного иммунного ответа. В целом, эти результаты подтверждают гипотезу о том, что путь Toll играет центральную роль в половом диморфизме ответа на инфекцию P. rettgeri . Они также предполагают, что конститутивная половая диморфная экспрессия генов, регулирующих активность пути Toll, является ключевой детерминантой полового диморфизма в устойчивости к инфекции.

Обсуждение

Исследования по таксонам показали, что исходы болезней часто имеют половой диморфизм (см. Обзор в [73]). Однако механизмы, лежащие в основе такого диморфизма, остаются плохо изученными. В этом исследовании мы показываем, что самок D. melanogaster , как правило, менее устойчивы к бактериальным инфекциям из-за пониженной относительной активности пути передачи сигналов Toll и, следовательно, имеют пониженную способность создавать эффективный иммунный ответ. На основе модели, предложенной Duneau et al.[50], это снижение иммунной индуцируемости может привести к снижению вероятности того, что самки контролируют размножение бактерий на ранних стадиях инфекции, тем самым увеличивая вероятность того, что они в конечном итоге умрут от инфекции. Хотя обычно считается, что путь Toll контролирует грамположительные бактериальные и грибковые инфекции, мы обнаружили, что он отвечает за наблюдаемый диморфизм восприимчивости как к грамположительной бактерии E. faecalis , так и к грамотрицательной P.rettgeri . Мы отмечаем, что этот диморфизм в активности Toll эффективно приводит к тому, что мужские и женские хозяева являются разными «средами» с точки зрения паразита, с потенциальными последствиями для эволюции патогенов, передающихся с предвзятым отношением к полу.

Что делает самцов и самок диморфными

Активация пути Toll запускается после распознавания компонентов бактериальной клеточной стенки (ветвь ModSP) или обнаружения протеолитической активности в гемолимфе (ветвь Персефоны) (рис.). Персефона , как предполагалось, также опосредует активацию Toll после эндогенных сигналов опасности [39]. Требование ветви Персефоны для увеличения выживаемости самцов при заражении P. rettgeri предполагает две гипотезы. С одной стороны, возможно, что диморфный ответ напрямую связан с диморфизмом в распознавании сигналов опасности или факторов вирулентности посредством восприятия, опосредованного Персефоной. С другой стороны, также возможно, что ветвь Персефоны сама по себе не является диморфной, но что ее активация патогенной инфекцией обнажает врожденный диморфизм в нижестоящих компонентах пути Toll; последняя гипотеза кажется более вероятной.Гены Toll-пути, которые специфичны для иммунной системы, конститутивно ориентированы на мужчин (рис.), Подтверждая идею о том, что, как только распознавание происходит через ветвь Персефоны, Toll-путь может реагировать более сильно у мужчин, что приводит к к более высокому выражению AMP. Кроме того, также возможно, что, помимо этого диморфизма конститутивной экспрессии, диморфизм активации пути во время инфекции может привести к последующим различиям между полами.

Проксимальная причина иммунного полового диморфизма

Хотя Toll-путь явно диморфен между мужчинами и женщинами, основание этого диморфизма еще предстоит определить. Одна разумная гипотеза состоит в том, что гормональные различия между женщинами и мужчинами вызывают разницу в активности Toll. Важность ювенильного гормона (ЮГ) в оогенезе и реакции самок на спаривание поддерживает гипотезу о том, что у самцов и самок могут быть разные уровни циркулирующего ЮГ.Было показано, что JH подавляет иммунную систему с более сильным влиянием на путь Toll, чем на путь Imd (как показано на рисунке 1 Flatt et al. [74]). Спаривание и перенос белков семенной жидкости самцов влияет на врожденную систему самок [75], стимулируя выработку JH у самок D. melanogaster [76, 77] и подавляя иммунные функции у спарившихся самок по сравнению с девственницами [23, 24]. . Поскольку мы обнаружили диморфизм даже между девственными самками и спарившимися самцами, возможно, что диморфизм в экспрессии пути Toll является результатом диморфизма уровней JH у самок еще до спаривания.Иммунодепрессивный эффект гормонов часто считается основным проксимальным механизмом полового диморфизма у восприимчивых к инфекции позвоночных [78], хотя исследования на млекопитающих подчеркивают приобретенную иммунную систему с небольшим вниманием к врожденной иммунной системе. Основываясь на данных Drosophila , мы предполагаем, что эндокринологические различия также могут влиять на половой диморфизм врожденного иммунитета.

Эволюционные последствия иммунного полового диморфизма

С точки зрения инфекционного патогена, хозяева мужского и женского пола могут быть разными «средами» с, среди других вариаций, разными уровнями иммунной активности.Таким образом, разумно предположить, что клоны паразитов могут адаптироваться к этим различным средам либо в случае передачи с предвзятым отношением к полу, либо из-за неравного соотношения полов хозяев, социальной структуры на основе пола, либо из-за эндогенной восприимчивости одного пола хозяина по отношению к другому [70 ]. Кроме того, диморфизм устойчивости хозяина, как в случае с инфекциями P. rettgeri , оказывает специфическое давление отбора на патогены. Теория предсказывает, что хозяева с сильным иммунным ответом выбирают более вирулентных паразитов с более высокой передачей.В случае крайней разницы в резистентности развитие повышенной вирулентности у одного пола может привести к появлению паразита, который убивает неустойчивый пол так быстро, что патоген может сохраняться и развиваться только в резистентном хозяине [79]. В случае полового диморфизма резистентности хозяина, как было обнаружено в нашем исследовании, ожидается, что будет развиваться специфическая для пола адаптация паразитов [4, 73]. Наши результаты показывают, что D. melanogaster может иметь сильный половой диморфизм в отношении устойчивости к определенным бактериальным инфекциям и, следовательно, может быть хорошей моделью для изучения последствий специфичной для пола адаптации на половые симптомы и распространенность инфекционных заболеваний.

С точки зрения хозяина, ожидается, что самки будут вкладывать больше средств в иммунитет, чтобы максимизировать воспроизводство в течение всей жизни (принцип иммунитета Бейтмана) или из-за прямого отрицательного взаимодействия между репродуктивными и иммунными характеристиками (гипотеза нарушения иммунокомпетентности) [80, 81]. Эти упрощенные эволюционные модели часто приводили к предсказанию, что животные должны иметь иммунологически «слабый пол» [5], и склонны игнорировать изменчивость, которая уже была подчеркнута.Действительно, самцы млекопитающих обычно более восприимчивы к инфекционным заболеваниям, таким как лейшманиоз, малярия и шистосомоз, а самки — к токсоплазмозу, амебиазу и лямблиозу [6, 78, 82]. В D. melanogaster наблюдение, что самцы были более восприимчивы, чем самки, к инфекциям S. aureus , подчеркивает паразитарную зависимость полового диморфизма в иммунитете. Вложения в защиту с учетом пола, вероятно, являются результатом независимых вложений в различные функции иммунной системы (например,g., гуморальные и клеточные ответы), связанные с половыми ограничениями или плейотропией, а не с общей слабостью [61]. Действительно, у Drosophila , S. aureus инфекция обычно контролируется фагоцитозом и меланизацией, и распознавание S. aureus инфекции Toll-путем может быть ограничено [31, 83, 84]. Следовательно, какой пол имеет более высокую относительную восприимчивость, может зависеть от личности заражающего паразита, что затрудняет обобщение полового диморфизма с помощью метаанализов [85].По мере того, как мы начинаем рассматривать персонализированную медицину и преодоление «гендерного разрыва» в биомедицинских исследованиях, а также роль пола хозяина в эпидемиологии, становится все более важным рассматривать в конкретных деталях диморфизм хозяина в ответ на инфекцию.

