Монталь с феромонами: Духи с феромонами Montale Roses Musk 45ml купить по оптовой цене 169 руб.

Содержание

Подобрать продукт категории MONTALE 20ml с феромонами оптом по конкурентной цене с доставкой по всей России и Белоруссии

Montale — это французские нишевые парфюмы, которые выделяются своей любовью к ароматам Востока и Аравии.  В каждом продукте компании объединена страсть создателя и основателя Пьера Монталя и некая загадочность запахов восточных стран. До создания собственного бренда, Пьер Монталь некоторое время практиковался и обучался в Саудовской Аравии, где создавал парфюмерную коллекцию специально для королевской семьи. По возвращению в родной Париж, он основывает собственную парфюмерную компанию, начав создавать свои оригинальные ароматы.

В последнее время особой популярностью стали пользоваться духи с феромонами. В мире романтических отношений, где одну из главных ролей играют запахи, феромоны способны помочь привязать друг к другу даже совсем разных по характеру и темпераменту людей.

Феромоны не только привлекут внимание вашего избранника или избранницы, но и заворожат, вскружат разум от нахлынувших чувств и ощущений.  Поэтому появилась специальная

линия парфюмов Montale 20 мл с феромонами. Красивые, фееричные, они не только привнесут в вашу жизнь ярких красок, но и придадут ей дополнительное очарование и привлекательность.

Стоит отметить, что данная серия ничем не отличаются и не уступает полноформатным версиям духов. Каждый продукт имеет металлический флакон и упакован в специальной брендовый мешочек. Однако при этом небольшой объём дает целый ряд неоспоримых преимуществ. Во-первых, он легок и его просто носить в небольшой сумочке или косметичке, так как он не занимает много места. Во-вторых, ранее упоминавшийся металлический корпус, не только имеет привлекательный вид, но и защитит содержимое от расплескивания в случае падения или других несчастных случаев. В-третьих, можно приобрести несколько разных ароматов вместо одного полноразмерного. В-четвертых, стойкость парфюмерной композиции находится на довольно высоком уровне, что позволит удивлять и завораживать долгое время.

Аромат Аoud Night, выпущен в 2014 году. Поставляется в знаковом для бренда флаконе, который имеет чёрные и золотистые цвета. При первом вдохе, ощущаются загадочные нотки, которые испускает малазийский уд. Чуть позднее к нему добавляются аккорды сочных фруктов и цитрусовых, представленных бергамотом и лимоном. В основе парфюмерной композиции лежит чувственная роза и индонезийская пачули. Среди остальных оттенков аромата присутствует сандал, амбра, белый мускус и гваяковое дерево.

Парфюмы Crystal Flowers предназначены для женщин, идеально подчеркивая их нежность, привлекательность и женственность. Композиция аромата представлена запахами мускуса и розы, а также мандарина и ландыша. Отлично подойдут для использования в любое время года, кроме зимы.

Аромат Chocolate Greedy направлен на аудиторию, в частности женскую, которая обожает шоколад. Тут встречаются богатый вкус черного и молочного лакомства с аппетитным и нежным шоколадным кремом со сливками. Парфюмерная симфония открывается пудровыми аккордами и дополняется сбалансированной комбинацией запахов кокоса, трюфелей и апельсина.

Таким образом, если вы хотите блистать, привлекать внимание и очаровывать противоположный пол, добавляя к собственной чувственности всё новые грани, то духи Montale 20 мл с феромонами станут отличным выбором.

 

Montale Paris 20 мл оптом (с феромонами)

Цена

Название:

Артикул:

Текст:

Выберите категорию:

Все КОСМЕТИКА » Косметика O.TWO.O »» Тональные крема от O.TWO.O »» Пудра от O.TWO.O »» для губ от O.TWO.O »» Макияж для глаз от O.OTWO.O »» Румяна от O.TWO.O »» Консилеры, хайлатеры от O.TWO.O » М — А — С » Тушь для ресниц » Тени для век » Кремы для ухода » Пудра для лица » Румяна для макияжа » Помада для губ » Пилинги для очищения » Карандаши для макияжа » Хайлайтер » Блеск для губ » Тональные крема » Подводки для глаз » Набор кистей для макияжа » Маска для лица » Корейская косметика » Тканевые маски для лица » патчи для глаз Парфюмерия оптом » Женские духи » Мужские духи » Оригинал » Арабские духи »» Арабские духи для женщин »» Арабские духи для мужчин »» Арабские масляные духи (шариковые) 20мл »» AJ ARABIA »» Арабские Emperor »» Fragrance AQUA -40% » Нишевая парфюмерия »» EXCLUSIVE »» LUX женские ароматы »» LUX мужские ароматы »» MASQUE »» JO MALONE »» BY KILIAN »» MONTALE »» FONTELA »» GUCCI Селективная »» EX NIHILO »» MANCERA »» AJMAL »» BYREDO »» ATELIER COLOGNE »» KURKDJIAN »» ATTAR COLLECTION »» DIPTYQUE »» KORLOFF »» BVLGARI »» TOM FORD »» XERJOFF »» LE LABO »» JULIETTE HAS A GUN »» VAN CLEEF & ARPELS »» TIZIANA TERENZI »» RAMON MONEGAL »» MAISON FRANCIS KURKDJIAN »» SIMIMI в подарочной упаковке »» INITIO PARFUMS PRIVES »» SALVATORE FERRAGAMO »» VERSACE »» LANCOME »» AZZARO »» GIORGIO ARMANI »» PENHALIGON’S »» HERMES »» CHLOE » Тестеры » Наборы » Авто ароматизатор » Аромадиффузор для дома » Пробники духов »» духи с феромонами 10 мл. »»» женские 10мл »»» мужские 10мл »»» Для женщин 10 мл »»» Для мужчин 10 мл »» Мини парфюм 15 мл »»» Для женщин 15 мл »»» Для мужчин 15 мл »» 3х15 мл »» 3х15 с феромонами »» Наборы 5*15 »» 20 МЛ »»» Для женщин 20 мл »»» Для мужчин 20 мл »» Наборы *3×15* »»» Для женщин 3х15 мл »»» Для мужчин 3х15 мл »» Дж. Малон 30 ml. »» Byredo 50 ml. »» Парфюмерия 45ml »»» Для женщин 45 мл »»» Для мужчин 45 мл »» Парфюмерия 50 мл »»» Для женщин 50 мл »»» Для мужчин 50 мл »» 60ml »» Пробники 69 мл. »» Saria 69 ml. в подарочных упаковках »» Пробники духов 30 ml женские »» Пробники духов для мужчин 30 мл » Дезодоранты » Номерная Парфюмерия Разное » Гель лаки для ногтей »» Lavelle 12 ml » Ресницы » Накладные ногти » Подарочные пакеты » Каталог парфюмерии » Кассеты для бритья » Scholl » Пилочки для ногтей » Стикеры и наклейки » Кальян НОВИНКИ » Мужская парфюмерия » Женская парфюмерия » Косметика оптом » Распродажа » Косметические наборы Подарочные наборы

Производитель:
Все*AmouageAdidasAmouageAmouage;женскиеAngel SchlesserAnne KleinAntonio BanderasArmand BasiAsahiAtomaxAzzaroBaldessariniBourjoisBruno BananiBURBERRYBvlgariBy KilianBYREDOCalvin KleinCarolina HerreraCarreraCerrutiCHANELChristian DiorCLIVE CHRISTIANCRISTELLD&GDavidofDel’ta luxDieselDiorDKNYDsquared2EISENBERGEllie SaabFashionFENDIFontelaGenevaGianfranco FerreGilletteGiorgio ArmaniGivenchyGucciGUERLAINHAYARIHermesHublotHugo BossISSEY MIYAKEJoopKENZOKilianLacosteLancomeLanvinLavelleManceraMANDARINA DUCKMarc JacobsMichael KorsMONT BLANCMontaleMoschinoNARCISO RODRIGUEZNikeNina RicciOKAMIPaco RabannePalladiumPatek PhilippePumaQ&QQmaxRadoRolexS.T. DupontSADKOSalvatore FerragamoSERGEY GRIBNYAKOVSergio TacchinishaikSokolovSportyStarletSUNLIGHTSwarovskiTom FordTrimmermateTRUSSARDIVacheron ConstantinVersaceViamaxViktor & RolfYOHJI YAMAMOTOYves Saint LaurentАдамантАлькорБронницкий ЮвелирВИКОГРОДЭСДемиургженские-женские;AmouageЗолотовКамеяКассеты для бритьяКитайПодарочные пакетыПримаЭксклюзивТестеры BYREDOТЕСТЕРЫ HAYARIТестеры MontaleТестеры ShaikТопазТри О ПрофитЭстетЮСС

Новинка:
Вседанет

Спецпредложение:
Вседанет

Результатов на странице: 5203550658095

Найти

Монталь. Мифы против реальности. — блог Ирена на Аромо

Про Монталь ходят легенды и рядом с ними огромное количество слухов 
Чего только не придумают )))
Давайте раз и навсегда!
1. Монтáль, ударение на «а»
2. Это не масленные духи.
3. Флаконы заполняются не «под горлышко».

А теперь обо всем по порядку.

С брендом я познакомилась еще в далеком 2008, а после того, как начала рабоать в бьюти-бизнесе, знакомство приобрело более теплый характер.

Бренд носит фамилию своего создателя Пьера Монталя. Он француз, который начинал свою карьеру с создания ароматов для арабского шейха и его жён. Поэтому в ароматах Монталь всегда буйство красок, яркий шлейф и непревзойденная стойкость ароматов.

Так же у господина Монталь есть еще одно детище — парфюмерный бренд Mancera, производство которого практически полностью курирует его дочь. В бутике Монталь в Париже эти два бренда представлены вместе.

Вернемся к флаконам.

Флаконы в продаже бывают двух объёмов, 50 и 100 мл. Все остальное, семплы, флаконы по 20 мл — это комплименты за покупку, которые дарят клиентам, а не продают.

Флакон 100 мл спокойно вмещает в себя 160 мл жидкости, я проверяла опытным путём) флакон 50 мл — вмещает 60 мл жидкости.
Раньше все флаконы открывались, и это даже было фишкой бренда, приобрести 2 аромата и смешать в одном флаконе свой собственный. Но сейчас это не так. Флаконы по прежнему можно открыть, но приложить потребуется чуть больше усилий, чем раньше.

Смешивать никто не запрещает, но это не есть рекомендация от бренда, а лишь вообще личное желание. Но флаконы по прежнему могут вместить в себя больше, чем заявлено на упаковке.
Все флаконы на российском рынке до 2018 года были глянцевые. В Европе и арабских странах можно встретить матовые, это не подделки, просто в России таких флаконов до 2018 года не было. Так же с этого года бренд принял решение унифицировать дизайн и теперь по всему миру флаконы будут одинаковые. Как только закончатся складские запасы дистрибьторов разумеется)


Каждый флакон упакован в тканевый мешочек с фирменным логотипом дома.
Название аромата на коробке и на флаконе приклеивается вручную, поверх флакона. Цвет наклейки может отличаться от цвета флакона.

Сам Пьер Монталь ненавидит зелёный цвет, поэтому никогда его не использует. 

Если вы сейчас вспомните шикарный Уд самарканд в ярко зеленом флаконе, увы, это был фейк от арабского производителя, о котором Пьер Монталь все еще вспоминает с ужасом.

Кстати, у меня есть интервью Пьера, где он рассказывает об этом, если интерсно почитать — дайте мне знать)

Как отличить Монталь оригинал от подделки: фото сравнение

После поездки по востоку Пьер Монталь создал уникальные духи. Французу так понравились восточные запахи, что он решил поделиться ими с другими. Так появились духи Montal. С задачей Пьер справился – максимально передал атмосферу Востока. Истинные ценители парфюмерии смогли купить духи в интересном алюминиевом флаконе. Выбор такого металла позволил надолго сохранить первоначальный аромат. Духи остаются насыщенными на протяжении нескольких лет. Пьер Монталь создал неповторимую серию товаров. Появилось большое число поклонников восточных ароматов, а вместе с ними дали о себе знать компании, поставляющие контрафакт.

Мешочек

Для настоящего флакона используют высококачественный алюминий. Это обеспечивает длительное сохранение свойств продукта. Тара выглядит стильно, упакована в плотный и тактильно приятный мешочек. На нём есть фирменный логотип — Montale Paris. Он присутствует не только в виде изображения – фирменное название есть и на вшитой в мешочек этикетке. Уделите особое внимание графическому исполнению эмблемы – в оригинале линии не смешиваются друг с другом.

Флакон

  • Первое что нужно обследовать — логотип и расположение букв в названии. У оригинала линии квадратов не скрещиваются. На подделке — пересекаются. Так же рассмотрите буквы в названии, расположение буквы P (в слове PARIS) относительно верхнего слова, подробнее на фотографии:
Подделку выдает логотип с пересекающимися линиями.
  • Пульверизатор легко открутить от горлышка. Резьба исполнена качественно, можно сделать два полноценных витка. На подделке резьба или отсутствует (невозможно открутить пульверизатор) или выполнена плоско, без объема.
Слева — подделка, резьба плоская, витки еле различимы.
  • Горлышко покрашено в белый цвет. (Но есть исключения, например, матовые алюминиевые флаконы не покрываются эмалью, поэтому белой краски нет.)
Оба варианта — оригинал.
  • Флакон, аналогично упаковке, украшен наклейкой с информацией об аромате и концентрации духов.
Слева — оригинал, наклейка отдирается. Справа — подделка, название серии духов напечатано на флакон.
  • У пульверизатора есть зажим, декорированный подвеской-логотипом бренда. Концы оригинального зажима параллельны. На подделке расширяются, легко гнутся.
Сверху — подделку выдают не параллельные концы зажима.
  • Подвеска крепится при помощи красивого миниатюрного кольца.

  • Зажим легко снять и поставить обратно, усилий прилагать для этого не нужно – вы услышите характерный щелчок.
  • На оригинальном флаконе, на обратной стороне выгравирован серийный номер. У подделки номер отсутствует или напечатан краской. Оригинал — номер на задней стороне.
  • У флакона немного углубленное дно – плоским оно быть не должно.

Особое внимание уделите цвету сопла на пульверизаторе. Некоторые думают, что в оригинальном варианте возможно только черное исполнение, однако это не так. Ошибочное мнение связано с тем, что в большинстве своём духи имеют именно черное сопло. Но встречается и другой вариант – с белым оформлением. Нестандартный цвет характерен для розовых и черных флаконов.

Один или несколько вышеупомянутых признаков могут отсутствовать в оригинальной продукции. Такое случается редко. К производственному браку относят неровную наклейку с наименованием продукции, неокрашенное горлышко. Даже резиновая прокладка может отсутствовать. Случаи единичны, однако покупатель не застрахован от приобретения подобной продукции. Недочеты связан с ручным трудом, который используют при создании фирменной парфюмерной продукции.

Упаковка

Снаружи коробка декорирована наклейкой с информацией о продукции: указаны название и концентрация духов. Верхний правый угол украшен фирменным наименованием — Montale Paris. Обратите внимание: буква «P» находится строго под буквой «А» из первого слова. Пересечений линий быть не должно. Ниже названия аромата располагается информация об объеме. В левой части указано значение в миллилитрах, в правой части – в унциях. Текст на упаковочной коробке отображен четко. Краска не растекается, буквы ровные, полиграфические дефекты отсутствуют. Напротив производителя написано «Made in France».

Сравните логотип, буквы в слове paris. Название серии духов приклеено. GOLD FLOWERS в оригинальных духах — это наклейка.

Коробка обернута в прозрачную пленку. Она прочная, но не грубая. Такая обёртка защищает картонную упаковку от загрязнения и деформации. Края плёнки идут внахлест – это заметно с каждой стороны. Обертку фиксируют термическим методом.

Все признаки подлинника — пленка запаяна высокой температурой, ровные швы.

Цветовое исполнение упаковки аромата может быть любым. Одни и те же духи поставляются в 2-3 вариациях. Для французского производителя это норма. Даже флаконы у одинакового аромата могут быть разными в зависимости от объема ёмкости.

Заводы (на территории Франции функционирует 4 предприятия) выпускают фирменную продукцию в нескольких вариациях. Старый дизайн обновляют, появляются интересные детали и, соответственно, упаковка, отличная от привычных образцов. Завод производит товары со знакомым и обновленным внешним видом одновременно.

В 2017 Montale Paris добавила на тыльную часть коробки штрих-код, а на заднюю часть флакона стали наносить серийный номер. Выпуск продукции без этих опознавательных знаков продолжается до сих пор. Как будет оформлен аромат, какой номер батч-кода укажет производитель, зависит от страны импорта.

Отдельного внимания заслуживает цена продукции. Оригинальный парфюм от мирового бренда стоит дорого – заниженная стоимость товара или большие скидки вызывают подозрения.

Контрафактная парфюмерия может нанести непоправимый вред организму, как и поддельные лекарства. В составе подделок имеются синтетические компоненты, которые неблагоприятно сказываются на здоровье человека. Лучше купить оригинал в маленьком объеме, чем поддельный товар в большом.