Рост инфекции мочевыводящих путей, которую практически невозможно вылечить

Если вы когда-либо чувствовали, что проходите мимо лезвия бритвы вместо воды, вы знаете, что инфекции мочевыводящих путей — это уникальная форма пыток.Инфекции мочевыводящих путей у счастливых уток, которые никогда не болели, могут затронуть уретру, мочевой пузырь и почки. При отсутствии лечения они могут привести к необратимому повреждению почек и сепсису — опасному для жизни иммунному ответу на инфекцию. А теперь представьте, если вы осмелитесь, ИМП, которая может бороться с самыми сильными антибиотиками, которые у нас есть.

Эта ужасающая мысль стала ближе к реальности в мае, когда женщина из Филадельфии дала положительный результат на новый супербактерий — штамм кишечной палочки, устойчивый к антибиотику последнего средства под названием колистин.К счастью, ее ИМП не была непобедима для всех антибиотиков. Но поскольку бактерии, вызывающие ИМП, продолжают мутировать, ученые опасаются, что придет время, когда одна из самых распространенных инфекций в организме станет практически неизлечимой.

Это мрачное будущее не за горами. Многие ИМП уже устойчивы к одному или нескольким антибиотикам, поэтому женщинам приходится справляться с инфекциями, от которых они не могут избавиться.

Патриция, которая отказалась назвать свою фамилию, с Рождества перенесла пять ИМП. 71-летняя жительница Торонто приняла несколько разных антибиотиков, чтобы избавиться от них, в том числе пенициллин, который, по ее словам, не помог.Но они продолжают возвращаться. «Такое ощущение, что это может быть одно и то же снова и снова, — сказала она, добавив, — это беспокоит».

Врач Патриции, Шейла Виджаясингхе, подтвердила, что ИМП становится все труднее лечить. В бактериальных культурах от пациентов с ИМП «мы действительно видим штаммы, устойчивые к нашим наиболее часто используемым антибиотикам», — сказал доктор Виджаясингхе, практикующий семейную медицину в больнице Святого Михаила в Торонто.

Некоторые пациенты с рецидивирующими ИМП имеют аллергию на определенные антибиотики в сочетании с высоким уровнем устойчивости к другим.По ее словам, в подобных случаях Виджаясингхе приходилось помещать пациентов в больницу для более агрессивного лечения. «Иногда остальные варианты доступны только IV».

Чтобы контролировать устойчивость к антибиотикам, врачи и пациенты должны уделять больше внимания обновленным рекомендациям по лечению распространенных инфекций, говорят исследователи. Вот несколько вещей, которые следует знать перед тем, как принимать антибиотики от следующей ИМП.

Многие бактерии «исчезают сами по себе»

Устойчивость к антибиотикам достигла опасного уровня во всем мире, сообщила Всемирная организация здравоохранения в 2014 году.В то время как резистентность варьируется в зависимости от региона и даже от больницы к больнице, урологи Северной Америки сообщают, что уровень резистентности 30% и выше не является редкостью для ципрофлоксацина и бактрима, антибиотиков, широко назначаемых для лечения ИМП.

Ученые связали рост резистентных к лечению ИМП с чрезмерным использованием антибиотиков от всего, от бронхита до простуды. Исследователи говорят, что чем больше бактерий подвергается воздействию этих лекарств, тем больше у них вырабатывается иммунитет.

Но устойчивые к лечению ИМП могут также возникать в результате использования антибиотиков в животноводстве, свиноводстве и птицеводстве, поскольку эти животные получают те же лекарства, что и люди.Исследователи, в том числе эпидемиолог из Университета Британской Колумбии Ами Мангес, обнаружили штаммы кишечной палочки при ИМП, которые демонстрируют те же паттерны устойчивости, что и у сельскохозяйственных животных, получавших антибиотики.

Снижение эффективности лечения ИМП больше всего вредит женщинам. Половина всех женщин заболеет хотя бы одной ИМП в течение жизни. ИМП могут развиться у людей любого возраста и пола, но женщины заболевают ими примерно в четыре раза чаще, чем мужчины. У женщин уретра короче, что облегчает проникновение бактерий в мочевой пузырь, а отверстие уретры женщины находится ближе к анальному отверстию, где живут бактерии.

Ассоциации урологов Северной Америки и Европы выпустили новые рекомендации по лечению ИМП, чтобы помочь обуздать устойчивость к антибиотикам. Но, возможно, это сообщение не доходит до пациентов и медицинских работников достаточно быстро, сказал доктор Эндрю Сокол, урогинеколог из больничного центра MedStar Washington в Вашингтоне.

Слишком часто, по его словам, врачи назначают антибиотики после обнаружения бактерий с помощью тест-полоски мочи, даже если у пациента нет симптомов ИМП, которые включают жжение во время мочеиспускания и возрастающую потребность в мочеиспускании.

Но наличие бактерий низкого уровня в моче — это нормально, потому что мочевой пузырь все время вымывает болезнетворные микроорганизмы, — отметил он. И даже если у пациента действительно легкая инфекция, «от 25 до 40 процентов всех этих бактериальных образований в мочевом пузыре проходят сами по себе», — сказал он.

По возможности врачи должны назначить посев мочи, чтобы проверить уровень инфекции и выяснить, устойчивы ли бактерии к антибиотикам. Но поскольку культивирование бактерий занимает от одного до трех дней — а пациент может быть слишком в агонии, чтобы ждать, — врачи часто назначают антибиотики только на основании симптомов.

Хотя этот подход соответствует руководствам по лечению, назначение антибиотиков без посева мочи «может быть сложной задачей», — сказал доктор Сокол. Например, женщина может сообщать об учащении мочеиспускания, но «возможно, она пьет слишком много кофеина». Он добавил, что другие состояния могут имитировать ИМП, включая вагинальные инфекции, которые проходят сами по себе или требуют лекарств, отличных от антибиотиков.

Более серьезные симптомы, такие как кровь в моче, требуют лечения антибиотиками.«Врачи должны назначать минимальную дозу и кратчайший курс», — сказал доктор Сокол. По его словам, при неосложненной ИМП три-пять дней правильного антибиотика должны помочь, но многие врачи назначают от семи до 10 дней.

Если ИМП не переросла в инфекцию почек, врачи должны прописывать антибиотики, нацеленные на мочевой пузырь, такие как Macrobid, а не начинать с антибиотика широкого спектра действия, такого как Cipro. «Это большая пушка», — сказал он. «Нам это нужно для других вещей».

Унция профилактики

Многие женщины употребляют клюквенный сок или таблетки, но доказательства того, что продукты из клюквы могут помочь предотвратить ИМП, в лучшем случае ничтожны, согласно обзору 2012 года уважаемым Cochrane Collaboration.

Другие стратегии профилактики включают опорожнение мочевого пузыря до и после секса, поддержание высокого потребления жидкости и вытирание спереди назад, чтобы предотвратить попадание бактерий из влагалища и ануса в уретру.

«Эти стратегии, как правило, не основаны на доказательствах», — сказала д-р Линн Стотерс, профессор урологии Университета Британской Колумбии. Тем не менее, ассоциации урологов продолжают рекомендовать их, «потому что клинически мы считаем, что риск для пациентов, применяющих эти стратегии, невелик.«

ИМП имеют тенденцию обостряться после сексуальной активности, отсюда и термин« цистит в медовый месяц ». Но неправильное использование катетера также увеличивает риск ИМП, — сказал доктор Стотерс».

Женщины с рецидивирующими ИМП, определяемыми как две или более инфекции По ее словам, в течение шести месяцев или трех или более в год следует обследоваться на предмет обструкции мочевыводящих путей и камней в почках, которые могут содержать бактерии.

Другие факторы риска включают истончение кожи мочеполовой системы, которое происходит после менопаузы .Исследования показали, что небольшое количество эстрогена в креме для местного применения или в вагинальном кольце может снизить количество ИМП у женщин в постменопаузе.

Помимо антибиотиков

Теперь, когда антибиотики теряют свою эффективность, ученые ищут другие способы уничтожить бактерии, вызывающие ИМП.

E. coli — виновник 80% всех ИМП — прикрепляется к клеткам слизистой оболочки мочевыводящих путей с помощью крошечных придатков, которые туго свернуты, как пружина.Они действуют как амортизаторы, позволяя кишечной палочке противостоять приливным волнообразным силам опорожнения мочевого пузыря.

Однако недавно швейцарские ученые обнаружили секрет суперзахватки бактерий: цепочку белков под названием FimH. В исследовании, опубликованном в марте в журнале Nature, они показали, что экспериментальный препарат может отключить эти белки, позволяя мочевому пузырю вымывать бактерии без необходимости убивать их антибиотиками — по крайней мере, теоретически. В настоящее время проводятся дополнительные испытания, чтобы выяснить, может ли пероральный препарат воздействовать на эти белки и безопасно лечить ИМП.

Но даже если это сработает, получение нового средства для лечения ИМП на рынке может занять годы. Тем временем женщины остаются с недоказанными стратегиями профилактики, народными средствами, такими как употребление яблочного уксуса, и сокращающимся списком эффективных антибиотиков.

Принимая во внимание повсеместность ИМП и риск серьезных осложнений, исследования этого бедствия для здоровья женщин были крайне недостаточными, говорят врачи. «Все женское здоровье — это область с недостаточным финансированием», — отметила д-р Сокол.

Патрисия из Торонто соглашается.«Если бы больше мужчин знали, каково это ходить с ИМП и каждый шаг причинять боль, — сказала она, — они бы думали, что это важнее».

Таинственная инфекция, охватывающая весь земной шар в атмосфере секретности

Жил когда-то человек по имени Альберт Александер. Он был полицейским — «[американский акцент] Привет». — в Англии. «[Британский акцент] Привет». Однажды во время патрулирования он порезал щеку: «Ой!» — что привело к ужасной инфекции. Понимаете, это было в 1941 году, до того, как пациенты получали антибиотики.Это были дни, когда маленькая царапина могла убить тебя. «Или у тебя ушная инфекция и ты умер. Укус кошки — и ты умер. Или ты наступил на палку и умер. Внезапно появляются антибиотики и бьют ». Началась эра антибиотиков. Вскоре медленная и мучительная смерть превратилась в семидневный курс антибиотиков и доплату в 10 долларов. А Альберт? Альберт был первым в мире пациентом, получившим антибиотик — пенициллин. И это сработало. «Мы только что изобрели лекарство, спасающее и продлевающее жизнь, — одно из величайших достижений в истории человечества.Если только нет. Это Мэтт Рихтел, научный корреспондент The New York Times. В течение прошлого года Мэтт разговаривал со специалистами в области здравоохранения, чтобы узнать, приближаемся ли мы к концу эры антибиотиков. Современная медицина зависит от антибиотика. «И, использовав его так много, мы теперь подвергаем его риску. Наша судьба предрешена? » «Во-первых, я не думаю, что люди достаточно уважают бактерии». Это Эллен Сильбергельд, одна из ведущих ученых, изучающих устойчивость к антибиотикам. «Бактерии правят миром. Мы просто платформа для бактерий.В организме человека бактериальных клеток больше, чем клеток человека. Так что мы, по сути, в основном бактерии ». «Александр Флеминг -« человек, открывший пенициллин »- в своей Нобелевской речи сказал:« Погодите, будьте в курсе ». Когда ты начнешь убивать эту фигню, она будет сопротивляться. «Обращали ли мы на это внимание? Нет.» «C.D.C. привлек наше внимание сегодня предупреждением о том, что он называет «кошмарными бактериями». «Это бактерии, устойчивые к большинству, если не ко всем, антибиотикам». Когда мы принимаем антибиотики, чтобы убить инфекции, некоторые бактерии выживают.Раньше они копировались, и со временем сопротивление возрастало. Но теперь они намного эффективнее и делятся между собой генами устойчивости к лекарствам. Поэтому каждый раз, когда мы принимаем антибиотик, мы рискуем создать более сильные и устойчивые бактерии. А более сильные, более устойчивые бактерии означают все менее и менее эффективные антибиотики. И это проблема, потому что мы принимаем много антибиотиков. «Деньги делаются на продаже антибиотиков». Большие деньги. Мировой рынок антибиотиков оценивается в 40 миллиардов долларов.А в США C.D.C. По оценкам, около 30% всех назначаемых антибиотиков вообще не нужны. Это 47 миллионов дополнительных рецептов. А во многих местах за пределами США вам даже не нужен рецепт. «Вы можете зайти в аптеку. Фармацевт поставит вам диагноз и назначит антибиотики. Я склонен думать об этом как о дарвиновских силах, умноженных на скорость и масштабы глобального капитализма. Во взаимосвязанном мире — путешествия, импорт, экспорт — мы устраняем ошибки вместе с нами.«Я могу пойти на встречу в Китае, Вьетнаме или еще где-нибудь…» Это Лэнс Прайс, директор Центра действий по устойчивости к антибиотикам. «Я могу стать колонией неизлечимой кишечной палочки. И у меня может не быть никаких симптомов. Но вы можете стать колонией. И ты можешь стать таким постоянным хозяином ». Таким образом, вы можете быть здоровым и по-прежнему распространять вредные бактерии, даже не подозревая об этом. «Устойчивые к лекарствам бактерии никогда не могли путешествовать по миру так быстро, как сегодня». И это только часть проблемы.«Вы должны знать, что около 80 процентов производства антибиотиков в этой стране идет на сельское хозяйство». «Почему, черт возьми, кто-то подумал, что использование антибиотиков в сельском хозяйстве — прекрасная идея?» «Мы сказали, эй, послушайте, запихните этих животных вместе. Не беспокойтесь о гигиене и не пытайтесь сохранить их здоровье. Просто дайте им антибиотики. А через пару недель у вас будут взрослые животные, которых вы сможете нарезать и съесть. Верно? И на этом можно заработать ». «Никто не связывал между кормлением животных антибиотиками и тем фактом, что пища будет содержать устойчивые к лекарствам бактерии.Итак, Эллен провела исследование. Она сравнила разные виды курицы, купленной в магазине. И она обнаружила, что домашняя птица, выращенная с применением антибиотиков, содержит в девять раз больше лекарственно-устойчивых бактерий. «А теперь поговорим о вегетарианцах. Я просто хочу, чтобы вы поняли, вы в опасности. Вы знаете все эти вспышки, которые происходят среди салата-латука и тому подобного. Вы когда-нибудь задумывались, как это случилось? Это потому, что навоз используется при выращивании сельскохозяйственных культур. Органическое сельское хозяйство приветствует использование навоза.«Если только вы не законченный вариант:« Я веган, общаюсь только с веганами и ем стерилизованные овощи », вы знаете, очень вероятно, что вы заразились теми же бактериями». Устойчивые бактерии проникают в грунтовые воды, вылетают из кузовов грузовиков для перевозки скота и отправляются домой на руках сельскохозяйственных рабочих, и все это делает попытки точно определить, где возникают устойчивые бактерии, чрезвычайно сложно. И даже когда кажется, что есть ясный источник, все не так просто.«Никто не хочет, чтобы его считали центром эпидемии». Допустим, бабушка готовит вам жаркое из крупы. А потом тебя тошнит от жареной крупы. Что ж, если вы живете во Франции, или Ирландии, или где-то еще в ЕС, упакованное мясо имеет этикетку для отслеживания. Вы можете точно выяснить, с какой фермы пришло это мясо. Но в США этого не могут сделать даже высокопоставленные чиновники здравоохранения. «В большинстве стран действуют законы об идентификации животных. Мы этого не делаем ». Пат Басу, бывший главный ветеринар Службы безопасности пищевых продуктов и инспекции США, по сути, один из лучших ветеринаров в стране.«Позвольте мне начать с самого начала. У нас был случай, когда у нас были резистентные бактерии, вызывающие болезни у людей. Были больные люди, которых C.D.C. идентифицированы. » «Более 50 человек в восьми округах заразились необычным штаммом сальмонеллы, связанной со свининой». «Это больше не возбудитель вашей бабушки. Это новая ошибка ». Представители органов здравоохранения проследили вспышку до бойни и определили шесть потенциальных хозяйств, откуда могла возникнуть вспышка. Но потом расследование прекратили.«Отдельные фермеры должны добровольно согласиться поделиться данными с вышедшими следователями. Мы не могли вернуться назад. Это был тупик ». 192 человека заболели, 30 госпитализированы и нулевой доступ для медицинских работников для обследования ферм. «Секретность поддерживается, потому что за ней стоят большие экономические силы. Фермы боятся потерять способность получать антибиотики. Больницы боятся отвозить пациентов ». «Ну, как врач, я очень расстраиваюсь. Как пациент, я очень расстраиваюсь из-за того, что скрывают эту информацию.«Это Кевин Кавана, врач и защитник интересов пациентов. «Лекарственно-устойчивые бактерии — огромная проблема. Если это происходит в ресторане, если это происходит на круизном лайнере, вы немедленно узнаете об этом — «Вспышка сальмонеллы -» «в течение нескольких дней или часов после вспышки». «Сегодня утром Chipotle закрывает десятки своих ресторанов на северо-западе Тихого океана…» «Но все же в больнице у вас могут пройти месяцы или даже больше года, прежде чем эти данные появятся на правительственном веб-сайте или сообщены C.ОКРУГ КОЛУМБИЯ.» В США больницы не обязаны информировать население о вспышке бактерий. «Защищать и отрицать. Их очень беспокоят краткосрочные экономические выгоды, а не долгосрочные проблемы ». «Всегда есть такая реакция, как, ну, но ведь еще есть наркотик, не так ли?» Мол, это еще не конец. Помните Альберта Александра? — «Привет. Ой! » — первый пациент, которому дали пенициллин? Что ж, его история на этом не закончилась. Через пять дней после того, как он начал выздоравливать, в больнице кончился новый препарат, и г-н.Александр умер. Сегодня нам не нужно беспокоиться о том, что антибиотики закончатся. Нам приходится так беспокоиться об их использовании, что они вообще перестают работать. «… Хочу знать, почему отдел здравоохранения метрополитена не закрыл ресторан…» «Это очень устойчивые бактерии…» «Нам действительно нужно изменить способ использования антибиотиков. Потому что то, как мы используем антибиотики, уничтожает их ». «Это ставит под угрозу всю систему ухода, от которой мы зависим, чтобы продлить нашу жизнь и улучшить ее качество.Британское правительство заказало исследование, которое предсказало наихудший сценарий, когда к 2050 году от этих инфекций умрет больше людей, чем от рака. «Это поколение отныне». «Требуется 10 лет, чтобы идентифицировать, разработать, протестировать и вывести на рынок новый антибиотик. А для этого требуется миллиард долларов ». «Это общая проблема для человечества». «Очень похоже на глобальное потепление». «Вы не можете контролировать это как единую компанию. Вы не можете контролировать это как единое правительство ». И потому, что бактерии теперь работают вместе очень эффективно: «Если мир не будет действовать последовательно вместе, это не имеет значения.”