Видео

Видео сравнение качественной подделки (копии) и настоящих духов Montale:

Введение

Введение

11-цис-вакценилацетат (cVA) представляет собой летучий мужской феромонный компонент плодовой мухи Drosophila melanogaster. Это специфический для мужчин липид, синтезируемый в семявыбрасывающем канале [1, 2], и один зрелый самец имеет на кутикулярной поверхности от 200 нг до 2 мкг cVA [3, 4]. Наличие или отсутствие cVA используется для дискриминации по признаку пола и контролирует репродуктивное поведение мужчин и женщин [5]. cVA является антиафродизиаком для самцов и подавляет ухаживания [4–8], в то время как cVA, выделяемая ухаживающим самцом, является афродизиаком для самок и усиливает восприимчивость к совокуплению [8].Также известно, что cVA вызывает внутривидовую агрегацию [3] и мужскую агрессию [9, 10].

Антиафродизиакальная функция cVA не только способствует подавлению гомосексуальных ухаживаний между мужчиной и мужчиной [8], но также помогает мужчине отличить девственную женщину от спарившейся самки. Ранее мы обнаружили, что cVA передается самке во время совокупления с другими компонентами семенной жидкости и снижает сексуальную привлекательность спарившейся самки из-за небольшого количества cVA, которое она представляет [4].Масс-спектрометрический анализ кутикулярных поверхностей показал, что среднее количество cVA на одной спарившейся самке через 24 часа после спаривания составляло 9–200 нг [4, 6, 11, 12]. Поскольку спариваемая самка не принимает второго самца ухаживания и избегает дальнейшего совокупления, самец может судить о статусе спаривания партнера по наличию или отсутствию cVA и соответствующим образом корректировать свою деятельность по ухаживанию. Однако было неясно, как самцы мух отличает присутствие или отсутствие крошечного количества cVA у самки-мишени от других ближайших самцов в сложной обонятельной среде и принимают соответствующее решение об ухаживании.

У насекомых, включая Drosophila, запахи первоначально воспринимаются пахучими рецепторами (OR), экспрессируемыми на поверхности нейронов обонятельных рецепторов (ORN), расположенных на антеннах. ORN, экспрессирующие любое данное OR, проецируют свои аксоны в определенные клубочки в антеннальной доле (AL), первичном обонятельном центре. Эти аксоны образуют синаптические контакты с проекционными нейронами (PN), которые посылают аксоны в грибовидное тело, и локальными нейронами (LN), которые устанавливают связи между множественными клубочками [13].К настоящему времени два OR, Or65a и Or67d, были идентифицированы как рецепторы cVA [14]. Среди них было показано, что функция Or67d необходима для острой реакции агрессии на cVA, в то время как хроническая функция нейронов Or65a имеет решающее значение для социального подавления агрессии [10]. Хроническое подавление активности нейронов Or65a, но не активности Or67d, также привело к нарушению ответа cVA на подавление ухаживания [4]. Напротив, недостатка рецептора Or67d достаточно, чтобы блокировать острый контроль ухаживания [8].Недавно было обнаружено, что рецепторы Or65a и Or67d имеют разные потребности в белке, связывающем запах, для их активности, что может быть искажено высокими концентрациями cVA [15], что указывает на функциональное подразделение этих двух рецепторов.

В этом исследовании мы исследовали, как самцы реагируют на cVA в изменчивой обонятельной среде и как это приводит к адаптивным решениям об ухаживании. Во-первых, мы обнаружили, что присутствие другого самца или cVA в этой области снижает мотивацию ухаживания самца по отношению к самке.Это ингибирование можно было преодолеть путем предварительного воздействия запаха и обонятельного привыкания к cVA или мужскому запаху. Визуализация в реальном времени ORN Or67d, которые обладают высокой чувствительностью cVA, с использованием маркера нейральной активности GCaMP, показала, что длительное воздействие cVA в окружающей среде снижает уровни ответов cVA в AL. Фармакологический и генетический скрининг показал, что рецепторы GABA A в небольшом подмножестве LN вносят вклад в обонятельное привыкание. Мы также обнаружили, что привыкание позволило самцам дикого типа получить сексуальное преимущество в конкурентной среде ухаживания, которое самцы с мутантом GABA A не смогли получить.

Результаты Присутствие другого самца подавляет ухаживание самца

Чтобы определить антиафродизиакальную активность cVA, мы провели поведенческий анализ с использованием двухслойной камеры (рис. 1A), в которой наивный самец, находящийся в верхней клетке, подвергался воздействию различных количеств cVA. в нижней ячейке под сетчатым барьером и исследовали его поведение по отношению к девственной самке как объекту ухаживания, размещенному в верхней ячейке. Мы обнаружили, что девственные самки без или всего лишь 0,02 нг cVA вызывали у самцов высокий уровень ухаживания, в то время как присутствие cVA над сетчатым барьером снижало уровень ухаживания самцов (рис. 1B).В предыдущих исследованиях было показано, что 150 нг — это минимальная cVA, необходимая для подавления ухаживания [4, 7, 8, 12, 16–19]. В нашей системе анализа 0,2 нг cVA было достаточно, чтобы вызвать значительное подавление ухаживания (рис. 1B), демонстрируя высокую чувствительность самцов к cVA. Мощность подавления была постоянной, о чем свидетельствует отсутствие значимых различий между уровнями ухаживания в присутствии различных количеств cVA, за исключением 0,02 нг (P> 0,05, рис. 1B). Мы также подтвердили, что присутствие не только синтетической cVA, но и другого самца в качестве источника запаха в нижней ячейке камеры снижает ухаживающее поведение подопытного самца (макет на рис. 1C).

10.1371 / journal.pone.0135186.g001 Рис. Ухаживание самцов подавляется присутствием cVA или другого самца.

(A) Схема анализов с использованием двухслойной камеры для измерения поведения самцов при ухаживании. Верхняя ячейка камеры содержала тестируемого самца для обучения запаху и тестирования ухаживания, а нижняя ячейка под сетчатым барьером содержала cVA или обезглавленного самца в качестве источника запаха. Для предварительного обучения запаху испытуемого самца помещали в верхнюю камеру без (имитация) или с (обучением) другого самца мухи в нижней камере на 60 минут.Затем его переносили в испытательную камеру для проверки уровня ухаживания за обезглавленной девственной самкой в ​​качестве партнера по ухаживанию в присутствии / отсутствии cVA или обезглавленного самца в нижней ячейке. В качестве контроля был протестирован неопытный мужчина (Наивный). Мухи и фильтровальная бумага в мультфильме не в масштабе. (B) Индекс ухаживания самцов мух, подвергшихся воздействию различного количества экзогенного cVA. Концентрация cVA ≥0,2 нг подавляла ухаживающее поведение подопытных самцов. (C) Индекс ухаживания при различных источниках запаха между ложным и обученным самцом.Брачное поведение необученных самцов-имитаторов подавлялось присутствием 200 нг cVA по сравнению с присутствием гексанового растворителя (Sol) или обезглавленным самцом (M) по сравнению с отсутствием самца (-) в нижней ячейке. Напротив, обученный самец демонстрировал неразличимые уровни ухаживания независимо от присутствия обезглавленного самца (M) или cVA после переживания запаха самца. (D) Тренировочный эффект сохранялся в течение 20 минут после тренировки, но не 30 минут. Данные без интервала были взяты из C в качестве справочных.(E) Восприятие запаха в течение 30 минут привело к обонятельному привыканию, в то время как 15 минут или 20 минут были недостаточны, чтобы вызвать этот эффект. (F) Хроническое воздействие cVA также привело к привыканию к запахам. Подопытных самцов выращивали индивидуально в пробирке, содержащей стеклянный капилляр, заполненный 2 мкг cVA в 15 мкл гексана или 15 мкл только гексана в течение 5 дней. Перед введением в пробирку гексану давали испариться в течение 2 минут. В B-F столбцы указывают среднее значение ± SEM. Значимые различия обозначены буквами B и D (тест Tukey HSD).*, P <0,05; нс, не значимо для C, E и F (t-критерий Стьюдента).

Опыт предварительного тестирования феромонов изменяет поведенческую реакцию

Эта острая чувствительность к cVA поднимает вопрос о том, как самец мухи отличает небольшое количество экзогенного cVA у спарившейся самки от собственной cVA и как самец поддерживает высокий уровень ухаживания в присутствии конкурентов-самцов. . Одним из потенциальных механизмов является привыкание, определяемое как уменьшение поведенческой реакции на стимул после повторных воздействий, что позволяет животному отфильтровывать постоянные стимулы и сосредотачиваться на новых и / или альтернативных стимулах.

Чтобы определить, являются ли ответы cVA при ухаживании самцами привычными, мы предварительно подвергали самцов запаху другого самца в течение 60 минут и тестировали их последующие реакции ухаживания на cVA или запах самцов (рис. 1A). В отличие от контрольных самцов, которые оставались одних в камере и демонстрировали подавление ухаживания при наличии мужского запаха или cVA (макет на рис. 1C), обученные самцы, которые подвергались воздействию мужского запаха, сохраняли высокую активность ухаживания независимо от присутствия. мужчины или cVA (Рис. 1C обучен).Задержки ухаживания, определяемые как временная задержка между спариванием и первым началом ухаживания самца, были значительно задержаны у контрольных самцов в присутствии другого самца или cVA, в то время как обученный самец начал ухаживание без задержки (S1, рис.). Поскольку эксперименты проводились при тусклом красном свете, в условиях, когда мухи не могут использовать визуальные сигналы, это означает, что самцы полагались на обоняние, чтобы заметить присутствие целевой самки и инициировать ухаживание. Эти результаты предполагают, что на обонятельную обработку повлияло привыкание к запаху самцов.

Поведенческое привыкание к запаху самцов сохранялось по крайней мере через 20 минут после обучения запаху, но к 30 минутам самцы оправились от опыта до воздействия и снова показали снижение уровня ухаживания за самками в сочетании с запахом самцов, что эквивалентно таковому у контрольной группы. имитируйте самцов (рис. 1D). Мы подтвердили, что 30 минут тренировки либо с запахом мужчин, либо с 200 нг cVA было достаточно, чтобы изменить поведенческие реакции на одновременное присутствие запаха мужчин или cVA (рис. 1E и S2, рис.).Мы также обнаружили, что хроническое воздействие cVA в течение 5-6 дней приводило к такому же эффекту (рис. 1F). Однако 15 или 20 минут воздействия было недостаточно, чтобы эффективно изменить подавление в нашей системе.

Интенсивность стимула запаха cVA определяет уровни ответа ORNs Or67d

Чтобы определить, как cVA-чувствительные ORN реагируют на различные количества cVA и как динамически контролируются ответы ORN, мы сначала выполнили визуализацию в реальном времени с использованием чувствительного к Ca + флуоресцентного маркера ( GCaMP3.0) экспрессируется в cVA-чувствительных ORN Or67d [8, 20] для изучения дозозависимой нервной активности при стимуляции cVA. Нейронные ответы ORN и PN на cVA контролировались либо электрофизиологией, либо визуализацией in vivo с использованием относительно высоких концентраций cVA: 0,1–10% [21], 1% [22], 1–100% [23], 0,1– 100% [24] или 1–100% [8]. В этих экспериментах конечная концентрация запаха после прохождения через трубки доставки была неясной.

В этом исследовании мы разработали новую систему визуализации в реальном времени для мониторинга реакции кальция на широкий диапазон запахов, представленных перед объектом-самцом (рис. 2A и рис. S3A – S3C).Стимулирующий запах наносили на кончик зубочистки, расположенный на расстоянии 25 мм перед испытуемым мужчиной, и легкую струю воздуха в течение 2 секунд подавали из кончика воздушного сопла в 5 мм от кончика зубочистки. Ответы непосредственно отслеживались в клубочках DA1 головного мозга, где cVA-чувствительные ORNs Or67d проецируют свои аксоны [8, 25, 26] (S3D и S3E Fig). Интенсивность флуоресценции GCaMP увеличивалась после доставки cVA через затяжку воздуха и возвращалась к базальному уровню после выключения затяжки с задержкой менее 2 секунд (рис. 2B).Нанесения 10 пг cVA было достаточно, чтобы привести к значительному увеличению пиковой флуоресценции по сравнению с 0 пг контролем, содержащим только растворитель (фиг. 2C). Уровень нейронного ответа увеличивался по мере увеличения количества применяемой cVA и достигал плато при 100 пг cVA (рис. 2C). Это указывает на то, что сила запаха передается как интенсивность нейронных ответов ORN в AL. В качестве справки мы также отслеживали реакцию на запах, исходящий от живого самца после ампутации крыла, зафиксированного на зубочистке (S4, рис.).Среднее изменение флуоресценции при стимуляции запаха у мужчин составило 6,6%, что сопоставимо с интенсивностью от 0 до 10 пг cVA (рис. 2C).

10.1371 / journal.pone.0135186.g002 Рис. Дозозависимый ответ cVA и десенсибилизация при длительной стимуляции ORN Or67d.

(A) Система стимуляции запаха с визуализацией in vivo нервных ответов в клубочках DA1 (см. Методы и S3 фиг.). Нервные реакции на cVA контролировали с помощью флуоресцентного микроскопа после стимуляции запаха. cVA наносили на зубочистку картриджа, и струя воздуха из воздушного сопла доставляла улетученный cVA к антеннам мухи.(B) Типичные флуоресцентные изменения, вызванные стимуляцией запаха различными количествами cVA (в данном случае от 0 до 100 пг) у самца мухи. (C) Пик флуоресцентных изменений в ответ на cVA и живого мужчины. Пиковые значения кратковременного флуоресцентного изменения в ответ на стимуляцию запахом показаны в виде прямоугольных диаграмм, представляющих 25-й, 50-й и 75-й процентили с усами от минимума до максимума и кружками (среднее значение). Логистическая кривая была построена на основе средних значений пиков флуоресцентных изменений в каждом количестве cVA (см. Методы).EC 50 составляет 27,5% при 22,3 пг cVA. Стимуляция запаха с использованием живого самца показана на рис. S4. (D) Типичные нейронные реакции на 10 пг cVA ORN Or67d до (Наивно) и после непрерывного воздействия (после CE) 200 нг cVA (синий) или контроль растворителя гексана ( красный) в течение 15 минут. В течение 15 минут CE ответ на 200 нг cVA снижался, а после этого острый ответ на 10 мкг cVA также уменьшался. (E) Пиковые ответы на 10 пг cVA до (наивно), сразу после (после CE) и через 30 минут после непрерывного воздействия (30 минут после CE).

Непрерывное воздействие cVA вызывает снижение чувствительности ORN-ответа Or67d.

Затем мы исследовали, как на нервные ответы ORN Or67d повлияло постоянное воздействие cVA, используя визуализацию в реальном времени. После кратковременной стимуляции 10 пг cVA субъектная муха получала 200 нг cVA непрерывно в течение 15 минут и была протестирована на реакцию на 10 пг cVA. Во время непрерывного воздействия (CE, Рис. 2D) интенсивность флуоресценции в клубочках DA1 постепенно снижалась с течением времени и, наконец, достигла базального уровня, что соответствовало воздействию только растворителя через 15 минут.После непрерывного воздействия cVA интенсивность острого ответа на 10 пг cVA снизилась примерно на 58% по сравнению с тем, что наблюдалось до CE, и примерно на 59% по сравнению с тем, что наблюдалось с контролем с растворителем (рис. 2E), что ясно показывает феномен десенсибилизации. Этот уменьшенный ответ начал восстанавливаться через 30 минут после прекращения воздействия cVA с увеличением интенсивности примерно на 25% (рис. 2E).

Ввод ГАМК требуется для нейронной десенсибилизации ORNs

Or67d. Затем мы провели фармакологический скрининг, чтобы определить нейротрансмиттер (ы), участвующий в нейронной десенсибилизации, вызванной воздействием cVA.В качестве контроля для внесения лекарственного средства в солевую ванну, окружающую мозг мухи, подвергшейся воздействию (фиг. S5A), мы заменили только физраствор и обнаружили, что сама замена ванны уменьшала ответ на 10 пг cVA (фиг. S5B, дозировка до КЭ). После непрерывного воздействия cVA ответ дополнительно уменьшился, в то время как после воздействия растворителя никаких изменений не обнаруживалось (S5B, фиг., После CE). Амплитуда эффекта CE, помимо общего эффекта лечения дозированием, была рассчитана путем вычитания значения относительного флуоресцентного изменения «до CE» из значения «после CE» (S5 фиг.) У каждого индивидуума и суммирована на фиг. 3.У мух, которые получали замену ванны без лекарственного средства, значение «CE-эффекта» после cVA CE (синий) было значительно меньше, чем после воздействия растворителя (красный), демонстрируя, что cVA CE приводил к нейронной десенсибилизации также в этом контроле. летать.

10.1371 / journal.pone.0135186.g003 Рис. Вход ГАМК необходим для нейронной десенсибилизации ORN Or67d.