Профиль здоровья беженцев в Центральной Америке

Информация о здоровье

Напряжение, страх и неуверенность, которые могут быть вызваны хроническим насилием, имеют длительные последствия для физического и психологического здоровья. Хронический стресс, психические расстройства, гипертония и подавленная иммунная система — все это может быть результатом длительного насилия ²⁵. Кроме того, страх и опасения по поводу преступности часто удерживают людей от использования медицинских и других важнейших услуг, которые в основном сосредоточены в городских районах и труднодоступны для сельского населения ¹⁶ ^, ²⁶.

В этом разделе описываются состояния здоровья с упором на инфекционные заболевания, которым подвергаются дети из Центральной Америки из Сальвадора, Гватемалы и Гондураса. Там, где это применимо и доступно, описываются проверки или вмешательства перед отъездом.

Американская академия педиатрии (AAP) Инструментарий для иммигрантов, раздел клинической помощи рассматривает болезни и состояния, которые распространены среди иммигрантов. AAP Immigrant Toolkit также содержит рекомендации по медицинскому обследованию и лечению для иммигрантов и беженцев из бедных ресурсами районов развивающихся стран, включая страны Центральной Америки ²⁷.Для получения дополнительной информации см. Внешний значок AAP

Инфекционные и инфекционные болезни

Арбовирусы: вирусы денге, чикунгунья и Зика

Вирусы денге, чикунгунья и Зика вызывают передаваемые комарами инфекции, вызывающие растущую озабоченность в Сальвадоре, Гватемале и Гондурасе. Лихорадка денге является эндемическим заболеванием на большей части территории Центральной и Южной Америки. Однако чикунгунья впервые попала в этот регион в 2014 году после появления в Карибском бассейне в 2013 году. В настоящее время местная передача чикунгуньи происходит более чем в 45 странах и территориях Северной и Южной Америки, включая Сальвадор, Гватемалу и Гондурас ²⁸ ^, ²⁹.Об активной передаче вируса Зика сообщалось по всей Центральной Америке, включая Сальвадор, Гватемалу и Гондурас ³⁰.

Острые инфекции денге, чикунгунья и Зика имеют схожие проявления и могут быть клинически неотличимы. Общие симптомы включают жар, головную боль, сильную миалгию, артралгию, отек суставов и сыпь. Чикунгунья уникальна тем, что может вызывать стойкое воспаление суставов в течение месяцев, а иногда и лет, даже после исчезновения острых симптомов.Чикунгунью следует назначать пациентам с хроническими ревматологическими симптомами из мест местного распространения. Денге уникален, потому что повторное заражение другим вирусом денге может вызвать состояние, называемое тяжелой денге. Тяжелая форма лихорадки денге может привести к летальному исходу, если своевременно не лечить ее должным образом. При хорошем медицинском лечении смертность от тяжелой денге может составлять менее 1%. Тяжелая денге более вероятна, когда человек возвращается в эндемичный по болезни район, и маловероятна для вновь прибывшего беженца. Зика может быть связан с конъюнктивитом и другими симптомами, которые обычно менее серьезны, чем денге и чикунгунья.Заражение вирусом Зика часто протекает бессимптомно. Несмотря на относительно доброкачественный характер острой инфекции, вирус Зика в последнее время был связан с повышенным риском синдрома Гийена-Барре и врожденных дефектов (например, микроцефалии) при приобретении во время беременности ³¹ ^, ³². CDC опубликовал временные рекомендации по скринингу младенцев с микроцефалией и возможной инфекцией Зика. Клинические проявления этих инфекций во время скринингового визита на дому маловероятны, поскольку инкубационный период обычно короткий, а симптомы часто проходят в течение 10 дней после заражения.

Инфекция, вызванная вирусом гепатита В

Распространенность хронической инфекции вируса гепатита B среди детей из Центральной Америки, прибывающих в Соединенные Штаты, неизвестна. Однако последние данные показывают, что общая распространенность в Сальвадоре, Гондурасе и Гватемале низкая (<2%). Кроме того, все три страны включают дозу вакцины против гепатита B при рождении в свои национальные графики иммунизации. Следовательно, целесообразно проводить целенаправленный скрининг на наличие хронического вируса гепатита В у лиц из группы риска, в том числе:

Известные или подозреваемые потребители наркотиков
Мужчины, практикующие секс с мужчинами
Люди с татуировками
Беременные
Дети матерей, инфицированных вирусом гепатита В
Бытовые контакты инфицированных
Лица, инфицированные ВИЧ или гепатитом С
Дети, получавшие продукты цельной крови или компоненты крови до иммиграции
Дети с историей известной или возможной сексуальной эксплуатации

Детям следует завершить серию трехдозовой вакцины против гепатита В, если нет официальной документации о предыдущем завершении.

Дополнительную информацию см. В руководстве по внутреннему скринингу на гепатит В для беженцев.

Инфекции, передаваемые половым путем (ВИЧ, сифилис, гонорея и т. Д.)

Скрининг на ВИЧ не требуется беженцам перед переселением в США. Однако всем беженцам следует предложить скрининг на ВИЧ в соответствии с существующим руководством по скринингу внутренних беженцев на ВИЧ, разработанным CDC. Хотя распространенность ВИЧ в Центральной Америке относительно низкая, несовершеннолетние, прибывающие из Сальвадора, Гватемалы и Гондураса, должны пройти обследование, поскольку ВИЧ-статус матери, вероятно, неизвестен и возможна вертикальная передача.Нет данных о распространенности сифилиса, гонореи и хламидиоза. Скрининг на сифилис и гонорею проводится в соответствии с действующими техническими инструкциями CDC для всех беженцев в возрасте 15 лет и старше. Любой пациент, независимо от возраста, должен быть проверен на сифилис, гонорею или хламидиоз при наличии симптомов или при наличии в анамнезе или обеспокоенности возможной сексуальной активностью или эксплуатацией.

Туберкулез

В Сальвадоре зарегистрировано 2206 новых и рецидивов туберкулеза в 2014 г., а показатель распространенности составил 49 случаев на 100 000 населения. ³³.В Сальвадоре в 2014 г. было подтверждено шесть новых случаев туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) ³³. Гватемала и Гондурас сообщили о более высоком числе случаев и показателях распространенности, чем Сальвадор. Гватемала и Гондурас сообщили о 3 163 и 2 820 новых случаях заболевания и рецидивах соответственно ³⁴ ^, ³⁵. Распространенность туберкулеза составляла 106 на 100 000 населения в Гватемале и 49 на 100 000 населения в Гондурасе в 2014 г. ³⁴ ^, ³⁵.Кроме того, в 2014 г. в Гватемале было зарегистрировано 79 новых случаев МЛУ-ТБ, а в Гондурасе — 38 новых случаев МЛУ-ТБ. ³⁴ ^, ³⁵.

Дети-беженцы проходят скрининг на туберкулез. Любому ребенку с известной латентной туберкулезной инфекцией (ЛТИ) на момент прибытия следует предложить лечение от ЛТИ. Кроме того, те, у кого нет документов о скрининге на ЛТИ, должны пройти тестирование, а тем, у кого результат теста положительный, предлагается лечение.

Для получения дополнительной информации о туберкулезе см. Значок «Профиль туберкулеза» Всемирной организации здравоохранения.

Паразитарные инфекции

Болезнь Шагаса

Примерно 10% случаев болезни Шагаса в Северной и Южной Америке обнаруживаются в Центральной Америке. ³⁶. Сальвадор, Гватемала и Гондурас затронуты одинаково, примерно 200 000 случаев на страну ³⁷. Болезнь Шагаса вызывается паразитом Trypanosoma cruzi и чаще всего передается при контакте с фекалиями инфицированного насекомого-триатомина («целующего насекомого»). Передача также может происходить при укусе человека инфицированными триатомами (болезнь Шагаса CDC).Сообщения о врожденных и посттрансплантационных инфекциях, а также инфекции после употребления зараженной пищи и напитков, хотя и редки, также были задокументированы.

Болезнь Шагаса бывает острой и хронической. Острая инфекция может протекать бессимптомно или характеризоваться неспецифическими симптомами, такими как недомогание, лихорадка и анорексия. Вокруг того места, где паразит попал в организм, может наблюдаться отек. Если не лечить, острая инфекция сохраняется на всю жизнь и может привести к тяжелым осложнениям у 20–30% пациентов.Серьезные осложнения могут включать нарушения сердечного ритма, которые могут привести к внезапной смерти, расширению сердца и расширению пищевода или толстой кишки. Хроническая болезнь Шагаса считается наиболее частой причиной неишемической болезни сердца в Центральной Америке и может вызывать кардиомиопатию спустя годы после первичного инфицирования ³⁶. Однако у большинства людей симптомы заболевания отсутствуют, и они не подозревают об инфекции, а в крови обнаруживается лишь несколько паразитов. В настоящее время плановое обследование детей из Центральной Америки не рекомендуется. ³⁸.

Лямблиоз

Лямблиоз — распространенная инфекция среди всех групп беженцев. Регулярный скрининг бессимптомных лиц не рекомендуется, так как нет доказательств того, что скрининг и лечение являются полезными в этих случаях. Однако инфекция лямблиоза может быть связана с легкими симптомами, такими как дискомфорт в животе, жидкий стул, метеоризм и отрыжка. Кроме того, это было связано с недостаточностью развития у детей. Поскольку маленькие дети могут не описывать симптомы или выражать явные признаки болезни, разумно обследовать детей, особенно детей младше 5 лет.При проведении скрининга предпочтительным методом является анализ стула на антиген, поскольку он более чувствителен и удобен, чем исследование кала на яйца и паразиты.

Малярия

Хотя малярия эндемична для Сальвадора, Гватемалы и Гондураса, ее распространенность недостаточно высока, чтобы оправдать плановый скрининг или предполагаемое лечение. В этих странах преобладает вид малярии Plasmodium vivax , также известный как рецидивирующая малярия. Эта форма малярии может бездействовать в печени и повторно активироваться через месяцы и даже годы после заражения, вызывая клиническое заболевание.Таким образом, клиницисты должны учитывать малярию при дифференциальной диагностике пациента с симптомами, связанными с малярией, такими как лихорадка, даже если контакт с малярией возник не недавно. Дополнительную и обновленную информацию см. В руководстве по внутреннему скринингу беженцев на малярию.

Гельминты, передающиеся через почву (STH)

Люди, живущие в условиях крайней нищеты, включая коренное население Сальвадора, Гватемалы и Гондураса, подвержены высокому риску забытых тропических болезней, включая ЗПГ (в основном аскаридоз, трихоцефалез и анкилостомоз) ³⁹.Известно, что в Гватемале самый высокий уровень инфекций ППГ в Центральной Америке ⁴⁰. Дети из Сальвадора, Гватемалы и Гондураса нуждаются в периодических кампаниях по дегельминтизации из-за значительной эндемичности ГПГ: ежегодно 300 000 детей проходят лечение в Сальвадоре и 1,1 миллиона детей проходят лечение в Гватемале и Гондурасе ⁴¹. Однако данные эпиднадзора за ГПГ в Центральной Америке ограничены ⁴².

Дети из Сальвадора, Гватемалы и Гондураса не получают предполагаемого лечения ППГ перед отъездом.По прибытии в Соединенные Штаты этих детей предположительно следует лечить альбендазолом или обследовать, а затем лечить. Необходимо проверить три образца кала на яйцеклетки и паразитов, взятых с интервалом в 12-24 часа, чтобы выявить инфекцию ППГ и провести соответствующее лечение.

Strongyloides stercoralis

Имеющиеся данные о распространенности Strongyloides в Центральной Америке ограничены. Точно так же отсутствуют данные о распространенности инфекций Strongyloides у U.S. иммигранты и беженцы из Центральной Америки ^{43 900 30. Целесообразно предположительно лечить или проверять на наличие Strongyloides в соответствии с текущими рекомендациями CDC.}

Тениаз

Таениоз у людей, вызываемый Taenia solium (свиной цепень) и Taenia saginata (говяжий цепень), эндемичен в Центральной Америке; однако данные наблюдения ограничены ⁴⁴. Инфекции распространяются при проглатывании недоваренной говядины или свинины или попадании цист непосредственно через орально-фекальное заражение.Большинство инфекций протекают бессимптомно; однако у некоторых пациентов может наблюдаться тошнота, анорексия или боль в эпигастрии. Taenia solium вызывает цистицеркоз и нейроцистицеркоз ⁴⁵. По данным обследования на дому в сельских районах Гондураса в 2011 году, нейроцистицеркоз был основной причиной судорог, составляя 13% случаев ⁴⁶.