Было исследовано влияние пяти антагонистов нейромедиаторов на нервную десенсибилизацию, вызванную воздействием запаха. Изменения ответа после каждого CE рассчитывали путем вычитания значений относительного флуоресцентного изменения «Доза до CE» из значения «после CE» у отдельных мух (S5B – S5G фиг.).Пикротоксин, CGP54626, мекамиламин, MK801 и бутакламол использовали в качестве антагонистов ГАМК A , ГАМК B , никотинового ацетилхолина, NMDA и дофаминовых рецепторов соответственно. Коробчатые диаграммы представляют 25-й, 50-й и 75-й процентили с усами от минимума до максимума и средним значением с кружками. Достоверные различия обозначены *, P <0,05; нс, не значимо (t-критерий Стьюдента). Экспериментальная процедура, включая нанесение лекарства, указана на S5 Рис.

.

Внутри AL LN в основном являются ГАМКергическими и глутаматергическими [27–31], некоторые из них являются холинергическими [32, 33] и еще несколько являются дофаминергическими [30].Напротив, ORN и PN являются холинергическими [34, 35], и также указано присутствие и / или функция нескольких других нейротрансмиттеров и нейропептидов, например, серотонина, тахикинина и малого нейропептида F (sNPF) [36–38]. В нашем анализе активности применение пяти антагонистов нейротрансмиттеров показало значительный эффект в ответ на cVA после CE (рис. 3, P <0,0001; df = 1 в состоянии CE, P <0,05; df = 5 при взаимодействии с применением лекарств. и условие CE с помощью двустороннего дисперсионного анализа).При более тщательном изучении действия каждого препарата, применение антагонистов ГАМК, пикротоксина против рецептора GABA A и CGP54626 против рецептора GABA B привело к незатронутым ответам cVA после воздействия cVA, что указывает на нарушенное действие нейронная десенсибилизация. Однако следует отметить, что изменения ответа после каждого CE в присутствии этих препаратов оставались на тех же уровнях, что и в контроле (P> 0,05 по t-критерию Стьюдента с поправкой Холма в каждом состоянии CE), что означает Альтернативная возможность, что вариации ответа, вызванные применением этих препаратов (S5C и S5D фиг.), косвенно уменьшали эффект cVA CE.Поэтому мы выполнили дальнейший анализ с использованием генетических инструментов, чтобы подтвердить функцию ГАМК в нейронной десенсибилизации в следующем разделе. С другой стороны, хотя участие глутамата и дофамина для обработки информации внутри AL было указано [30, 31], антагонисты против N-метил-d-аспартата (NMDA) (MK 801) и дофаминовых (бутакламоловых) рецепторов не повлияли на нейронную десенсибилизацию. Между тем, ингибирование поступления ацетилхолина мекамиламином имело общий стимулирующий эффект, который постепенно увеличивал уровни базального ответа нейронов (рис. S5E) и, следовательно, увеличивал значение «эффекта CE» у контрольных мух, подвергшихся воздействию растворителя (рис. 3, P <0.05 по сравнению с контролем без лекарств по t-критерию Стьюдента с поправкой Холма), в то время как на десенсибилизацию не повлияло (P <0,05 по t-критерию Стьюдента с поправкой Холма, сравнение двух условий CE). В целом было высказано предположение, что CE cVA десенсибилизирует обонятельные нейроны независимо от действия глутамата, дофамина или ацетилхолина.

Обонятельное привыкание cVA требует ввода ГАМК в LN

. Чтобы подтвердить участие ГАМК в пластическом контроле чувствительности к запаху, а также определить обонятельные нейроны, которые получили вход ГАМК для действия, мы провели генетический скрининг с использованием РНКи.Экспрессируя РНКи против рецептора GABA A Rd1 под контролем различных драйверов GAL4, мы искали условия, при которых на чувствительность мужчин не влияло привыкание. Используя пан-нейронный драйвер (рис. 4A), два драйвера ORN (рис. 4B), пять драйверов LN (рис. 4C) и три драйвера PN (рис. 4D), экспрессия Rdl подавлялась с помощью Rdl-RNAi и его влияние на были изучены реакции на ухаживание после тренировки привыкания. Затем мы обнаружили, что подавление Rdl драйвером LN Mz97 привело к нарушению привыкания, о чем свидетельствует подавление ухаживания при наличии мужского запаха даже после обучения мужскому запаху (P <0.05 t-критерий Стьюдента с поправкой Холма, сравнение двух условий теста; Рис 4C). Штамм Mz97 маркирует 3–4 AL-ассоциированных нейрона, типы клеток которых еще не идентифицированы [39]. Это сведение к нулю тренировки привыкания не было обнаружено у мужчин, экспрессирующих конструкции РНКи с какими-либо другими драйверами (рис.4), что указывает на то, что входы ГАМК, действующие через рецептор ГАМК и на конкретную подгруппу LN, маркированных Mz97, играют важную роль в обонятельном привыкании. в cVA.

10.1371 / журнал.pone.0135186.g004 Рис. Рецептор GABA A в LN участвует в поведенческом привыкании к cVA.

Дефект поведенческого привыкания к cVA был проанализирован путем вмешательства в экспрессию рецепторов GABA A в основном классе обонятельных нейронов с использованием пан-нейронов (A), ORN (B), LN (C) и PN (D). ) драйверы. Все самцы мух были обучены запаху самцов в течение 60 минут, а затем были измерены реакции ухаживания за самками без (- M) или с (+ M) запахом самцов в нижней ячейке камеры (см. Рис. 1A).Столбцы указывают среднее значение ± SEM. *, P <0,05; нс, не значимо по t-критерию Стьюдента с поправкой Холма.

Обонятельное привыкание обеспечивает сексуальное преимущество в конкурентных ситуациях ухаживания.

Наконец, чтобы определить, есть ли репродуктивная польза от привыкания к запаху самцов, мы измерили успех копуляции у самцов с обучением привыканию или без него. В конкурентной ситуации, когда тестируемый самец был спарен с самкой и другим самцом, обученные самцы дикого типа показали больший успех совокупления по сравнению с контрольными самцами (рис. 5А).Задержка совокупления, то есть задержка во времени до начала совокупления, была значительно меньше для обученного самца (рис. 5В), предполагая, что предварительный опыт предоставил самцам некоторые сексуальные преимущества в ситуации конкурентного ухаживания, в которой самец встречает потенциального партнера для спаривания. наличие сексуального конкурента. Напротив, трансгенные самцы, у которых вход ГАМК в LN блокировался Rd1-RNAi, не показали разницы в успешности копуляции и латентности ухаживания независимо от предыдущего опыта запаха (рис. 5C и 5D), что указывает на отсутствие сексуальной выгоды, полученной у этих мутантных самцов. .Таким образом, функция привыкания имеет решающее значение для их репродуктивного успеха.

10.1371 / journal.pone.0135186.g005 Рис. Привыкание к запаху дает сексуальное преимущество.

Количество успешных копуляций, латентность копуляции и временной лаг между спариванием и копуляцией измеряли у самцов дикого типа (A, B) и мутанта рецептора GABA A , Mz97 / Rdl-RNAi (C, D ). Во время 30-минутного наблюдения обученные самцы дикого типа показали высокое соотношение успешности совокупления (А) и снижение латентности (В) по сравнению с таковым у контрольных имитирующих самцов.Напротив, самцы с мутантным рецептором GABA A , у которых вход GABA в подмножество LN блокировался с помощью Rd1-RNAi, демонстрировали незаметные уровни успеха копуляции и латентности в условиях конкурентного ухаживания (C, D). *, P <0,05; нс, не значимо по t-критерию Стьюдента.

Обсуждение Биологические преимущества обонятельного привыкания

Привыкание определяется как уменьшение поведенческой реакции на повторяющийся стимул и рассматривается как простейшая форма обучения и запоминания; он позволяет животным отфильтровывать нерелевантные стимулы, которые теряют актуальность, и избирательно сосредотачиваться на важных стимулах [40–44].

У Drosophila melanogaster привыкание было изучено в генетическом, молекулярном и нервном контроле поведения, связанного с побегом, например, прыжок, испуг, движение ног или побег при стимуляции сильным запахом [28, 45–47]. Однако биологической значимости привыкания для животного с точки зрения выживания и репродуктивной вероятности уделялось меньше внимания. В этом исследовании мы продемонстрировали, что обонятельное привыкание к запаху самца или cVA, феромону, препятствующему ухаживанию, позволяет самцу поддерживать высокий уровень сексуальной мотивации и, следовательно, увеличивает вероятность успеха совокупления в конкурентной среде (рис. 5).Это первый отчет о привыкании, положительно влияющем на сексуальное преимущество в полунатуральных экспериментальных условиях.

Мы подозреваем, что привыкание к cVA приносит пользу самцам в дикой природе, поскольку количество cVA, присутствующее в окружающей среде, варьируется. Вновь появившийся неполовозрелый самец не содержит обнаруживаемой cVA, но через 4 часа появляются небольшие количества cVA (20 нг), которые постепенно увеличиваются и достигают 2,9 мкг в возрасте 4 недель [3]. Количество cVA у спарившейся самки варьируется в зависимости от интервала после копуляции [6].Есть также штамм-зависимые различия, обнаруженные у самцов, отловленных в дикой природе [48]. При таких изменчивых условиях запаха, включая его собственный запах, пластичность чувствительности cVA может дать животному разумную пользу при выборе адаптивного поведения.

Привыкание к cVA влияло на мужское поведение только в контексте ухаживания самок — оно не увеличивало гомосексуальное поведение при ухаживании между мужчинами (S6, рис.). Хотя считается, что наличие cVA способствует дискриминации по признаку пола, это не единственный фактор, препятствующий афродизиаку, и другие факторы «мужественности», включая поведенческий паттерн [49] или вкусовую информацию [50, 51], могут компенсировать этот фактор. снижение уровня чувствительности к запахам, вызванное привыканием.

Молекулярный контроль обонятельного привыкания

Из генетических исследований было показано участие нескольких внутриклеточных и межклеточных сигнальных молекул. Мутации гена брюквы, которые снижают синтез цАМФ, снижают привыкание к реакции бегства на зрительный стимул, в то время как бессмысленные мутации, повышающие уровень цАМФ, усиливают привыкание [45]. В реакции избегания запаха рианодиновый рецептор и инозитол (1,4,5) -трифосфатный рецептор в ORN [52]; брюква, синапсин, везикулярный переносчик глутамата и кальций / кальмодулин-зависимая протеинкиназа II (CaMKII) в LN [47, 53]; входы атаксина-2, ГАМК и глутамата в PN [46, 53] необходимы для привыкания.Напротив, только несколько сообщений демонстрируют привыкание к ухаживанию самцов, при котором воздействие запаха молодых самцов приводило к снижению поведенческих реакций по отношению к молодым самцам [54–56]. Для этого контроля ухаживания было предложено участие болвана, бездельника, страдающего амнезией или брюквы; однако их локусы действия в головном мозге были неясными из-за того, что в то время не было обусловлено генетическими методами [54, 55]. В этом исследовании мы продемонстрировали, что постоянное воздействие запаха снижает интенсивность ответа ORN Or67d в терминалях аксонов, и идентифицировали участие тормозного нейромедиатора ГАМК с помощью фармакологического скрининга.В нашей визуализации в реальном времени применение обоих блокаторов ГАМК, пикротоксина (антагонист рецептора GABA A ) и CGP54626 (антагонист рецептора GABA B ) [27, 57] нарушило нейронную десенсибилизацию (рис. 3). С другой стороны, применение мекамиламина, антагониста никотиновых рецепторов ацетилхолина [57], MK801, антагониста рецепторов NMDA [58], и бутакламола, антагониста рецепторов дофамина [59], не повлияло на десенсибилизацию запаха (рис. 3). в то время как мекамиламин увеличивал базальные уровни нервной активности помимо десенсибилизации (S5E Fig).Это согласуется с предыдущими исследованиями, показывающими действие нейротрансмиттеров никотинового ацетилхолина и ГАМК в AL при избегании запаха [28, 53].

Нейронная сеть для обонятельного привыкания

Обонятельная информация передается от ORN к PN, потенциально с модификацией от LN в клубочках AL, а затем передается в более высокие области мозга, латеральный рог и грибовидное тело [60–62]. Ранее записи электроантеннограмм показали, что предварительное воздействие запаха ослабляет амплитуду ответа ORN в антенне, указывая на локальное действие внутриклеточной модификации в сенсорной сенсилле [63, 64].Между тем, в других сообщениях предполагается, что никакая модификация обонятельной трансдукции не обязательно сопровождает привыкание к реакции избегания запаха [65, 66]. Также сообщалось, что привыкание к агрессивному поведению посредством cVA не сопровождалось модификацией активности дендритных рецепторов в антенне, что указывает на вклад высших функций мозга в контекстно-зависимые поведенческие изменения [10]. Недавние данные указывают на то, что межклеточная обработка информации об запахе в AL играет критическую роль в обонятельном привыкании к ответным реакциям бегства [28, 47, 53], которые также могут быть применены к привыканию cVA при контроле ухаживания.

Используя визуализацию в реальном времени, мы обнаружили, что десенсибилизация ORN Or67d была чувствительна к антагонистам нейротрансмиттеров. Это говорит о том, что место действия привыкания находится внутри нейронной сети в AL. Чтобы определить, каким обонятельным нейронам требуется ввод ГАМК для обонятельного привыкания, мы экспрессировали конструкции РНКи против рецептора Rd1 GABA A с использованием различных драйверов GAL4 и обнаружили, что привыкание блокировалось, когда экспрессия рецептора GABA A Rdl была нарушена под контролем Драйвер Mz97 (рис 4).Штамм Mz97 экспрессирует GAL4 примерно в трех нейронах, расположенных в вентролатеральной области по отношению к AL, и в одном нейроне, который разветвляется во множестве клубочков AL, включая DA1, и оканчивается в механосенсорном и моторном центре антенн (AMMC) контралатерального полушария [39]. . Следовательно, можно предположить, что этот Mz97-LN, иннервирующий DA1 клубочки, участвует в десенсибилизации ORNs Or67d.

Предыдущие отчеты показали, что вход ГАМК в PN из LN был критическим для привыкания реакции избегания к вредным материалам, таким как углекислый газ и этилбутират, указывая на то, что привыкание было усиленной активностью ингибирующих LN (iLN) [28, 53].Напротив, в нашем скрининге РНКи экспрессия конструкций РНКи против рецептора GABA A в PN под тем же драйвером Gh246 GAL4 не показала никакого эффекта на привыкание к запаху самцов (рис. 4D), что подразумевает отдельный процессинг для привыкания к побегу. контроль поведения и ухаживания. Между тем, в нашей визуализации в реальном времени, непрерывный стимул cVA приводил к подавлению амплитуды ответа ORN Or67d (рис. 2D и 2E), который был чувствителен к нескольким антагонистам нейротрансмиттеров, что свидетельствует о действии ингибирующей обратной связи с ORN в AL.Однако мы не обнаружили нарушения привыкания к запаху самцов у трансгенных самцов, у которых вход ГАМК в ORNs Or67d был заблокирован. Это указывает на то, что другие ингибирующие механизмы опосредуют десенсибилизацию ORNs Or67d.

Одним из возможных механизмов привыкания к запаху у мужчин является повторяющееся торможение, определяемое как зависимая от активности регуляция возбуждающих нейронов с помощью тормозящего интернейрона, как показано в сифонном рефлексе абстиненции аплизии [67–71]. В AL Drosophila большинство LN чувствительны к пикротоксину, и было предсказано ингибирование между LN [27, 57, 72].Тот факт, что интерференция входа ГАМК в LN Mz97 сохранила чувствительность к запаху самцов даже после тренировки привыкания (рис.4), позволяет нам предсказать, что LN Mz97 являются возбуждающими (eLN) у наивной мухи, обеспечивая положительную обратную связь с пресинаптической. терминалы ORN для облегчения передачи сигналов запаха, когда ORN активируются (рис. 6A). Учитывая, что eLN в AL проявляют спонтанную активность [57], возможно, что eLN также хронически стимулируют передачу сигналов cVA и поддерживают низкую мотивацию ухаживания независимо от воздействия cVA.Участие eLN также подтверждается нашими результатами визуализации в реальном времени; десенсибилизация ORNs Or67d была нарушена применением пикротоксина и CGP54626 (рис. 3), как и активность eLN в предыдущем исследовании [57]. Подводя итог, мы предлагаем модель рекуррентной схемы, показанную на рис. 6. Во-первых, LN Mz97 обеспечивают пресинаптические возбуждающие входы в ORNs Or67d у простой мухи (рис. 6A). При непрерывной стимуляции запаха усиленный сигнал запаха способствует ГАМКергическим iLN, которые имеют ингибирующие связи с LN Mz97 (рис. 6B).Впоследствии подавление активности Mz97 (пресинаптическое возбуждение) ослабляет сигнал запаха от ORN и в конечном итоге снижает последующие поведенческие реакции (рис. 6C).

10.1371 / journal.pone.0135186.g006 Рис. Рекуррентная тормозная схема пластически снижает интенсивность сигнала.