Инфекция ленточного червя Hymenelopis nana является эндемической для Гватемалы и, как предполагается, присутствует в других странах Центральной Америки ⁴⁷.Хотя инфекция часто протекает бессимптомно, она может вызывать боль в животе, диарею, анорексию и анальный зуд. Hymenelopis nana распространяется через орально-фекальное заражение, и инфекция чаще всего встречается у детей ⁴⁸.

Инфекция ленточного червя диагностируется с помощью анализа кала на яйца и паразитов. Анализ трех образцов стула, собранных с интервалом 12-24 часа, увеличивает чувствительность. Ленточный червь лечится празиквантелом, при этом тип ленточного червя определяет дозировку и продолжительность лечения ⁴⁹.Однако, если присутствуют судороги или неврологический дефицит неизвестной причины, нейроцистицеркоз необходимо исключить с помощью нейровизуализации до лечения празиквантелом.

Всем детям из Центральной Америки следует сдать общий анализ крови (ОАК) с дифференциалом для оценки эозинофилии (абсолютное количество эозинофилов ≥400). Дифференциальный диагноз повышенного количества эозинофилов широк и должен включать паразитарные инфекции для этой популяции. Следует отметить, что не все паразитарные инфекции вызывают эозинофилию.Пожалуйста, обратитесь к руководству CDC для предположительных вариантов лечения или дальнейшей оценки в зависимости от клинических показаний.

Инфекция, вызванная нейроцистицеркозом, может вызывать судороги и неврологический дефицит. Лечение человека с нейроцистицеркозом альбендазолом и празиквантелом может вызвать побочные эффекты, такие как провоцирование или ухудшение судорог. Следовательно, любой ребенок с известным в анамнезе неврологическим дефицитом или судорожными припадками не должен получать альбендазол или празиквантел до тех пор, пока не будет исключена инфекция нейроцистицеркоза, или пока он не будет назначен после консультации со специалистом по инфекционным заболеваниям.

Неинфекционные заболевания (НИЗ)

Сальвадор, Гватемала и Гондурас не ведут национальных регистров неинфекционных заболеваний. Однако за последние 25 лет хронические заболевания, такие как сердечно-сосудистые заболевания, рак, диабет 2 типа и хронические респираторные заболевания, заменили инфекционные заболевания в качестве наиболее распространенных причин смерти. Уровни ожирения, гипертонии и употребления табака среди взрослых одинаковы во всех трех странах. Инфекционные болезни продолжают оставаться основной причиной смертности детей в возрасте до 5 лет.Неонатальная и материнская смертность высоки, и вероятными факторами, способствующими этому, являются повышенный уровень подростковой беременности и отсутствие дородовой и перинатальной помощи. Смертность в результате дорожно-транспортных происшествий и насилия за последние годы заметно увеличилась. ⁵⁰ ^, ⁵¹ ^, ⁵² ^, ⁵³.

Анемия

Анемия распространена в Сальвадоре, Гватемале и Гондурасе. Распространенность среди детей до 5 лет составляет 30%, 47% и 40% соответственно в этих странах ⁵⁴ ^, ⁵⁵ ^, ⁵⁶.У беременных женщин также отмечается высокая распространенность анемии, особенно в Гватемале, где анемией страдают 22% беременных женщин ⁵⁷, ⁵⁸. Дефицит железа из-за плохого питания или хронической паразитарной инфекции (которая может вызвать вялотекущую кровопотерю) является основной этиологией анемии. Однако многие другие состояния могут способствовать анемии, такие как воздействие свинца, нелеченные хронические заболевания и гемоглобинопатии. Прибывшие дети должны пройти скрининг на анемию с общим анализом крови.Дополнительные инструкции см. В Кратком контрольном списке CDC для внутреннего медицинского осмотра вновь прибывающих беженцев.

Кариес зубов

Следует предположить, что большинство детей до прибытия в США практически не получали стоматологической помощи, профилактической или иной. Профилактический фторсодержащий лак следует наносить всем детям от первого прорезывания зуба до 5-летнего возраста (до четырех применений в год, в зависимости от требований штата). ⁵⁹.Детей следует направлять к стоматологу как можно скорее по прибытии. ⁶⁰.

Задержки развития

Доступ к медицинскому обслуживанию в Центральной Америке часто ограничен ⁶¹, и исследования показывают отставание в диагностике задержек развития среди неанглоязычных детей в США ⁶². Важно, чтобы дети проходили соответствующий скрининг развития через рекомендуемые интервалы с использованием инструментов скрининга, которые были проверены в испаноязычных популяциях ⁶³.Если выявлены задержки, детей следует направлять в службы раннего вмешательства на дому или в школе.

Все дети должны иметь соответствующие возрасту зрение (в возрасте 3 лет и старше) и слух (в возрасте 4 лет и старше — и в любом возрасте, если у ребенка отмечается задержка речи или развития), чтобы исключить нарушения, которые могут существенно повлиять на Развитие и обучение ⁶⁴.

В Сальвадоре, Гватемале и Гондурасе нет национальных программ обследования новорожденных на наличие опасных для жизни излечимых заболеваний.Поставщики медицинских услуг в США должны следовать руководящим принципам штата по скринингу новорожденных среди иммигрантов и детей-беженцев ⁶⁵. Если нет руководящих принципов для конкретного штата, следует рассмотреть возможность метаболического скрининга новорожденных младше 6 месяцев. Детям в возрасте от 6 месяцев до 3 лет целесообразно исследование функции щитовидной железы.

Облучение свинца

Сообщалось об отравлении свинцом среди детей в Центральной Америке в результате воздействия домашних средств, глазурованной свинцом керамики и промышленного загрязнения. ⁶⁶.В исследовании с участием 337 гондурасских детей школьного возраста (средний возраст 7,2 года) оценивался уровень свинца в крови. Из них 19,6% имели повышенный уровень свинца в крови (> 5 мкг / дл) ⁶⁷. Кроме того, в одном городе Эль-Сальвадора, где производятся и утилизируются свинцово-кислотные автомобильные аккумуляторы, тысячи жителей, как детей, так и взрослых, подвергались хроническому воздействию свинца ⁶⁸. Следует отметить, что анемия и недоедание, распространенные среди детей в Центральной Америке, увеличивают абсорбцию свинца.

Все младенцы и дети (от 6 месяцев до 16 лет), а также беременные подростки должны проходить скрининг на повышенный уровень свинца. Повышенный уровень свинца у беременных женщин увеличивает риск самопроизвольного аборта, новорожденных с низкой массой тела и задержки развития у младенцев со значительным воздействием внутриутробно ⁶⁹. Учитывая риск постоянного воздействия свинца в Соединенных Штатах, рекомендуется повторить тестирование на свинец через 3-6 месяцев после прибытия для младенцев и детей (от 6 месяцев до 59 месяцев), а также для детей старшего возраста с длительным анамнезом.Для получения дополнительной информации см. Руководство CDC Refugee Tool Kit по профилактике отравления свинцом среди вновь прибывших детей-беженцев.

Питание

Сальвадор, Гватемала и Гондурас сообщили о высоких показателях низкой массы тела при рождении у младенцев (масса тела при рождении <2 500 г), а также о высоких показателях недоедания среди младенцев и детей. Однако среди детей старшего возраста, подростков и взрослых растет число случаев избыточного веса и ожирения. Этот парадокс плохого питания в раннем детстве, сопровождаемого ожирением у детей старшего возраста и взрослых, был описан как «двойное бремя» недоедания, с которым сталкиваются многие развивающиеся страны.