(A) LN Mz97 обеспечивают пресинаптические возбуждающие входы в ORN Or67d у простой мухи. (B) Непрерывное воздействие запаха облегчает iLN, которые обеспечивают подавляющее воздействие на LN Mz97. (C) Подавление активности Mz97 ослабляет сигнал запаха от ORN и последующие поведенческие реакции.

В дополнение к ГАМК участие ацетилхолина в обработке информации было показано фармакологическим скринингом (S5E Рис.). Учитывая, что подавляющее большинство нейронов AL, ORN, некоторых LN и PN являются холинергическими [33–35], вполне вероятно, что этот нейромедиатор играет критическую роль в контроле активности обонятельных нейронов. Однако в нашем препарате для визуализации, поскольку лекарство проникало по всему мозгу, мы не могли определить целевые нейроны, на которые воздействует мекамиламин, антагонист никотиновых рецепторов ацетилхолина в данный момент.Дальнейшие исследования покажут прямой молекулярный процессинг для контроля уровней активности обонятельных нейронов и приведет к успеху репродуктивного здоровья.

Материалы и методы. Запасы дрозофилы

мух Canton S (CS) использовали в качестве контрольных объектов дикого типа и объектов ухаживания. Использовались трансгенные линии: UAS-Rdli-8-10J [73], orco-GAL4 (ранее известный как Or83b-GAL4 [74]), NP842-GAL4, NP1068-GAL4, NP1350, Mz19-GAL4 [39], NP3056. -GAL4 [30], h34-GAL4 [75], Gh246-GAL4 [32] и Mz9-GAL47 [76].Штамм Or67d-GAL4 57.3 был щедро предоставлен Leslie Vosshall (Университет Рокфеллера, Нью-Йорк, Нью-Йорк, США). Исходная РНКи для гена рецептора GABA A (устойчивость к дильдрину, Rdl), UAS-Rdli-8-10J, была получена от Лесли Гриффит (Университет Брандейса, Уолтем, Массачусетс, США) [77]. Мухи NP842-GAL4 и Mz97-GAL4 были щедро предоставлены Кей Ито (Токийский университет, Токио, Япония). Мухи Gh398-GAL4 и Mz19-GAL4 были щедро предоставлены Рэйчел Уилсон (Гарвардская медицинская школа, Бостон, Массачусетс, США).elav C155 -GAL4 (инвентарный номер 105921), NP1350-GAL4 (инвентарный номер 112640), NP3056-GAL4 (инвентарный номер 113080) и NP1068-GAL4 (инвентарный номер 112482) были получены из Центра генетических ресурсов дрозофилы (Киото, г. Япония). Мухи h34-GAL4 (запас № 51632), Gh246-GAL4 (запас № 30026) и UAS-GCaMP3.0 (запас № 32116) были получены из Bloomington Drosophila Stock Center (Блумингтон, Индиана, США).

Все мухи выращивались на стандартной среде кукурузной муки, сахарозно-агаровой смеси при 25 ° C и 12/12 часовом цикле свет / темнота.Взрослых самцов девственных мух собирали в течение 4 часов после выделения с использованием анестезии CO 2 и выдерживали в течение 4–6 дней в отдельных пробирках, содержащих виноградный сок (виноград Велча 100, Calpis) с 10% агаром до испытания. В эксперименте использовали только самцов с неповрежденными крыльями.

Поведенческие анализы

Все поведенческие эксперименты проводились при тусклом красном свете (> 700 нм), если не указано иное, в помещении с окружающей средой (25 ° C, влажность 70%). Двухслойная камера ухаживания представляет собой модифицированную колесную камеру [78, 79], состоящую из двух слоев оргстекла с 8 ячейками наблюдения (диаметром 8 мм, глубиной 3 мм каждая), разделенных тонкой нейлоновой сеткой (Tetko, 3-180). / 43), что предотвращает прямой контакт мух в верхней ячейке с источником запаха в нижней ячейке (рис. 1A) и перекрывается верхним и нижним слоями.4-6-дневный самец был помещен с обезглавленной зрелой (4-6-дневной) самкой-испытателем в качестве «объекта ухаживания» в верхнюю камеру двухслойной камеры, и его действия по ухаживанию записывались на видео с помощью ПЗС-камера (Allied, Guppy) на 5 минут. Индекс ухаживания рассчитывали как долю времени, в течение которого самец проявлял ухаживание в течение 5-минутного периода наблюдения. Задержка ухаживания была временной задержкой до первого проявления ухаживания (ориентации ухаживания) после спаривания. Значение задержки 300 секунд регистрировалось, когда ухаживания не проводились в течение 5-минутного наблюдения.cVA (Pherobank) разбавляли гексановым растворителем. Непосредственно перед тестированием 6 мкл раствора cVA наносили на кусок фильтровальной бумаги в нижней ячейке камеры и гексан выпаривали в течение 2 минут при комнатной температуре.

Для тренировки привыкания в верхнюю камеру двухслойной камеры помещали самца, который в течение 60 минут подвергали воздействию источника запаха, помещенного в нижнюю камеру. Сразу после обучения самцов переводили в чистую камеру и объединяли с обезглавленной зрелой самкой-испытателем на 5 минут.Дрессированные самцы в течение первого часа содержались в камере одних, а затем в паре с тестером.

Для экспериментов по копуляции самец был спарен с интактной самкой и обезглавленным самцом в возрасте 4–6 дней в однослойной камере (диаметром 8 мм, глубиной 6 мм) при тусклом красном свете. Время совокупления и временные задержки до успешного совокупления регистрировались в течение 30 минут. Значение задержки 1800 секунд было дано, когда во время наблюдения не производилось копуляции.

In vivo визуализация нервной активности в реальном времени

Использовались самцы мух в возрасте от одного до пяти дней, которых выращивали в отдельных пробирках, упомянутых выше.Мух анестезировали путем переноса в стеклянный флакон на льду, а затем удерживали на чашке из оргстекла (S3A, фиг.) При комнатной температуре. Прикрепили крылья и ножки к посуде из оргстекла; хоботок был прикреплен к серебряному волокну с помощью воска (S3B и S3C фиг.). Кусок алюминиевой фольги вставлялся между верхней частью головы мухи, включая усики, и нижней частью тела мухи и фиксировался эпоксидным уплотнением (S3B и S3C, рис.). Муху, закрепленную на чашке из оргстекла, оставляли в пластиковой чашке для культивирования с увлажненной фильтровальной бумагой до застывания эпоксидной смолы (около 10 минут).После затвердевания эпоксидной смолы верхняя поверхность чашки из оргстекла была заполнена 1 мл физиологического раствора. С помощью щипцов под микроскопом удалили верхнюю кутикулу головы мухи, чтобы образовалось отверстие. Затем удаляли воздушные мешочки и жир и разрезали мышцы, связанные с движением мозга. Облученную мозгом муху, зафиксированную на чашке из оргстекла, устанавливали на изготовленную на заказ подставку (Urin Seisakusho Co., Ltd.), и на чашку из оргстекла добавляли 1 мл физиологического раствора. Физиологический раствор состоял из следующих (в мМ): 103 NaCl, 3 KCl, 5 TES [N-трис (гидроксиметил) метил-2-аминоэтансульфоновая кислота], 10 трегалозы, 10 глюкозы, 7 сахарозы, 26 NaHCO 3 , 1 NaH. 2 PO 4 , 1.5 CaCl 2 и 4 MgCl 2 [80] доводят до pH 7,25 с помощью HCl и затем фильтруют. Осмоляльность физиологического раствора не регулировалась (приблизительно 305 мОсм).

Флуоресцентные сигналы на основе GCaMP3 клубочков, иннервируемых ORN-ORN (DA1) в антеннальной доле [7, 19] (S3E и S3F Fig), отслеживали с помощью микроскопа (BX51WI, Olympus) с водно-иммерсионным объективом 40 × NA 0.8) (LUMPLFLN 40XW, Olympus), систему механического затвора (Physio-Tech), ультрафиолетовый (УФ) лазерный блок и цифровую камеру CCD (ORCA-R2, Hamamatsu Photonics).Сигнал собирали в виде монохроматического возбуждающего света с использованием программного обеспечения для визуализации (HCImage, Hamamatsu Photonics). Изображения были получены с разрешением 512 × 512 пикселей каждые 250 мсек на кадр. Один цикл визуализации состоял из трех повторов по 10 секунд (40 кадров), сбора сигнала с 2-секундной затяжкой воздуха (кадры 9–16) и 20-секундного интервала с выключенным УФ-светом. Таким образом, за один цикл визуализации было получено 120 кадров. Лабораторный аппарат для напуска воздуха состоит из шести компонентов: ресивера с регулятором, насоса (PV820 Pneumatic PicoPump, World Precision Instruments), расходомера (P-200-L0-4N-R2, Tokyo Keiso), фильтр с активированным углем, флакон с фильтровальной бумагой, смоченной дистиллированной водой, и воздушное сопло из иглы для подкожных инъекций (NN-1838R, Terumo).Все компоненты были соединены силиконовыми трубками. Воздушное сопло располагалось на 30 мм впереди мухи. Воздух подавали со скоростью 30 мл / мин (скорость ветра: 0,18 м / сек).

Типичные переходы сигналов отслеживались во время непрерывной экспозиции в течение 15 минут, и изображения получали непрерывно при УФ-облучении. Во всех остальных случаях получение изображения и УФ-облучение не производились во время непрерывной экспозиции. Последовательное переключение между сбором сигналов, УФ-облучением и выдуванием воздуха контролировалось стимулятором (Мастер-8, А.М.П.И.). После экспериментов по визуализации на каждой мухе измеряли максимальную флуоресцентную реакцию клубочков DA1 для численной коррекции нервной реакции среди людей путем замены 1 мл физиологического раствора на эквивалентное количество 400 мМ раствора KCl на лету, прикрепленного к чашке из оргстекла.

Стимуляция запаха

cVA разбавляли гексаном и хранили в пробирках объемом 1,5 мл при -30 ° C. При использовании раствор cVA хранили на льду. Запах подавали с помощью настольного картриджа, состоящего из наконечников зубочисток и пипетки (рис. 2А).На верхнюю часть зубочистки наносили один микролитр различных разведений cVA. После испарения гексана картридж, покрытый cVA, помещали между воздушным соплом и антеннами мухи (рис. 2A) с помощью манипулятора (M-3, Narishige), прикрепленного к подставке (Z-1, Narishige). cVA подводился к антеннам с помощью затяжки из воздушного сопла. Картридж заменяли после каждого цикла визуализации.

Фармакология

Пикротоксин (Sigma), гидрохлорид CGP54626 (Tocris Bioscience), мекамиламина гидрохлорид (Sigma-Aldrich), (+) — гидрокомалеат MK-801 (Sigma-Aldrich) и (+) — гидрохлорид бутакламола (Sigma-Aldrich). используются в качестве антагонистов рецепторов ГАМК А , ГАМК В , никотинового ацетилхолина, NMDA и дофамина соответственно.Пикротоксин, гидрохлорид мекамиламина и (+) — гидрокомалеат MK-801 растворяли в физиологическом растворе до 500 мкМ, 200 мкМ и 200 мкМ соответственно. И гидрохлорид CGP54626, и гидрохлорид (+) — бутакламола растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до 100 мМ и затем разбавляли физиологическим раствором до 100 мкМ. Эти лекарственные растворы хранили при -30 ° C до использования. Во время нанесения лекарства сначала выбрасывали 1 мл физиологического раствора, нанесенного на фиксированную муху, а затем применяли эквивалентные количества растворов лекарства или физиологического раствора в качестве контроля.Конечные концентрации пикротоксина, гидрохлорида CGP54626, гидрохлорида мекамиламина, (+) — MK-801 гидромалеата и (+) — бутакламола гидрохлорида составляли 250 мкМ, 50 мкМ, 100 мкМ, 100 мкМ и 50 мкМ, соответственно.

Анализ и статистика

Интенсивность флуоресценции на изображениях клубочков DA1 (фиг. S3E) была преобразована в числовые значения с использованием программного обеспечения (изображение J 1.46r). Значения F были рассчитаны путем усреднения значений для одних и тех же кадров при повторении циклов одиночного изображения. Затем были рассчитаны процентные значения ΔF / F по формуле ∆F / F% = Ft / (∑t = 58Ft / 4) где Ft — усредненная интенсивность флуоресценции в заданный момент времени (кадр) одного цикла визуализации.

Средние значения пика флуоресцентных изменений при каждом количестве cVA использовались для подгонки логистической кривой к данным о зависимом от концентрации ответе на cVA на фиг. 2C. Кривая рассчитывалась по формуле у = K1 + be-cx где y — прогнозируемое значение флуоресцентного изменения при заданном количестве cVA (x), e — число Эйлера, а K, b и c — произвольные константы. Оптимальные константы были рассчитаны методом наименьших квадратов с использованием Solver в Microsoft Excel для Mac 2011, что дало K = 47.919, b = 5,925 и c = 0,093.

Статистический анализ проводился либо с JMP 8.0 (Институт SAS), либо с R версии 3.0.2 [81]. Для сравнения данных между двумя группами и между несколькими группами, соответственно, применялись t-критерий Стьюдента с / без поправки Холма и тест честной значимой разницы Тьюки (HSD) с апостериорным тестом в ANOVA.

Montale Dark Purple: отзывы покупателей, описание аромата

Montale Dark Purple — французская парфюмированная вода, созданная знаменитым Пьером Монталь в 2011 году.За все это время аромат не потерял актуальности среди покупателей. Они ищут и приобретают его, чтобы испытать блаженство.

Что это за аромат и почему он считается одним из лучших в линейке «Монталь»?

Описание Montale Dark Purple

Представленный еще в 2011 году аромат французского парфюмера классифицируется как восточно-цветочная композиция. В нем гармонично сочетаются запахи фруктов, цветов и пряные нотки.

Аромат Montal Dark Purple по стойкости и открываемости сравнивается с арабскими духами без алкоголя.С теми, которые созданы исключительно в эфире. Помимо основных ароматических компонентов, духи также содержат экстракты уда, смолы гальбанума, непальской розы и египетского ветивера. Их концентрация способствует полному раскрытию букета на коже, его длительному сохранению.

Композиция «Монталь» — уникальный рецепт, известный единицам парфюмеров в мире, а это значит, что подобных ароматов не существует.

Многочисленные обзоры Montale Dark Purple определили его как очень насыщенного событиями.Даже одно прикосновение вызывает волну контрастных запахов, которые со временем успокаиваются и становятся на свои места. Поэтому двух нажатий на спрей достаточно, чтобы нюхать весь день и даже дольше.

Какие духи у Montale Dark Purple?

Верхние ноты

Сначала аромат представлен нотами сочной сливы в сочетании с перечным апельсином. Да и сливу выбрать непросто. Парфюмер нашел редчайший темный сорт, источающий невероятно сильный аромат и сочащийся при откусывании.Слива не только задает общее настроение аромату, но и повлияла на создание внешнего дизайна (подробнее об этом позже).


Но бодрящий апельсин, выбранный в качестве сливового партнера, добавлен, чтобы разбавить сладость аромата пурпурных фруктов и добавить яркости аромату. Получилось это противоречивое сочетание.

Для некоторых женщин, попробовавших Montal Dark Purple, начальный вкус слишком концентрирован. Но это только в первый раз.Буквально через несколько минут запах становится мягче.



Сердечные ноты

Яркое продолжение выражено сердечными нотами, представленными розой, геранью, красными ягодами и пачули. В цветочных ароматах обычно преобладает запах последнего, поэтому многие ошибочно относят Montal Dark Purple к разряду восточных.

Но и бархатистая медовая молодая роза не дает забыть о себе. Его запах прилипает к коже и прекрасно раскрывается под действием феромонов тела.Горько-терпкая герань в сочетании с другими компонентами подавляет эти качества, раскрывая тайный аромат и свежесть.

Пачули — восточная пряность, дающая сладость, но не приторная нотки сердца. На коже аромат также проявляется как природный афродизиак, поэтому духи Paris Dark Purple так привлекательны для противоположного пола.

Аромат нот сердца ощущается 3-4 часа, а затем плавно, почти незаметно перетекает в шлейф.Это свойство нравится многим женщинам.



Циклический звук

Мускус, тик индонезийского дерева и амбра — это базовое завершение Montal Dark Purple. Сладкий, головокружительный, манящий — так можно охарактеризовать шлейф, оставшийся после фруктово-цветочного запаха.

Основная композиция представлена ​​ароматами Востока. Стойкость этих запахов невероятно велика — от 5 до 8 часов. Многие считают мускус, тик и амбру мужскими ароматами, но сочетание их с фруктово-цветочными нотами придает им определенную женственность.

Шлейфовое послевкусие раскрывает всю роскошь этого парфюма, подчеркивает элегантность, раскрепощенность, изысканность его обладательницы.

Флакон и упаковка

Флакон от Montal Dark Purple свидетельствует о роскоши своего владельца. Причем начиная с коробки. Он полностью переливается золотистым оттенком. На лицевой стороне красуется название бренда «Montal», а внизу в фиолетовой рамке нанесено название серии. На упаковке оригинальных духов буквы спереди и сзади слегка вдавлены, в то время как они просто отпечатаны на подделке, поэтому буквы можно легко отклеить легким движением ногтя.Еще одна отличительная черта оригинала от подделки — на первом наклеено название серии (то есть в сиреневой рамке), а на втором просто напечатано.

В коробке находится бутылка, которая до сих пор спрятана в фирменной сумке Montail. Материал, из которого он сшит, напоминает плотный шелк. Он черного цвета, кое-где логотипы золотистые. Верх сумки регулируется с помощью золотого шнурка. Сбоку пришита белая этикетка с надписью Montale.


Сама бутылка алюминиевая, темно-фиолетового цвета, что соответствует названию серии.Колер напоминает сливу — символ этих духов. Золотой спрей имеет знаменитую прищепку Montalev, которая предотвращает случайное распыление аромата. Название серии Dark Purple, расположенное на дне флакона, также приклеено (если мы говорим об оригинальных духах). Крышка, закрывающая распылитель, закручена. На нем и на шейке краскопульта для этого есть специальная резьба. Но если колпачок не закрутить, а просто надеть, при этом имея нитку, то это говорит о подделке.

Алюминиевая бутылка очень легкая, внутри создается иллюзия пустоты, но это не так. Он наполнен ароматической жидкостью точно так, как это предусмотрено производителем.

Темно-фиолетовый колдовской цвет флакона не только создает имидж парфюма, но и является надежной защитой от попадания прямых солнечных лучей на его содержимое.

Отличительных черт подделки от оригинала не так много, но запомнить их несложно. При этом следует учитывать, что даже копии под брендом могут иметь все вышеперечисленные симптомы.Но если они есть, то их немного, как правило, под оригинал выполняется только коробка.

Для кого это?

Женская аудитория любого возраста смело может пользоваться ароматом Montale Dark Purple, отзывы о котором будут ниже. Но многие покупатели для себя отметили, что сочная слива и роза сочетаются с молодым возрастом от 20 до 35 лет.

И по характеру «Монталь» не делает предпочтений. И скромная милая девушка, и дерзкая хулиганка, и бизнес-леди, и пожилая женщина со спокойным и опытным взглядом — все желающие могут попробовать манящие духи от французского бренда.



Когда лучше использовать?

Montale Dark Purple Описание аромата предполагает, что «Dark Purple Montal» создан «под пальто», чтобы придать «тепло и уют» любому демисезонному образу. Яркие акценты сливы и розы прекрасно сочетаются с осенней верхней одеждой, красивыми сапогами и уютными шарфами.

Использование аромата также подходит для периода ранней весны (март, начало апреля), когда природа только-только пробуждается от спячки.

Насчет времени суток не беда.И днем ​​и вечером парфюм будет уместен для выхода. И неважно, что вы наденете, элегантное вечернее платье или консервативный деловой костюм. Montal Dark Magenta в любом случае подчеркнет важность изображения.

Стойкость и насыщенность

Отзывы о Montale Dark Purple отмечают, что полное раскрытие качеств духов происходит ближе к вечеру, ближе к ночи, когда воздух прохладнее и свежее. Придает аромату на коже полную силу и позволяет максимально раскрыться.В этом случае количество парфюма, нанесенного на кожу, может быть небольшим, даже пара капель дополнит образ.

На теле духи сохраняют действие от 8 до 12 часов, а на одежде — от 1 до 2 дней. И, как говорят многие женщины, даже после стирки запах «Монталь» не исчезает полностью.

Но в дневное время духи нужно наносить в большем количестве, чем вечером. Только тогда «Монталь» проявит все свои характеристики, дополнит образ своей обладательницы, подчеркнет ее независимость и не оставит незамеченной.

Удивительно, но духи демонстрируют потрясающую стойкость, даже несмотря на то, что они содержат 70-80% алкоголя.

Где купить?

Приобрести бутылку известного бренда можно в бутиках Letual, Rive Gauche и других.

Вы также можете заказать эти духи в Интернете, но необходимо тщательно выбирать продавца. Ведь именно в интернет-магазинах высок риск приобрести подделку. В России есть официальный представитель компании Montal, у которой есть интернет-ресурс с товарами известного бренда.

Перед покупкой в ​​других магазинах не лишним будет прочитать о них отзывы. Тогда это значительно снизит риск быть пойманным мошенниками.



Ценовая ниша

Важным вопросом остается стоимость 100мл Montale Dark Purple. Именно в этом объеме продается аромат. В сети «Летуаль» бутылка известного бренда стоит 4600 рублей. При покупке у официального представителя через Интернет парфюм обойдется в 4900 рублей.

Стоит учесть, что можно найти варианты по очень привлекательным ценам — 2 000 — 2 500 рублей, но это не будет оригиналом. Однако есть качественные подделки, свойством которых является стойкость и насыщенность запаха. Но как это скажется на здоровье, можно только догадываться.

Ароматы по цене 1000 рублей уже должны насторожить покупателя, так как у Montal не может быть такой цены.



Montale Dark Purple Обзоры

С первого дня своего существования, а это 2011 год, парфюм Montal Dark Purple завоевал признание миллионов дам, которые остались им верны и по сей день.

Описание аромата и отзывы на парфюм Montale Dark Purple представляют его как роскошь, удовольствие, волшебство Востока с французской душой. Использование парфюмерии покупателями позволило выделить целый ряд преимуществ этого парфюма:

  1. Насыщенный аромат, переливающийся нотами фруктов, цветов и восточными запахами.
  2. Изумительная долговечность до 12 часов. Как отмечает значительное количество женщин, запах можно почувствовать уже на следующий день. И совершенно не важно, на волосы, кожу или легкий шелковый платок.
  3. Оригинальность. Об этом упоминалось ранее. Состав Montale Paris Dark Purple разработан по рецепту, секрет которого известен единицам парфюмеров. Это делает аромат уникальным и ни на что не похожим. Это отметили заказчики.
  4. Долгое приятное послевкусие, выраженное манящим шлейфом.
  5. К достоинствам Montal многие приписывали не только аромат, но и красивый дизайн. И внешнее, и внутреннее содержание полностью дополняют друг друга.
  6. Аромат считался богатым и роскошным.

Недостатки определены субъективно, поэтому для каждого они были свои. Но большинство женщин не нашли никаких минусов.

Судя по отзывам, минусы следующие:

  1. Кто-то слишком зацикливается на аромате удового дерева, которое даже через некоторое время почти не выветривается.
  2. Кто-то не пахнет ни сливой, ни апельсином. С чем это связано, сказать сложно.
  3. Для кого-то слишком навязчивый мускус, который присущ парфюмерии.Сильная обонятельная восприимчивость затрудняет толерантность Монталь.
  4. Кто-то определил Montale Dark Purple как тяжелый аромат, сочетающий в себе самые концентрированные ноты.
  5. Для некоторых цена за бутылку была неприятным фактором при покупке.

Аромат «Montal Dark Purple» мужчины оценили как привлекательный женский парфюм, вызывающий желание как можно дольше находиться в присутствии своей обладательницы. Но они не считали эти духи женственными, как, например, более цветочные варианты от бренда Montal.



Заключение

Отзывы потребителей о Montale Dark Purple в подавляющем большинстве поощряют покупку этого аромата. Его противоречивость, сочетающая мужской и женский характер, делает аромат универсальным для дам любого темперамента.

Используйте аромат в течение дня, чтобы подчеркнуть свою деловую хватку или жизнерадостную женственную натуру. Нанесите вечером несколько капель духов и окунитесь в шлейф привлекательности, чувственности и желания.

Если хотите чего-то новенького, не битого, не похожего ни на что, приобретите флакон Montal Dark Purple и, поверьте, вы не пожалеете.

Программа по молекулярной медицине — Публикации — Медицинская школа Массачусетского университета | Программа по молекулярной медицине

Программа по молекулярной медицине Медицинской школы Массачусетского университета была основана в новом исследовательском здании в 1989 году. На факультете работают как клинические исследователи, так и фундаментальные ученые, многие из которых сосредоточивают свои исследования на процессах, связанных с болезнями человека. Лабораторные группы и основные объекты, составляющие молекулярную медицину, представляют многие дисциплины в биомедицинских науках: биохимия и молекулярная биология, клеточная биология, медицина, иммунология, молекулярная генетика и микробиология, педиатрия, фармакология, физиология, геномика, биоинформатика и протеомика.Эта разнообразная научная среда делает Программу исключительной тренировочной площадкой для аспирантов и докторантов, которые, в свою очередь, вносят большой вклад в ее жизнеспособность и увлекательность. В этой коллекции представлены публикации и презентации, написанные преподавателями и исследователями Программы молекулярной медицины.

Следовать

Публикации с 2020 года

PDF

Естественная вариация глюкуронозилтрансферазы модулирует чувствительность к пропионату у C.elegans модель пропионовой ацидемии, Huimin Na, Стефан Здральевич, Робин Э. Танни, Альберта Дж. М. Валхаут и Эрик К. Андерсен

PDF

Протеомные и транскрипционные профили бета-клеток, полученных из стволовых клеток человека после энтеровирусной инфекции, Джулиус О. Ньялвиде, Агата Юрчик, Басанти Сатиш, Самбра Д. Редик, Наташа Кайсар, Мелани И. Тромбли, Пранита Вангала, Риккардо Рачико, Рита Бортелл Дэвид М. Харлан, Дейл Л. Грейнер, Майкл А. Брем, Джерри Л. Надлер и Дженнифер П.Ван

PDF

TRIM34 ограничивает капсиды ВИЧ-1 и SIV TRIM5-альфа-зависимым образом, Молли Охайнл, Кюсик Ким, Севнур Комурлу Кечели, Эбби Фелтон, Эд Кэмпбелл, Джереми Любан и Майкл Эмерман

PDF

Хантингтин дикого типа регулирует функцию макрофагов человека, Грейс С. О’Реган, Сахар Х. Фараг, Гэри Р. Острофф, Сара Дж. Табризи и Ральф Андре

PDF

dagLogo: Пакет R / Bioconductor для идентификации и визуализации использования дифференциальных аминокислотных групп в данных протеомики, Jianhong Ou, Haibo Liu, Niraj K.Нирала, Алексей Стукалов, Уша Ачарья, Майкл Р. Грин и Лихуа Джули Чжу

Ссылка

Ответ антител к ВИЧ-1: след вирусного резервуара у детей, вертикально инфицированных ВИЧ, Паоло Пальма, Маргарет М. Макманус, Никола Котуньо, Сальваторе Рокка, Паоло Росси и Кэтрин Лузуриага

PDF

Adaptive Evolution нацелена на сеть транскрипции предшественников piRNA, Swapnil Parhad, Tianxiong Yu, Gen Zhang, Nicholas P. Rice, Zhiping Weng и William E.Theurkauf

PDF

Извлечение жизнеспособных эндокринно-специфических клеток и транскриптомов у мышей с привитыми островками поджелудочной железы человека, Самбра Д. Редик, Линда Лихи, Энн Р. Риттенхаус, Дэвид М. Блоджетт, Алан Г. Дерр, Альпер Кюкукурал, Мануэль Гарбер, Леонард Д. Шульц, Дейл Л. Грейнер, Дженнифер П. Ван, Дэвид М. Харлан, Рита Бортелл и Агата Юрчик

Ссылка

Антагонизм лекарств и доминирование одного агента являются результатом различий в кинетике смерти, Райан Ричардс, Ханна Р.Шварц, Меган Э. Ханиуэлл, Мэрайя С. Стюарт, Питер Круз-Гордилло, Анна Джойс, Бенджамин Д. Лэндри и Майкл Дж. Ли

PDF

Атлас типов клеток придатка яичка и семявыносящего протока млекопитающих [препринт], Вера Д. Ринальди, Элиза Доннард, Кайл Геллатли, Мортен Расмуссен, Альпер Кюкукураль, Онур Юкселен, Мануэль Гарбер, Упасна Шарма и Оливер Дж. Рандо

PDF

Атлас типов клеток придатка яичка и семявыносящего протока мыши, Вера Д. Ринальди, Элиза Доннард, Кайл Геллатли, Мортен Расмуссен, Альпер Кюкукурал, Онур Юкселен, Мануэль Гарбер, Упасна Шарма и Оливер Дж.Рандо

PDF

Выросшая бактериальная резистентность к фторпиримидинам может снизить воздействие химиотерапии у хозяина Caenorhabditis elegans, Бриттани Розенер, Серкана Сайина, Питера О. Олуоча, Ауриана Гарсиа-Гонсалеса, Хиротада Мори, Альберты Дж. М. Уолхаут и Амира Митчелла

PDF

SREBP1 регулирует метаболизм митохондрий в онкогенных KRAS, экспрессирующих NSCLC [препринт], Кристиан Ф. Руис, Эмили Д. Монталь, Джон А. Хейли и Джон Д. Хейли

PDF

Новый препарат на основе парапробиотиков для борьбы с Haemonchus contortus у овец, Джон Сандерс, Дэвид Газзола, Ханчен Ли, Амбили Абрахам, Келли Фланаган, Флорентина Рус, Ян Ху, Гэри Р.Острофф и Раффи В. Ароян

PDF

Белок, взаимодействующий с тиоредоксином, необходим для хронической высококалорийной диеты, способствующей всасыванию фруктозы в кишечнике, Ану Шах, Сезин Дагдевирен, Джордан П. Левандовски, Анжела Б. Шмидер, Элизабет М. Риччи-Блер, Ниранджана Натараджан, Хенна Хундал, Хи Лим Но, Рэндалл Х. Фридлин, Чарльз Видудес, Джейсон К. Ким, Эми Дж. Вейджерс, Рой Дж. Соберман и Ричард Т. Ли

PDF

FMRP связывает оптимальные кодоны со стабильностью мРНК в нейронах [препринт], Huan Shu, Elisa Donnard, Botao Liu, Ruijia Wang и Joel D.Рихтер

Ссылка

Геномная характеристика эндотелиальных энхансеров выявляет многофункциональную роль NR2F2 в регуляции артериовенозной экспрессии генов, Самир Сиссауи, Джун Ю, Аймин Ян, Руи Ли, Онур Юкселен, Альпер Кюкукурал, Лихуа Джули Чжу и Натан Д. Лоусон

PDF

Бета-клеточная резистентность к инсулину способствует стимулированной глюкозой гиперсекреции инсулина [препринт], Сёс Сковсо, Хе Лим Но, Суджин Сук, Брайан Габласки, Джейсон К. Ким и Джеймс Д.Джонсон

PDF

Отрыв

YAP1 при гепатобластоме стимулирует терапевтическую дифференцировку опухолевых клеток в функциональные гепатоцитоподобные клетки, Джордан Л. Смит, Томас Родригес, Хайвэй Моу, Сует-Ян Кван, Генри Э. Пратт, Сяо-Оу Чжан, Юйин Цао, Шунь-Цин Лян, Дениз М. Озата, Тяньсюн Ю, Цянцзун Инь, Макс Хазельтин, Чжипин Вэн, Эрик Дж. Сонтхаймер и Вэнь Сюэ

Ссылка

Редактирование основания аденина в модели тирозинемии у взрослых мышей, Chun-Qing Song, Tingting Jiang, Michelle Richter, Luke H.Рим, Люк В. Коблан, Мария Пас Зафра, Эмма М. Шатофф, Джордан Л. Доман, Юэин Цао, Лукас Э. Доу, Лихуа Джули Чжу, Дэниел Г. Андерсон, Дэвид Р. Лю, Хао Инь и Вэнь Сюэ

PDF

Инновации, проблемы и минимальная информация для стандартизации гуманизированных мышей, Рената Стрипеке и Майкл А. Брем

PDF

Ремоделлер INO80C поддерживает геномную стабильность, предотвращая беспорядочную транскрипцию в истоках репликации, Салих Топал, Кристофер Ван, Йонг Сюэ, Майкл Ф.Кэри и Крейг Л. Петерсон

PDF

CRISPR-усиленное «потемнение» адипоцитов человека как клеточная терапия для метаболических заболеваний [препринт], Эммануэла Цагкараки, Сара М. Николоро, Тиффани ДеСуза, Хавьер Соливан-Ривера, Ананд Десаи, Юэфэй Шен, Марк Келли, Адилсон Л. Гильерме, Фелипе Энрикес, Раед Ибрагейм, Надя Амрани, Кевин Лук, Стейси Мейтленд, Рэндалл Х. Фридлин, Лорен Тауэр, Сяоди Ху, Джейсон К. Ким, Скот А. Вулф, Эрик Дж. Зонтхаймер, Сильвия Корвера и Майкл П.Чешский

Ссылка

Анализ с высоким разрешением дифференциальной экспрессии генов во время атрофии скелетных мышц и запрограммированной гибели клеток, Джунко Цуджи, Трэвис Томсон, Элизабет Чан, Кристин К. Браун, Джулия Оппенгеймер, Кэрол Бигелоу, Сяньцзюнь Донг, Уильям Э. Тёркауф, Чжипинг Вен и Лоуренс М. Шварц