Недоедание

Неравенство и крайняя бедность напрямую влияют на продовольственную безопасность и питание, особенно в сельских районах Сальвадора. По оценкам, 16,3% сельских сальвадорских семей не в состоянии покрыть расходы на основные продукты питания ⁷³. Кроме того, 18,9% всех детей в возрасте до 5 лет страдают от хронического недоедания, при этом 25,6% детей, проживающих в сельских регионах, страдают от хронического недоедания ⁷³. В целом примерно 21% сальвадорских детей имеют задержку роста, 6% имеют недостаточный вес, а 2% страдают истощением. ⁵⁴ ^, ⁷⁴.По оценкам, недоедание является причиной более 30% всех детских смертей, поскольку известно, что хроническое недоедание увеличивает тяжесть заболевания ⁵⁴. Недостаток питательных микроэлементов, в том числе дефицит витамина А, также часто встречается у детей раннего возраста ⁵⁴.

Сельское коренное население Гватемалы часто страдает от отсутствия продовольственной и экономической безопасности. Гватемала занимает третье место в мире по показателям задержки роста или хронического недоедания ⁵⁵ ^, ⁷⁵.Коренное население страдает от недоедания в непропорционально большей степени и в два раза чаще, чем дети некоренного происхождения. ⁵⁵, ⁷⁴. Приблизительно 49,8% всех детей Гватемалы недоедают, а 69,5% детей в сельских районах и районах проживания коренного населения недоедают ⁷⁶. Дефицит микронутриентов в Гватемале довольно распространен. Многолетнее исследование показало, что 16% детей дошкольного возраста испытывают дефицит витамина А ⁷⁷. Также наблюдается дефицит йода, и сообщается, что менее 50% семей используют йодированную соль ⁵⁵.

Бедность широко распространена в Гондурасе: 75% населения живет в крайней бедности, а 12% домохозяйств испытывают отсутствие продовольственной безопасности ⁷⁸, ⁷⁹. Как и в других странах Центральной Америки, задержка роста и недоедание остаются серьезными проблемами, особенно для детей, живущих в сельских районах. До 50% детей в некоторых регионах имеют задержку роста, а дети, живущие в сельской местности, в 2,5 раза больше подвержены риску задержки роста, чем дети, живущие в городских районах ⁵⁶.Кроме того, вероятность задержки роста у детей из беднейших домохозяйств в восемь раз выше, чем у детей, рожденных в богатых семьях ⁵⁶. Хроническое недоедание может достигать 48,5% в некоторых сельских районах ⁷⁸. Дефицит микронутриентов, включая дефицит витамина А и железа, распространен в Гондурасе и часто наблюдается у маленьких детей и беременных женщин ⁵⁶

Всем детям в возрасте от 6 до 59 месяцев следует назначать поливитамины с железом.Дети старшего возраста, страдающие от недоедания, также должны принимать поливитамины из-за предполагаемого дефицита питательных микроэлементов.

Избыточный вес и ожирение

Хотя задержка роста и недоедание затрагивают большое количество детей в Сальвадоре, Гватемале и Гондурасе, избыточный вес и ожирение становятся все более серьезными проблемами. По оценкам, в Латинской Америке от 42,5 до 51,8 миллиона детей в возрасте от 0 до 18 лет имеют избыточный вес или страдают ожирением ⁸⁰. Исследования показывают, что от 5% до 6,5%, 13% и 7,1% детей в возрасте до 5 лет имеют избыточный вес или страдают ожирением в Сальвадоре, Гватемале и Гондурасе соответственно ⁸¹.На сегодняшний день немногие страны реализовали национальные программы или стратегии по борьбе с эпидемией ожирения в Латинской Америке ⁸⁰.

Избыточный вес и ожирение также растут среди взрослого населения, причем до 60% взрослого населения в некоторых странах Латинской Америки классифицируются как избыточный вес или ожирение. ⁸². Кроме того, модели предсказывают рост избыточной массы тела и ожирения у женщин и мужчин в Латинской Америке к 2050 г. ⁸². Недавние исследования показывают, что 67% гватемальцев старше 15 лет имеют избыточный вес, из которых 29% страдают ожирением ^{55, 83}.В Гондурасе 46% всех людей в возрасте 15 лет и старше имеют избыточный вес или страдают ожирением ^{56, 83}, в то время как 49% взрослого населения Сальвадора имеют избыточный вес или страдают ожирением ^{54, 84}. Избыточный вес и ожирение как у детей, так и у взрослых в значительной степени связаны с быстрой урбанизацией, принятием современных западных диет с высоким содержанием рафинированных углеводов, насыщенных жиров и сахаров, а также все более малоподвижным образом жизни. Кроме того, медленный прогресс в улучшении инфраструктуры сообщества и систем общественного здравоохранения способствовал возникновению эпидемий избыточного веса и ожирения ^{54, 55, 56, 85}.

За детьми с избыточным весом (ИМТ 85-95 процентиль) или ожирением (ИМТ > 95 процентиль) следует внимательно следить. Детям с избыточным весом или ожирением, а также членам их семей следует предложить диетическое консультирование и поддержку ⁸⁶. Всем детям, независимо от статуса питания, необходимо проверять артериальное давление начиная с 3 лет и проверять ежегодно ⁸⁷. Информационные бюллетени и другие материалы, пропагандирующие здоровое питание и физическую активность, следует предоставлять всем вновь прибывшим пациентам и членам их семей, независимо от статуса питания по прибытии.

См. Руководство CDC по питанию и росту для получения дополнительных рекомендаций и руководств по оценке и управлению питанием среди недавно прибывших детей-беженцев.

Психическое здоровье

Можно предположить, что подавляющее большинство детей, прибывающих по программе CAM, испытали в своей жизни какую-либо форму серьезной травмы. Эти дети происходят из стран Центральной Америки, в которых уровень убийств входит в пятерку крупнейших в мире, высокий уровень бедности и широко распространенное насилие со стороны группировок.Насилие в отношении женщин, часто совершаемое бандами и вооруженными преступными группировками, широко задокументировано. В исследовании Организации Объединенных Наций 2013 года были опрошены 400 беспризорных детей из Сальвадора, Гватемалы, Гондураса и Мексики. На вопрос, почему они решили мигрировать в Соединенные Штаты в одиночку, почти половина (48%) ответили, что покинули свою страну из-за эскалации насилия. Кроме того, 81% назвали семью или имеющиеся возможности, 21% сообщили о жестоком обращении в семье, а 16% назвали лишения факторами, способствовавшими их миграции ⁷⁰.

Доступ к стационарным и амбулаторным услугам по охране психического здоровья очень ограничен. Отчет Панамериканской организации здравоохранения (ПАОЗ) показал, что только 363 гватемальских пациента имели доступ к национальным амбулаторным психиатрическим учреждениям, из которых 58% составляли женщины, а 14% — дети или подростки. Среди пролеченных наиболее частым диагнозом были тревожные расстройства ⁷¹. Из-за ограниченного доступа к амбулаторному и стационарному психиатрическому лечению в Сальвадоре, Гватемале и Гондурасе трудно определить распространенность и типы проблем психического здоровья среди детей и взрослых.

Оказавшись в Соединенных Штатах, эти дети-беженцы должны адаптироваться к новой физической среде и культуре. Оставление семьи и близких в их родной стране и адаптация к жизни в Соединенных Штатах в сочетании со стрессом, связанным с одиночеством и возможным воссоединением с незнакомыми или неизвестными родственниками, могут иметь серьезные последствия. Эти факторы повышают риск депрессии, беспокойства, посттравматического стрессового расстройства, злоупотребления психоактивными веществами и бездомности ⁷². Следовательно, важно оценивать этих детей на предмет проблем с психическим здоровьем при первоначальном обследовании и на постоянной основе путем частых посещений соответствующим образом подготовленных поставщиков психиатрических услуг и поставщиков первичной медико-санитарной помощи.