PDF

Эпителиально-специфическая делеция Jun-N-концевой киназы 1 в дыхательных путях ослабляет легочный фиброз в двух независимых моделях мышей, Jos L.ван дер Вельден, Джон Ф. Алкорн, Дэвид Г. Чепмен, Леннарт К. А. Лундблад, Чарльз Г. Ирвин, Роджер Дж. Дэвис, Келли Батнор и Ивонн М. В. Янссен-Хейнингер

Ссылка

Картирование с высоким разрешением многосторонних взаимодействий энхансер-промотор, регулирующих обнаружение патогенов, Пранита Вангала, Рэйчел Мерфи, София А. Квинодоз, Кайл Дж. Геллатли, Патрик Э. МакДонел, Митчелл Гуттман и Мануэль Гарбер

PDF

Pseudomonas aeruginosa расщепляет центр декодирования рибосом Caenorhabditis elegans, Алехандро Васкес-Рифо, Эмилиано П.Риччи и Виктор Р. Амброс

PDF

WormPaths: аннотация и визуализация метаболического пути Caenorhabditis elegans [препринт], Мелисса Д. Уокер, Габриэль Э. Гизе, Эми Д. Холдорф, Сушила Бхаттачарья, Седрик Диот, Ауриан Гарсия-Гонсалес, Брент Хоровиц, Томас Йонг-Ук Ли , Сюхан Ли, Зейнеп Мирза, Хуйминь На, Шивани Нанда, Ольга Пономарова, Хэфэй Чжан, Цзинъянь Чжан, Л. Сафак Йылмаз и Альберта Дж. М. Уолхаут

PDF

Экзогенный GDF11, но не GDF8, снижает массу тела и улучшает гомеостаз глюкозы у мышей, Райан Г.Уокер, Хе Лим Но, Тэкён Ким, Джейсон К. Ким и Ричард Т. Ли

Ссылка

Цитокины, индуцированные ВИЧ-1, истощают гомеостатические врожденные лимфоидные клетки и увеличивают TCF7-зависимые NK-клетки памяти, Йетао Ван, Лоуренс М. Лифшиц, Кайл Геллатли, Шон М. Макколи, Пранита Вангала, Кюсик Ким, Алан Г. Дерр, Смита Джайсвал , Альпер Кюкукурал, Патрик МакДонел, Томас С. Гриноу, Джин-Мэри Хоутон, Мануэль Гарбер и Джереми Любан

Ссылка

Аномальная фертильность, образование акросом, экспрессия и локализация IFT20 у мышей с условным нокаутом Gmap210, Zhenyu Wang, Yuqin Shi, Suheng Ma, Qian Huang, Yi Tian Yap, Lin Shi, Shiyang Zhang, Ting Zhou, Wei Li, Bo Hu, Ling Zhang , Стивен А.Кравец, Грегори Дж. Пазур, Рекс А. Гесс и Чжибин Чжан

PDF

DGAT1 — онкопротеин метаболизма липидов, который позволяет раковым клеткам накапливать жирные кислоты, избегая липотоксичности [препринт], Дэниел Дж. Уилкок, Мелисса Кашета и Крейг Дж. Сеол

PDF

Раковый микробиом: различение прямых и косвенных эффектов требует системного подхода, Жоао Б. Ксавье и Амир Митчелл

Ссылка

Быстрая, чувствительная и воспроизводимая модель гуманизированных мышей in vivo PBMC для определения терапевтического синдрома высвобождения цитокинов, Chunting Ye, Hongyuan Yang, Mingshan Cheng, Leonard D.Шульц, Дейл Л. Грейнер, Майкл А. Брем и Джеймс Г. Кек

PDF

DolphinNext: платформа распределенной обработки данных для высокопроизводительной геномики, Онур Юкселен, Осман Туркилмаз, Ахмет Р. Озтюрк, Мануэль Гарбер и Альпер Кюкукурал

Ссылка

Структурный и функциональный анализ варианта белка-шипа D614G SARS-CoV-2, Леонид Юрковецкий, Томас Нялиле, Йетао Ван, Уильям Э. Диль, Энн Дофин, Клаудиа Карбон, Кристен Вейнотт, Шон Б. Эгри, Джеймс Б.Манро, Пардис К. Сабети, Христос А. Киратсус, Наталья В. Дудкина, Куанг Шен и Джереми Любан

PDF

SARS-CoV-2 Spike-вариант белка D614G увеличивает инфекционность и сохраняет чувствительность к антителам, которые нацелены на рецептор-связывающий домен [препринт], Леонид Юрковецкий, Томас Ньялиле, Йетао Ван, Уильям Э. Дил, Анн Дофин, Клаудиа Карбон, Кристен Вейнотт, Шон Б. Эгри, Пардис К. Сабети, Христос Киратсус, Джеймс Б. Манро, Куанг Шен и Джереми Любан

PDF

Геномы бобра и голой кротовой крысы раскрывают общие пути к долголетию, Сюмин Чжоу, Элинор К.Карлссон, Вадим Николаевич Гладышев

PDF

Рецептор SARS-CoV-2 ACE2 представляет собой стимулируемый интерфероном ген в эпителиальных клетках дыхательных путей человека и обнаруживается в определенных клеточных субпопуляциях в тканях, Карли Г.К. Циглер, Юмин Цао, Чжиру Го, Дженнифер П. Ван, Роберт В. Финберг, Мануэль Гарбер, Алекс К. Шалек, Хосе Ордовас-Монтанес и HCA Lung Biological Network

PDF

Мультитул сравнительной геномики для научных открытий и сохранения, Zoonomia Consortium, Дайан П.Женере, Мануэль Гарбер, Керстин Линдблад-То и Элинор К. Карлссон

Публикации за 2019 год

PDF

Новая платформа вакцины, использующая частицы глюкана для индукции защитных реакций против Francisella tularensis и других патогенов, Амбили Абрахам, Гэри Р. Острофф, Стюарт М. Левитц и П. К. Ф. Ойстон

Ссылка

Модели мышей с гуманизированной иммунной системой: прогресс, проблемы и возможности, Тодд М. Аллен, Майкл А.Брем, Сандра Бриджес, Стейси Фергюсон, Прити Кумар, Олег Мирочниченко, Каролина Палука, Роберта Пеланда, Бриджит Сандерс-Бир, Леонард Д. Шульц, Лишан Су и Мерси Прабхудас

Ссылка

Химический каркас двухвалентной siRNA для мощной и устойчивой модуляции экспрессии генов в центральной нервной системе, Джулия Ф. Альтерман, Бруно MDC Годиньо, Мэтью Р. Хасслер, Шанталь М. Фергюсон, Димас Эчеверрия, Эллен Сапп, Река А. Харасти, Эндрю Х. Коулз, Фейт Конрой, Рэйчел Миллер, Лоик Ру, Пол Ян, Эмили Г.Нокс, Антон А. Туранов, Роберт М. Кинг, Глэдис Герну, Кристиан Мюллер, Хизер Грей-Эдвардс, Ричард П. Мозер, Н. Бишоп, Самер М. Джабер, Мэтью Дж. Гунис, Мигель Сена-Эстевес, Атма А. Пай , Мариан ДиФилья, Нил Аронин и Анастасия Хворова

PDF

Прогрессивное выравнивание с Cactus: выравниватель нескольких геномов для эпохи тысячи геномов [препринт], Джоэл Армстронг, Элинор К. Карлссон и Бенедикт Патен

PDF

Использование гуманизированных мышей для изучения специфических врожденных иммунных ответов человека в иммуноонкологии, Кен-Эдвин Арье

PDF

Многомерное ремоделирование транскрипции с помощью физиологического инсулина in vivo, Thiago M.Батиста, Рубен Гарсия-Мартин, Вейкан Кай, Масахиро Кониси, Брайан Т. О’Нил, Масаджи Сакагути, Чон Хун Ким, Дэ Ён Чжон, Джейсон К. Ким и К. Рональд Кан

PDF

Различные липидные конъюгаты для функциональной внепеченочной доставки миРНК in vivo, Аннабель Бисканс, Эндрю Х. Коулз, Река А. Харасти, Димас Эчеверриа, Мэтью Р. Хасслер, Мэйр Ф. Осборн и Анастасия Хворова

Ссылка

Потеря презентации антигена в макрофагах жировой ткани или в адипоцитах, но не в обоих, улучшает метаболизм глюкозы, Alecia M.Блащак, Валери П. Райт, Каджол Анандани, Джои Лю, Анахита Джалилванд, Стивен Бергин, Сара М. Николоро, Майкл П. Чех, Уильям Лафузе, Туо Денг, Дэвид Брэдли и Уилла А. Сюэ

Ссылка

Ограниченный выбор мутаций аминокислот в эволюции протеазы ВИЧ-1, Джеффри И. Баучер, Трой В. Уитфилд, Энн Дофин, Гили С. Нахум, Карл Холлинс III, Константин Б. Зельдович, Рональд Свонстром, Селия А. Шиффер, Джереми Любань, и Даниэль Болон

Ссылка

Нарушение суточной регуляции температуры у мышей с боковым амиотрофическим склерозом, Maurine C.Браун, Александра Кастильо-Руис, Премананда Индик, Дэ Янг Юнг, Джейсон К. Ким, Роберт Х. Браун-младший, Стивен Дж. Своп и Уильям Дж. Шварц

PDF

Детектор персистентности для перенастройки метаболической сети у животного, Джоте Т. Булча, Габриэль Э. Гизе, Зульфикар Али, Йонг-Ук Ли, Мелисса Д. Уокер, Эми Д. Холдорф, Л. Сафак Йилмаз, Роберт К. Брюстер, и Альберта Дж. М. Вальхаут

Ссылка

Циркулирующие профили микроРНК при токсичности ацетаминофена, Стефани Каррейро, Джеймс Марвел-Коэн, Розалинд Ли, Бриттани Чепмен и Виктор Р.Амброс

Ссылка

Bacillus thuringiensis Cry5B активен против Strongyloides stercoralis in vitro, Sarit Charuchaibovorn, Vivornpun Sanprasert, Nataya Sutthanont, Yan Hu, Ambily Abraham, Gary R. Ostroff, Raffi V. Aroian, Tegegn G.

PDF

TRIM5alpha ограничивает репликацию флавивирусов путем нацеливания вирусной протеазы на протеасомную деградацию, Абхилаш И. Чирамель, Николас Р. Мейерсон, Кристин Л. МакНалли, Ребекка М.Брокель, Ванесса Р. Монтойя, Омайра Мендес-Солис, Шелли Дж. Робертсон, Гейл Л. Стердевант, Кирк Дж. Любик, Винод Наир, Брайан Х. Юсефф, Робин М. Айрлэнд, Кэтрин М. Босио, Кюсик Ким, Джереми Любан , Ванесса М. Хирш, Р. Трэвис Тейлор, Фадила Буамр, Сара Л. Сойер и Соня М. Бест

PDF

Гетерохронный ген lin-28 C. elegans координирует синхронизацию гиподермальных и соматических гонадных программ для морфогенеза репродуктивной системы гермафродитов, Сунгук Чой и Виктор Р.Амброс

PDF

Члены семейства Toll связывают несколько белков Spatzle и активируют экспрессию гена антимикробного пептида у Drosophila, Munmun Chowdhury, Chun-Feng Li, Zhen He, Yuzhen Lu, Xu-Sheng Liu, Yu-Feng Wang, Y. Tony Ip, Michael R. Strand , и Сяо-Цян Юй

PDF

Подход с использованием больших данных к пониманию скорости метаболизма и реакции на ожирение у лабораторных мышей [препринт], Джун К. Корриган, Дипти Рамачандран, Ючен Хе, Колин Палмер, Майкл Дж.Юрчак, Биншан Ли, Рэндалл Х. Фридлин, Джейсон К. Ким, Джон Дж. Рэмси, Луиза Лантье, Оуэн П. МакГиннесс, Александр С. Бэнкс и рабочая группа

Центра метаболического фенотипирования мышей.

PDF

Минимальная система CRISPR-Cas3 для геномной инженерии [препринт], Балинт Чорго, Лина М. Леон, Илеа Дж. Чау-Ли, Алехандро Васкес-Рифо, Джоэл Д. Берри, Кэролайн Махендра, Эмили Д. Кроуфорд, Дженнифер Д. Льюис и Джозеф Бонди-Деноми

Ссылка

Переработка эндосом в зрелом эпителии ограничивает передачу онкогенных сигналов, Лука Д’Агостино, Инчао Ни, Ци Ли, Ю.Тони Ип и Нан Гао

PDF

Использование роботизированной автоматизации и веб-технологий для модернизации научных исследований, Орна Дахан, Бат-Шахар Дорфман, Серкан Сайин, Бриттани Розенер, Тиффани Хуа, Анат Ярден и Амир Митчелл

PDF

Структурная организация и динамика факторов обмена гомодимерных цитогезинов Arf GTPase в растворе и на мембранах, Sanchaita Das, Andrew W. Malaby, Agata Nawrotek, Wenhua Zhang, Mahel Zeghouf, Sarah Maslen, Mark Skehel, Srinivas Chakravarthy, Thomas C.Ирвинг, Осман Бильсель, Жаклин Черфилс и Дэвид Г. Ламбрайт

Ссылка

Технологии оказания медицинской помощи при заболеваниях сердца, легких, крови и сна от Центра передовых технологий оказания медицинской помощи, Эрик Ю. Динг, Эмили Энсом, Натаниэль Хафер, Брайан Буххольц, Мэри Энн Пикард, Дениз Данлэп, Юджин Роджерс, Карл Лоутон, Айнат Корен, Крейг М. Лилли, Тимоти П. Фицгиббонс и Дэвид Д. Макманус

PDF

Диета с высоким содержанием жиров в модели мыши, резистентной к инсулину, вызывает повсеместную перестройку сигнальной сети фосфотирозина, Антье Диттманн, Норман Дж.Кеннеди, Нина Л. Солтеро, Надер Моршед, Миеко Д. Мана, Омер Х. Йилмаз, Роджер Дж. Дэвис и Форест М. Уайт

Ссылка

Ловушка Rab GTPase хвостом, Цзяньцзюнь Дуань и Дэвид Г. Ламбрайт

Ссылка

Интерлейкин-6, полученный из-за кожного дефицита стеароил-КоА-десатуразы-1, может опосредовать перекрестное взаимодействие органов метаболизма между кожей, жировой тканью и печенью, Сабрина Н. Дюма, Чанг-Ан Го, Джейсон К. Ким, Рэндалл Х. Фридлин и Джеймс М. Нтамби

Ссылка

Компактный высокоточный Cas9 с динуклеотидным PAM для редактирования генома in vivo, Алиреза Эдраки, Аамир Мир, Раед Ибрахейм, Ильдар Гайнетдинов, Ёнсу Юн, Чун-Цин Сон, Юэин Цао, Джудит Галлант, Вен Сюэ, Хайме А.Ривера и Эрик Дж. Сонтхаймер

Ссылка

Влияние старения на чувствительность к инсулину и его клиренс у мышей и людей, не зависящие от ожирения, Николь Эрхардт, Джинруи Цуй, Сезин Дагдевирен, Сухаорн Сангнипанткул, Хелен С. Гудридж, Джейсон К. Ким, Луиза Лантье, Сюцин Го, Юй-Дер И. Чен, Лесли Дж. Раффель, Томас А. Бьюкенен, Уилла А. Сюэ, Джером И. Роттер, Марк О. Гударци и Миклош Петерфи

Ссылка

Долгосрочная профилактика фиброза имплантатов у грызунов и нечеловеческих приматов с помощью кристаллизованных лекарственных форм, Shady Farah, Dale L.Грейнер и Дэниел Г. Андерсон

PDF

Члены семьи сиртуинов дрожжей поддерживают гомеостаз транскрипции для обеспечения стабильности генома, Джессика Л. Фельдман и Крейг Л. Петерсон

PDF

Adipocyte ACLY способствует переработке углеводов в рационе для поддержания метаболического гомеостаза у женщин, Салли Фернандес, Джон М. Виола, АннМэри Торрес, Мартина Уоллес, Софи Трефели, Стивен Чжао, Хейли К. Аффронти, Дживани М. Генгатаран, Дэвид А. Гертин, Дэвид А. Гертин, W.Снайдер, Кристиан М. Металло и Кэтрин Э. Веллен

Ссылка

Вывод динамики популяции из данных временных рядов секвенирования одноклеточной РНК, Дэвид С. Фишер, Анна К. Фидлер, Эрик М. Кернфельд, Райан Дженга, Эйми Бастидас-Понсе, Мостафа Бахти, Хайко Ликерт, Ян Хасенауэр, Рене Маер, и Фабиан Дж. Тайс

PDF

Ишемическая болезнь сердца не связана со значительными изменениями экспрессии воспалительных генов в эпикардиальном жире человека, Тимоти П. Фитцгиббонс, Нэнси Ли, Ханх-Ван Т.Тран, Сара М. Николоро, Марк Келли, Стэнли К.С. Тэм и Майкл П. Чех

PDF

Anti-CRISPR AcrIIA5 мощно ингибирует все гомологи Cas9, используемые для редактирования генома, Бьянка Гарсия, Джуён Ли, Алиреза Эдраки, Юрима Идальго-Рейес, Стивен Эрвуд, Аамир Мир, Шантель Н. Трост, Ури Серусси, Сабрина Д. Стэнли, . Кон, Джули М. Клейкомб, Эрик Дж. Сонтхаймер, Карен Л. Максвелл и Алан Р. Дэвидсон

Ссылка

Человеческие моноклональные антитела против ВИЧ-1 gp120 с нейтрализующей активностью, клонированные от гуманизированных мышей, инфицированных ВИЧ-1, Мелисса А.Гаврон, Марк Дюваль, Клаудиа Карбоне, Смита Джайсвал, Аарон Уоллес, Джозеф К. Мартин 3-й, Энн Дофин, Майкл А. Брем, Дейл Л. Грейнер, Леонард Д. Шульц, Джереми Любан и Лиза А. Кавачини

PDF

На пути к пониманию молекулярных основ развития эндодермы человека с использованием CRISPR-эффекторных и одноклеточных технологий, Райан М. Дженга

PDF

Скрининг CRISPRi на основе секвенирования одноклеточной РНК решает молекулярные факторы раннего развития эндодермы человека, Райан М.Дженга, Эрик М. Кернфельд, Кришна М. Парси, Тиган Дж. Парсонс, Майкл Дж. Циллер и Рене Маер

Ссылка

Гиперинсулинемия вызывает резистентность к инсулину у самцов мышей с печеночно-специфической делецией Ceacam1 независимо от липолиза, Хильда Э. Гадие, Люсия Руссо, Харрисон Т. Мутури, Симона С. Ганем, Ияд Х. Манасерх, Хай Лим Но, Суджин Сок, Джейсон К. Ким, Дженнифер В. Хилл и Соня М. Наджар

PDF

Регуляция развития меланоцитов рыбок данио с помощью лиганд-зависимой передачи сигналов BMP, Алек Граманн, Арвинд М.Венкатесан, Мелисса Герин и Крейг Дж. Сеол

Ссылка

Как стать главным исследователем: планирование и направление вашего академического приключения, Пол Л. Грир и Мелани А. Сэмюэл

Ссылка

Молекулярные пути, связывающие жировую иннервацию с действием инсулина при ожирении и сахарном диабете, Адилсон Л. Гильерме, Фелипе Энрикес, Александр Х. Бедард и Майкл П. Чех

Ссылка

Получение и характеристика наночастиц гуминовой кислоты, инкапсулированных в клеточную стенку дрожжей, инкапсулированных бета-глюканом в качестве усиленного связующего афлатоксина B1, Зейнаб Хамза, Махер Эль-Хашаш, Сохер Али, Амаль Хатхут, Эрнесто Сото, Бассем Сабри и Гэри Р.Острофф

PDF

Сывороточная депривация мезенхимальных стволовых клеток улучшает активность экзосом и изменяет липидный и белковый состав, Река А. Харасти, Рэйчел Миллер, Мишель Л. Дубьюк, Эндрю Х. Коулз, Мари К. Дидио, Димас Эчеверриа, Маттео Стоппато, Ив Ю. Сере , Джон Д. Лешик, Джулия Ф. Альтерман, Бруно MDC Годиньо, Мэтью Р. Хасслер, Рэйчел Уоллакотт, Ян Ван, Скотт А. Шаффер, Нил Аронин и Анастасия Хворова

Ссылка

Кукурузный Ag2 в качестве субъединичной вакцины от лихорадки долины, Селин А.Хайден, Чиунг-Ю Хунг, Хао Чжан, Остин Негрон, Раймонд Эскерра, Гэри Р. Острофф, Амбили Абрахам, Алехандро Габриэль Лопес, Джульетта Элизабет Гонсалес и Джон А. Ховард

PDF

Моделирование индуцированной цисплатином сигнальной динамики в тройных отрицательных раковых клетках молочной железы выявляет медиаторы чувствительности, Энн Маргриет Хейджинк, Марике Эвертс, Меган Э. Ханиуэлл, Райан Ричардс, Янник П. Кок, Элизабет Дж. Де Вриз, Майкл Дж. Ли, и Marcel ATM van Vugt

Ссылка

WormCat: онлайн-инструмент для аннотации и визуализации данных генома Caenorhabditis elegans, Эми Д.Холдорф, Дэниел П. Хиггинс, Энн С. Харт, Питер Р. Боаг, Грегори Дж. Пазур, Альберта Дж. М. Уолхаут и Эми К. Уокер (генетика, 06.12.2019)

PDF

WormCat: онлайн-инструмент для аннотации и визуализации данных генома Caenorhabditis elegans [препринт], Эми Д. Холдорф, Дэниел П. Хиггинс, Энн С. Харт, Питер Р. Боаг, Грегори Дж. Пазур, Альберта Дж. М. Уолхаут, и Эми К. Уокер

Ссылка

Липогенез De Novo как источник вторых мессенджеров в адипоцитах, Вэнь-Ю Сяо и Дэвид А.Гертен

PDF

Рецептор суперсемейства иммуноглобулинов регулирует адаптивный термогенез, Кармен Уртадо Дель Посо, Рэндалл Х. Фридлин, Хе Лим Но, Джейсон К. Ким и Энн Мари. Шмидт

PDF

Механизмы устойчивости темпоральной клеточной судьбы у C. Elegans, Orkan Ilbay

Ссылка

Феромоны и пищевые сигналы регулируют зависимость развития от микроРНК семейства let-7 у C. elegans, Orkan Ilbay and Victor R.Амброс

PDF

Регуляция ядерно-цитоплазматического разделения с помощью пути lin-28-lin-46 усиливает репрессию микроРНК HBL-1, обеспечивая устойчивую прогрессию клеточной судьбы у C. elegans, Orkan Ilbay и Victor R. Ambros

Ссылка

На переднем крае: раннее истощение Т-клеток памяти во время воспаления и блокады костимуляции регулируется одновременно проапоптотическими белками Fas и Bim, Сонал Джангалве, Варун Н. Капур, Цзя Сюй, Номеда Гирниус, Норман Дж.Кеннеди, Ивонн Дж. К. Эдвардс, Раймонд М. Уэлш, Роджер Дж. Дэвис и Майкл А. Брем

Ссылка

Неканоническая передача сигналов mTORC2 регулирует катаболизм липидов коричневых адипоцитов с помощью SIRT6-FoxO1, Су Мён Юнг, Чиен-Мин Хунг, Сэмюэл Р. Хильдебранд, Джоан Санчес-Гурмачес, Димпи Мукхопадхай, Камила Мартинес Калейман, Амелия К.-Люсиано Сяо, Юэфэн Тан, Huawei Ли и Дэвид А. Гертин

PDF

Консервативные особенности репертуара рецепторов Т-клеток способствуют сохранению ВЭБ-специфических Т-лимфоцитов CD8, Лариса Камга

PDF

CDR3alpha управляет отбором репертуара рецепторов Т-лимфоцитов CD8 иммунодоминантного вируса Эпштейна-Барра (EBV) BRLF1 при первичной инфекции, Лариса Камга, Анна Гил, InYoung Song, Робин М.Броуди, Дарио Герси, Нурай Аслан, Лоуренс Дж. Стерн, Лийза К. Селин и Кэтрин Лузуриага

PDF

Neural JNK3 регулирует восстановление кровотока после ишемии задних конечностей у мышей через ось Egr1 / Creb1, Шаши Кант, Шивон М. Крейдж, Кай Чен, Микаэлла М. Рейф, Хизер Лиджард, Марк Келли, Амада Д. Кализ, Хан-Ван Т. . Тран, Касмир Рамо, Оуэн М. Петерс, Марк Р. Фриман, Роджер Дж. Дэвис и Джон Ф. Кини-младший

Ссылка

Полногеномный анализ серовара Typhi Salmonella enterica у гуманизированных мышей выявляет ключевые особенности вирулентности, Джойс Э.Карлинси, Тейлор А. Степьен, Мэтью Мэйхо, Лариса А. Синглетари, Лейси К. Бингхэм-Рамос, Майкл А. Брем, Дейл Л. Грейнер, Леонард Д. Шульц, Ларри А. Галлахер, Мэтт Баун, Роберт А. Кингсли, Стивен Дж. Либби и Феррик К. Фанг

Ссылка

Циклофилин A защищает ВИЧ-1 от ограничения человеческим TRIM5alpha, Кюсик Ким, Энн Дофин, Севнур Комурлу, Шон М. МакКоли, Леонид Юрковецкий, Клаудиа Карбон, Уильям Э. Дил, Катерина Страмбио-Де-Кастилья, Эдвард М. Кэмпбелл, и Джереми Любан

PDF

DEBrowser: интерактивный инструмент дифференциального анализа и визуализации данных подсчета, Альпер Кучукурал, Онур Юкселен, Дениз М.Озата, Мелисса Дж. Мур и Мануэль Гарбер

PDF

Истощение TRRAP вызывает независимое от р53 старение при раке печени за счет подавления митотических генов, Suet-Yan Kwan, Ankur Sheel, Chun-Qing Song, Xiao-Ou Zhang, Tingting Jiang, Hien Dang, Yueying Cao, Deniz M. Ozata, Haiwei Моу, Хао Инь, Чжипин Вэн, Синь Вэй Ван и Вэнь Сюэ

HIP14, новый белок, содержащий анкириновый домен, связывает хантингтин с внутриклеточным переносом и эндоцитозом | Молекулярная генетика человека

Абстрактные

Болезнь Хантингтона (БХ) вызывается экспансией полиглутамина [поли (Q)] в белке хантингтине (htt).Хотя точный механизм прогрессирования заболевания еще предстоит выяснить, измененные взаимодействия мутантного htt с его белками-партнерами могут вносить вклад в заболевание. Используя дрожжевую двугибридную систему, мы выделили новый взаимодействующий с htt белок, HIP14. Взаимодействие HIP14 с htt обратно коррелирует с длиной поли (Q) в htt. мРНК длиной 9 и 6 п.н. транскрибируются из гена HIP14 , при этом транскрипт размером 6 т.п.н. преимущественно экспрессируется в головном мозге. Белок HIP14 обогащен в головном мозге, демонстрирует частичную локализацию с htt в полосатом теле и обнаруживается в нейронах со средними выступами шипов, подмножестве нейронов, пораженных при HD.HIP14 локализуется в Гольджи и везикулах цитоплазмы. Белок HIP14 имеет сходство последовательности с Akr1p, белком, необходимым для эндоцитоза в Saccharomyces cerevisiae. Экспрессия человеческого HIP14 приводит к снижению чувствительной к температуре летальности в дрожжевых клетках akr1Δ и, кроме того, восстанавливает их дефект в эндоцитозе, демонстрируя роль HIP14 во внутриклеточном перемещении. Наши результаты показывают, что снижение взаимодействия между htt и HIP14 может вносить вклад в дисфункцию нейронов при HD, нарушая нормальные пути внутриклеточного транспорта в нейронах.

DDBJ / EMBL / Genbank номера доступа AB024494, AB024495

ВВЕДЕНИЕ

Хотя экспансия полиглутамина [поли (Q)], причинная мутация при болезни Хантингтона (HD) была обнаружена несколько лет назад, до сих пор нет доказанного механизма избирательной уязвимости нейронов в полосатом теле и коре, наблюдаемой при этой болезни. Белок хантингтин (htt) экспрессируется повсеместно во всех тканях. В нейронах htt связан с синаптическими пузырьками и микротрубочками и обогащен дендритами и нервными окончаниями (1,2).

Чтобы понять нормальную функцию htt и механизмы патогенеза при HD, а также расширить пути взаимодействия с htt, мы провели двухгибридный скрининг дрожжей для идентификации htt-связывающих белков и определили, модулируется ли длина поли (Q) эти взаимодействия. В случае, если взаимодействие модулируется экспансией CAG, это может указывать на то, что взаимодействие явно нарушается в присутствии мутации и что, следовательно, это может вносить вклад в патогенез HD.В этом отношении примечательно, что определенные классы белков объединяются в кластеры в своем паттерне взаимодействия с htt. Например, функции нормального htt можно определить из анализа его белковых партнеров. Если эти партнеры не обнаруживают измененных взаимодействий в присутствии мутации, то эти взаимодействия вряд ли лежат в основе HD. Мутантный htt не обнаруживает измененного взаимодействия с белками, такими как HIP2 и p53, предполагая, что роль htt в контроле клеточного цикла и выживании клеток является частью его нормальной функции и не вносит непосредственного вклада в патогенез.

Семь белков, участвующих в регуляции транскрипции, взаимодействуют с htt. Это ко-репрессор ядерного рецептора (3), транскрипционный ко-репрессор C-концевого связывающего белка (4), HYP-A (FBP-11), HYP-B (p231HBP) (5), белок, связывающий элемент ответа цАМФ. (CREB) -связывающий белок (CBP) (6), mSin3a (7) и связанный с p300 / CBP фактор (P / CAF) (7). Интересно, что почти все взаимодействующие белки-партнеры htt, участвующие в регуляции транскрипции, обнаруживают измененное взаимодействие с htt в присутствии экспансии поли (Q), указывая тем самым, что нарушение этого взаимодействия может вносить вклад в наблюдаемый патогенез.

Более того, мутант htt демонстрирует измененное взаимодействие со всеми своими белками-партнерами, участвующими в функциях внутриклеточного нейронального транспорта, обеспечивая убедительные доказательства того, что измененный транспорт может вносить вклад в патогенез, наблюдаемый при HD. Доказательством этого является то, что несколько взаимодействующих белков, включая htt-взаимодействующий белок 1 (HIP1) (8), htt-связанный белок 1 (HAP1) (9-11), кальмодулин (12), Sh4GL3 (13) и цистатион β -синтаза (14), были идентифицированы с функциями в транспортной и цитоскелетной организации.Мы описываем здесь идентификацию и функциональное определение htt-взаимодействующего белка, HIP14, который также показывает измененное взаимодействие с мутантным htt и играет роль в эндоцитозе. HIP14 преимущественно экспрессируется в нейронах головного мозга, но не в глии, и локализуется в комплексе Гольджи и цитоплазматических пузырьках. HIP14 имеет высокую степень аминокислотного сходства с белками различных организмов, включая Akr1p, белок, необходимый для эндоцитоза феромонных рецепторов в дрожжах Saccharomyces cerevisiae (15).Клетки дрожжей, лишенные функционального AKR1 ( akr1Δ ), демонстрируют пониженную жизнеспособность при повышенной температуре и обнаруживают дефекты эндоцитоза. Мы определили, что HIP14 может восстанавливать чувствительную к температуре жизнеспособность дрожжевых клеток akr1Δ и восстанавливать их блокировку при эндоцитозе, предполагая, что HIP14 может играть роль во внутриклеточных транспортных процессах, и обеспечивая дополнительное доказательство роли htt в нейрональном транспорте. Эти данные приводят к гипотезе о том, что нарушенное взаимодействие между htt и HIP14 может приводить к изменениям нейронального транспорта, вносящего вклад в патогенез при HD.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Выделение

клонов HIP14 кДНК

Мы выполнили скрининг двухгибридных библиотек дрожжей для идентификации белков-партнеров htt. Двухгибридный дрожжевой скрининг выявил 14 положительных клонов (16). Из них было обнаружено, что один клон HIP14 (pGAD HIP14 -500) специфически взаимодействует со слитым белком pGBT9–1955-44, поскольку дрожжевые ко-трансформанты давали His + , β-галактозидазу + фенотипа, и трансформация pGAD HIP14 -500 вектором pGBT9 не индуцировала активность β-галактозидазы.

Мы идентифицировали пять клонов кДНК, кодирующих HIP14 , путем скрининга библиотек кДНК человеческого мозга с помощью pGAD HIP14 -500. Поиск в базе данных выявил несколько клонов меток экспрессированной последовательности (EST), кодирующих области HIP14. Были определены и сопоставлены последовательностей ДНК этих клонов кДНК. Составная последовательность кДНК HIP14 включает 5272 нуклеотида, содержащих одну открытую рамку считывания (ORF) длиной 1902 нуклеотида, которая, как предполагается, кодирует белок HIP14, состоящий из 633 аминокислот.Сообщалось о взаимодействующем с htt белок HYPH , который идентичен 5′-части HIP14 (5), обеспечивая независимое подтверждение взаимодействия HIP14 и htt. Нуклеотидная последовательность HIP14 депонирована в базе данных DDBJ / EMBL / GenBank под номером доступа. AB024494.

Идентификация

HIP14 родственного белка ( HIP14L ) Поиск в базе данных

выявил клоны EST человека, кодирующие ген, гомологичный HIP14. Из них один клон содержал одну ORF длиной 1869 нуклеотидов, кодирующую предсказанный белковый продукт из 622 аминокислот, с 48% идентичностью и 57% сходством с HIP14 (рис. 1 и таблица 1). Мы обозначили этот EST HIP14 родственный белок ( HIP14L ). Нуклеотидная последовательность HIP14L депонирована в базе данных DDBJ / EMBL / GenBank под номером доступа. AB024495. Картирование гибридов соматических клеток на основе ПЦР показало, что HIP14L картирован на хромосоме 11 человека (данные не показаны).