Яблочный уксус может помочь избавиться от бактерий и дрожжевых инфекций; естественное лекарство — Атлас науки

Устойчивость к антибиотикам представляет собой серьезную проблему для здоровья во всем мире. Никогда еще не было такой большой потребности в новых противомикробных средствах, которые являются естественными, активными в отношении множества организмов и идеально полезными для пациента.

Бактерии, такие как E-Coli, Staphylococcus aureus и дрожжи, такие как Candida albicans, могут легко стать патогенными, особенно если у человека иммунодефицит, рак, другие инфекции или нарушение питания.Патогенные кишечные палочки являются основной причиной инфекций мочевыводящих путей, диареи, респираторных заболеваний и пневмонии. В то время как золотистый стафилококк связан с фурункулами, карбункулами, целлюлитом, сепсисом и синдромом токсического шока. Candida albicans может вызывать дрожжевые инфекции в кровотоке, ротовой полости и гениталиях. Яблочный уксус (ACV) в течение многих лет использовался в качестве традиционного народного средства для лечения таких состояний, как несварение желудка, высокий уровень холестерина в крови и поддержания общего состояния здоровья. Сегодня он является основным ингредиентом многих натуральных пищевых напитков в сочетании с медом, другими фруктами и травами.Это неудивительно, поскольку он также может уменьшить кислотный рефлюкс, контролировать уровень глюкозы в крови и облегчить инфекции. Яблочный уксус производится из сидра, подвергшегося биоконверсии уксусной кислоты и имеющего относительно низкую кислотность (5% уксусная кислота). Он также содержит органические кислоты, флавоноиды, полифенолы, витамины и минералы.

Рис. 1. Влияние яблочного уксуса на очистку лейкоцитов от микробов. Яблочный уксус снижает способность бактерий и дрожжей к росту. это помогает лейкоцитам, таким как макрофаги, очищать и поглощать эти микробы, что, в свою очередь, уменьшает воспаление и секрецию вредных цитокинов.
Мы протестировали действие коммерческого ACV непосредственно на микробные культуры в течение 24 часов, измеряя зоны ингибирования. Мы также изучили, может ли ACV оказывать противовоспалительное действие in vitro. Это было протестировано с использованием моноцитов, полученных из крови человека, которые инкубировали с микробами и AVC. Собранные супернатанты анализировали на маркеры воспаления и активность антибиотиков. Мы также изучили активность лейкоцитов и поглощение бактериями и дрожжами после добавления ACV к инфицированным лейкоцитам.
Мы доказали, что ACV потенциально может защитить организм от вредных бактерий, останавливая рост вредных бактерий и грибков на своем пути, останавливая распространение этих инфекций. Механизм, с помощью которого работает ACV, заключается в том, что он убивает патогенные организмы, разрушая их клеточные стенки, структуру белка, ядерные белки, метаболические ферменты, изменяя их структуру. Это, в свою очередь, предотвращает размножение этих организмов и останавливает их способность дышать и подвергаться метаболизму.Это приводит к их гибели и увеличению поглощения белыми кровяными тельцами, такими как моноциты и макрофаги, работа которых заключается в устранении инфекций посредством процесса фагоцитоза. Добавление ACV к инфицированным лейкоцитам приводит к увеличению клиренса этих вредных микробов клетками, уменьшению высвобождения химических веществ, связанных с воспалительными процессами, таких как провоспалительные цитокины. Таким образом, мы показали, что ACV может уменьшить количество бактерий и помочь избавиться от инфекций, вызванных некоторыми бактериями и дрожжами.Это означает, что ACV можно использовать для лечения клинических инфекций без вредных побочных эффектов, следовательно, он может быть естественным альтернативным терапевтическим средством.
Даршна Ягник, Аджит Дж. Шах
Департамент естественных наук, Школа науки и технологий, Университет Мидлсекса, Лондон,
Соединенное Королевство
Публикация
Противомикробная активность яблочного уксуса в отношении кишечной палочки, золотистого стафилококка и Candida albicans; подавление экспрессии цитокинов и микробных белков.
Ягник Д., Серафин В., Шах А.Дж.
Научная репутация, 29 января 2018 г.
Борьба с простудой и гриппом с помощью традиционной китайской медицины
УХОД
Прививка от гриппа снижает риск заражения гриппом примерно на 50 процентов.
Для большинства людей любые побочные эффекты прививки от гриппа легкие и проходят сами по себе в течение нескольких дней.
Если у вас есть маленькие дети, которым делают прививку от гриппа впервые, им потребуется две дозы с интервалом в четыре недели.
Когда вы или кто-то из членов вашей семьи болеет простудой или гриппом, все, что вам нужно, — это как можно быстрее избавиться от болезни. Использование китайской медицины или народной медицины может помочь вам укрепить защитные силы вашего организма, чтобы предотвратить болезни и быстрее выздороветь, когда болезнь все же примет участие.
Укрепляйте свое тело, чтобы не заболеть
Китайская медицина учит нас тонизировать Защитная ци (произносится «чи»)
Часто мойте и увлажняйте руки.Ваша кожа — одна из ваших первых защит от патогенов — термин, используемый для обозначения любой причины болезни, будь то вирус, бактерии или холод ветра или жара ветра.
Высыпайтесь. В идеале старайтесь непрерывно проводить восемь-девять часов каждую ночь.
Ешьте питательную и легко усваиваемую пищу. Выбирайте супы и рагу на основе бульонов, вареные зерна и овощи и экологически чистое мясо. Замени кофе зеленым чаем. Ешьте медленно, сосредотачиваясь на чувственности еды.
Управляйте стрессом, медитируйте и дышите. Попробуйте выделить пять минут своего напряженного дня, чтобы сделать глубокий вдох.
Связать. Носите самую теплую одежду и берегите кожу и нос от ветра.
Управляйте атакой
Удалить патогенные микроорганизмы
Определите, являются ли симптомы «горячими» или «холодными». В китайской медицине к симптомам «простуды» относятся чихание, насморк с прозрачной или белой мокротой, зуд в горле, кашель с прозрачной или белой слизью и болезненное состояние тела.Если они у вас есть, китайская медицина утверждает, что возбудитель «холоден ветром». «Горячие» симптомы включают боль в горле, лихорадку больше, чем озноб, жажду, заложенность носа желтой мокротой и кашель желтой слизи. Эти симптомы означают, что возбудитель — это «ветер-жара». Эти знания помогут вам понять, как поступать с продуктами и травами.
Ешьте и пейте, чтобы изгнать болезнетворные микроорганизмы. Ешьте много супов на бульоне и риса. Пейте теплые жидкости. Если ваши симптомы более «холодные», добавляйте в пищу имбирь, корицу, зеленый лук и чеснок.Если ваши симптомы более сильны, выпейте много мятного чая и ешьте охлаждающие фрукты, такие как апельсины и другие цитрусовые. В обоих случаях избегайте молочных продуктов, сахара / сладостей, а также жирных или жареных продуктов.
Уютитесь и отдохните. Продолжайте носить самую теплую одежду и защищайте кожу и нос от ветра. Это поможет организму потеть — это основной способ избавления организма от болезнетворных микроорганизмов. Отдыхать. Спать. Позвольте организму использовать большую часть своей энергии для борьбы с патогеном.
Проконсультируйтесь с лицензированным специалистом по иглотерапии. Иглоукалывание и китайские травы могут помочь сократить продолжительность болезни.
И, наконец, знайте, когда пора посоветоваться с семейным врачом. Если у вас очень высокая температура или лихорадка, которая держится более трех дней, если появляется хрип или вам становится все труднее дышать — обратитесь к врачу.
ЕЩЕ НРАВИТСЯ НА ЭТО
.
No related posts.