HIP14 отображается на хромосоме человека 12q14 – q15

Для определения хромосомной локализации HIP14 был проведен FISH-анализ, который показал, что HIP14 картирован в единственном геномном локусе в 12q14 – q15. Поиск в базе данных GDB и OMIM показал, что в этом регионе не было обнаружено генетических заболеваний (данные не показаны).

HIP14 и HIP14L демонстрируют гомологию с анкириновым повтором, содержащим белок

S. cerevisiae Akr1p Аминокислотные последовательности

HIP14 и HIP14L были подвергнуты поиску гомологии, который выявил значительную гомологию между HIP14, HIP14L, двумя S.cerevisiae белки, содержащие анкириновые повторы (Akr1p, белок, необходимый для эндоцитоза рецепторов феромонов и Akr2p), и другие предсказанные транскрипты с неизвестной функцией у Caenorhabditis elegans (номер доступа AAD12801), Drosophila melanogaster no. ), Mortierella alpina (инвентарный номер CAB56510) и Schizosaccharomyces pombe (инвентарный номер CAA

). Множественные выравнивания последовательностей между HIP14, HIP14L, Akr1p, Akr2p, C.elegans h42C10.a , D. melanogaster , M. alpina и S. pombe подтвердили значительное сходство последовательностей друг с другом (Таблица 1). Структурный и мотивный анализ этих белков показал, что каждый имеет серию из 33-х остатков анкириновых повторов и от четырех до шести предполагаемых трансмембранных спиралей (Рис. 1). Было обнаружено, что относительные положения анкириновых повторов и предполагаемых трансмембранных спиралей в этих белках являются хорошо законсервированными, что позволяет предположить, что эти белки могут иметь функциональное или структурное сходство.

Снижение взаимодействия HIP14 с мутантом htt

Чтобы подтвердить взаимодействие htt с HIP14 и оценить влияние длины поли (Q) на это взаимодействие, мы выполнили жидкие анализы β-галактозидазы (рис. 2А). Пять изолированных колоний от каждой из трех отдельных трансформаций htt-конструкций pGBT9–1955-15 или pGBT9–1955-128 или pGBT9 в качестве контроля были индивидуально проанализированы на предмет их силы взаимодействия с pGAD-HIP14 (рис. 2A; pGBT9; 1,91 ± 1). 0.05 SEM; n = 15, pGBT9–1955-15; 29,00 ± 0,48 SEM; n = 15, pGBT9–1955–128; 17,93 ± 0,82 SEM; n = 15). Расширение Poly (Q) в htt приводило к значительному снижению его взаимодействия с HIP14 ( P <0,001). Вестерн-блот-анализ дрожжевых клеток, трансформированных pGAD – HIP14-500, а также pGBT9–1955-15 или pGBT9–1955-128, показал эквивалентные уровни экспрессии белка (данные не показаны), что указывает на снижение взаимодействия между HIP14 и увеличенным htt в дрожжах. не было связано с различиями в трансляции или измененной стабильностью htt с разной длиной поли (Q).

Для подтверждения зависимости взаимодействия HIP14-htt от длины поли (Q) в htt, in vitro проводили анализы связывания с использованием иммобилизованного слитого белка HIP14-GST и экстрактов из клеток HEK293T, сверхэкспрессирующих N-концевую область htt, содержащего либо 15, либо 128 поли (Q) остатков. GST-HIP14, связанный с гранулами глутатион-сефарозы, последовательно осаждает больше дикого типа, чем мутантный htt ( n = 2). Ни дикого типа, ни мутантный хантингтин не осаждали одним GST (рис.2Б). Это открытие подтверждает, что физическое взаимодействие между HIP14 и htt уменьшается с увеличением длины поли (Q).

Чтобы оценить, взаимодействуют ли htt и HIP14 in vivo , мы выполнили эксперименты по коиммунопреципитации из клеток, сверхэкспрессирующих как htt, так и HIP14. Мы обнаружили, что лизаты из клеток, экспрессирующих HIP14 и htt (pCI1955-15) дикого типа, иммунопреципитировали больше HIP14 ( n = 2), чем лизаты из клеток, содержащих HIP14 и мутантный htt (pCI1955-128), что доказывает, что HIP14 и htt взаимодействуют in vivo , и что это взаимодействие модулируется длиной поли (Q) тракта в htt.

HIP14 не токсичен для клеток 293T

Было показано, что взаимодействие между HIP14 и мутантным htt снижается, что может приводить к избытку несвязанного HIP14 в нейронах пациентов, вызывая токсичность. Аналогичное открытие было показано для HIP1, при этом токсичность опосредована его эффекторным доменом смерти (DED) (17,18). Мы изучили эффект сверхэкспрессии HIP14 в временно трансфицированных клетках 293T. Измерение токсичности этих клеток с использованием модифицированного анализа МТТ показало, что при сверхэкспрессии HIP14 не был значительно более токсичным ( P > 0.05), чем контрольный вектор, экспрессирующий LacZ (данные не показаны).

HIP14 генерирует два транскрипта в различных тканях

Для определения экспрессии транскриптов HIP14 был проведен нозерн-блоттинг (фиг. 3), выявивший присутствие двух транскриптов размером ~ 9 и 6 т.п.н. в различных тканях. Оба транскрипта демонстрируют сходный паттерн экспрессии, хотя транскрипт размером 6 т.п.н. показал гораздо более высокую экспрессию по сравнению с транскриптом 9 т.п.н.Оба транскрипта экспрессировались во всех исследованных тканях, причем наибольшая экспрессия транскрипта размером 6 т.п.н. происходила в головном мозге.

HIP14 экспрессируется на высшем уровне в головном мозге

Анализ

Вестерн-блоттинг на ткани человека обнаружил единственную иммунореактивную полосу при 70 кДа во всех областях мозга. Предварительная инкубация антитела против HIP14 с антигенным пептидом полностью удаляла полосу (данные не показаны). Экспрессия HIP14 наиболее высока в коре, мозжечке, затылочной доле и хвостатом отделе, а наименьшая — в спинном мозге (рис.4А). В периферических тканях человека белок HIP14 был обнаружен в семенниках, поджелудочной железе, сердце и почках, при этом не было обнаружено экспрессии в печени и легких (рис. 4B). В тканях мышей HIP14 был обнаружен в сердце, поджелудочной железе, почках, семенниках, печени и головном мозге с наибольшей экспрессией в головном мозге и отсутствием в легких (рис. 4С). Следовательно, паттерн экспрессии HIP14 подобен в тканях мыши и человека.

Поскольку HD характеризуется гибелью клеток в полосатом теле и коре головного мозга, мы дополнительно охарактеризовали локализацию HIP14 в срезах мозга мышей.Иммуногистохимический анализ HIP14 в сочетании с нейрональными и глиальными маркерами показал, что HIP14 локализован в перинуклеарной области нейронов коры (рис. 5J), полосатого тела (рис. 5K) и гиппокампа (рис. 5L), но не глиальных клеток (данные не указаны). показано). Иммунореакции HIP14 в ядрах не обнаружено. HIP14 также был обнаружен во множестве других областей мозга, включая мозжечок, ствол мозга и таламус. Не наблюдали окрашивания в контрольных срезах, когда первичное антитело не вводили или в присутствии блокирующего антигена (данные не показаны).

htt и HIP14 совместно локализуются в нейронах со средними шипами стриатума

Чтобы определить локализацию HIP14 и его совместную локализацию с htt в клетках полосатого тела, мы выполнили совместное окрашивание htt и HIP14 в срезах мозга мышей. Как показано на фиг. 6, htt (фиг. 6A, зеленый) и HIP14 (фиг. 6B, красный) показали частичное перекрывающееся окрашивание (фиг. 6C, желтый) в цитоплазматической и перинуклеарной областях клеток полосатого тела. Эти многочисленные клетки среднего размера в полосатом теле имели морфологию шиповидных нейронов среднего размера.Маломощное изображение окрашивания HIP14 и htt в полосатом теле показано на рисунке 6D, на котором также показано частичное перекрытие при окрашивании HIP14 и htt (желтый).

HIP14 обнаружен в проекционных нейронах, затронутых HD

Специфическим подмножеством нейронов, которые избирательно уязвимы к нейродегенерации при HD, являются нейроны со средними шипами в полосатом теле, которые проецируются на медиальный и латеральный бледный шар (19). Чтобы определить, присутствует ли HIP14 в стриатопаллидных нейронах, которые захватили маркер в бледном шаре и транспортировали его обратно в полосатое тело, мы вводили фторзолото-индикатор в бледный шар мышей.Как видно на рисунке 6E, HIP14 (красный) присутствует в определенной подгруппе нейронов полосатого тела, которые проецируются на бледный шар и поглощают индикатор фторзолота (синий), что окончательно указывает на то, что HIP14 находится в определенной подгруппе нейронов, наиболее пораженных при HD. . Инъекции фторзолота ограничивались бледным шаром, что подтверждается анатомической оценкой места инъекции на иммуногистохимических срезах. Сайты инъекции фторзолота не перекрывались с маркером полосатого тела DARPP-32 (Chemicon) (данные не показаны).

HIP14 локализуется в Гольджи и цитоплазматических пузырьках в нейрональных клетках-предшественниках NT2 и нейронах, происходящих из ES-клеток

В попытке выяснить субклеточную локализацию HIP14 мы оценили его иммунолокализацию в нейрональных клетках NT2 и нейронах, происходящих из ES-клеток. Иммунореактивность HIP14 была локализована в перинуклеарной структуре, подобной Гольджи, и в цитоплазматических пузырьках, как было проанализировано с помощью традиционной и лазерной конфокальной микроскопии. Не было обнаружено перекрытия между HIP14 и маркерами ER кальретикулином и Grp78.С помощью конфокальной микроскопии HIP14 обнаруживает частичную совместную локализацию с цис -маркером Гольджи GM130 (Fig. 5A-C), который участвует в структурном поддержании стека Гольджи и взаимодействует с белком стыковки пузырьков p115 (20). Кроме того, было обнаружено, что HIP14 частично совмещается с маркерами везикул γ-adapin, компонентом комплекса AP-1 (Fig. 5D-F), и клатрином (Fig. 5G-I) в области Гольджи. HIP14 также показал перекрывающееся окрашивание с маркером Гольджи β-COP (данные не показаны).Биохимическое фракционирование коры головного мозга, мозжечка и хвостатого мозга человека с помощью дифференциального центрифугирования показало, что HIP14 был сильно обогащен фракцией мембран (P3) (данные не показаны), аналогично распределению htt и HIP1 (21). Эти исследования иммунолокализации вместе со структурным анализом показали, что HIP14 ассоциирован с Гольджи и мембранами цитоплазматических везикул.

Чтобы окончательно определить локализацию HIP14 в аппарате Гольджи, мы выполнили предварительное встраивание мечения иммунным золотом на срезы ткани мозга мыши с использованием антитела против HIP14.На электронно-микроскопическом уровне большинство частиц иммунозолота было связано с аппаратом Гольджи (рис. 7А). Частицы золота также были обнаружены в покрытых оболочкой везикулах в цитоплазме. Случайное окрашивание было связано с эндоплазматическим ретикулумом. Внутри аппарата Гольджи частицы были связаны с медиальными цистернами и цистернами Гольджи цис- (Рис. 7B). Частицы были также связаны с другими компартментами Гольджи, включая транс, цистерн, TGN и сеть пре-Гольджи.

HIP14 устраняет чувствительный к температуре фенотип и дефекты эндоцитоза

клеток akr1Δ

В S. cerevisiae было продемонстрировано, что Akr1p необходим для жизнеспособности клеток при повышенных температурах. Учитывая, что аминокислотное сходство между HIP14 и Akr1p составляет 41%, мы исследовали, может ли HIP14 спасти зависимую от температуры летальность клеток akr1Δ . AKR1 и akr1Δ дрожжевые клетки трансформировали одним вектором pAD5, pAD5-HIP14 или AKR1-содержащей плазмидой положительного контроля pPB575 (2µ, AKR1, LEU2) (22), наносили штрихами на планшеты SD-leu и инкубировали при 25 ° C (допустимая температура для akr1Δ ячеек) и 37 ° C (ограничительная температура для akr1Δ ячеек).Как видно на Фигуре 8A, клеток akr1Δ , несущих pPB575, хорошо росли при обеих температурах, тогда как клетки, несущие pAD5, были жизнеспособными только при 25 ° C. akr1Δ Клетки , несущие pAD5-HIP14, хорошо росли при 25 ° C и были способны расти более энергично при 37 ° C, чем клетки, несущие pAD5.

Мы определили, может ли HIP14 специфически восстанавливать блок в конститутивном эндоцитозе дрожжевого рецептора феромона Ste3p, наблюдаемого в клетках akr1Δ . Akr1p необходим для конститутивного эндоцитоза Ste3p (15).Ste3p обычно нацелен на плазматическую мембрану, затем подвергается эндоцитозу и транспортируется через везикулярные промежуточные соединения в вакуоль, где он разрушается. В клетках дикого типа Ste3p имеет период полужизни ~ 15 минут, тогда как в клетках akr1Δ этот период полужизни увеличивается более чем в 5 раз (15). Было показано, что более длительный период полужизни Ste3p в клетках akr1Δ является результатом блокирования конститутивного эндоцитоза (15). Мы трансформировали клеток akr1Δ с помощью pAD5, pAD5-HIP14 или pPB575, подвергли эти штаммы блоку синтеза белка, индуцированному циклогексимидом, и удалили образцы в различные моменты времени.Используя антитело Ste3p, мы определили, что деградация Ste3p восстанавливается после экспрессии HIP14 в дрожжах, как можно видеть на Фигуре 8B, демонстрирующей, что HIP14 может функционально восстанавливать дефект эндоцитоза в клетках akr1Δ .

ОБСУЖДЕНИЕ

В этом исследовании мы идентифицировали и охарактеризовали новый взаимодействующий с htt белок, HIP14, который демонстрирует пониженное взаимодействие с мутантным htt. Фрагмент HIP14 длиной 542 п.н. был ранее описан (HYPH) (5) как белок, взаимодействующий с htt, что обеспечивает независимое подтверждение этого взаимодействия.htt широко экспрессируется в центральной нервной системе (23,24). В отличие от htt, который имеет повсеместную экспрессию, HIP14 локализуется преимущественно в головном мозге как людей, так и мышей. В головном мозге он локализован, среди других областей, в средних шиповатых нейронах полосатого тела, месте ранней и заметной патологии при HD.

HIP14 и htt демонстрируют частичную локализацию в средних шипастых нейронах полосатого тела, и, кроме того, они обнаруживаются в нейронах со средними шипами, которые выступают в бледный шар, который является подмножеством нейронов, избирательно уязвимых к нейродегенерации при HD .Более того, HIP14 локализован в аппарате Гольджи и в дискретных цитоплазматических пузырьках. Иммунофлуоресцентная микроскопия показала, что htt также обогащен на мембранах Гольджи и ассоциируется с везикулами, покрытыми и не покрытыми клатрином, в цитоплазме и вдоль плазматических мембран (25). Специфическая клеточная и субклеточная совместная локализация HIP14 и htt обеспечивает дополнительную поддержку функционального взаимодействия между этими двумя белками в живых клетках.

О функции HIP14 ничего не известно.Однако ключи к его нормальному функционированию могут быть получены из идей, полученных при изучении гена у других организмов. Белок HIP14 содержит несколько трансмембранных и анкириновых повторов доменов и имеет значительную гомологию с дрожжевым белком Akr1, который, будучи удаленным, вызывает дефекты эндоцитоза у дрожжей (15). Интересно, что экспрессия белка HIP14 в дрожжевых клетках akr1 Δ восстанавливает их эндоцитарную функцию. Эта функциональная комплементация с помощью HIP14, наряду с его сильным сходством последовательностей с Akr1p, обеспечивает доказательство того, что Akr1p является дрожжевым гомологом HIP14, и дает ключ к разгадке роли HIP14 во внутриклеточном перемещении белков.Недавно было показано, что Akr1p играет роль в нацеливании казеинкиназ типа I на плазматическую мембрану, где они участвуют в опосредованном убиквитином эндоцитозе дрожжевых феромонных рецепторов (26). Убиквитин играет центральную роль в ранних эндоцитозных событиях у дрожжей, обеспечивая детерминанту сортировки, которая инициирует захват. Кроме того, было показано, что он играет роль во интернализации некоторых белков млекопитающих (26,27). Убиквитинирование и последующая интернализация и деградация считаются критическим механизмом подавления некоторых рецепторов на плазматических мембранах клеток млекопитающих (28).Так как HIP14 может функционально компенсировать потерю активности Akr1p, он, вероятно, играет такую ​​же роль, как Akr1p, в сортировке или нацеливании на критические белки, участвующие в инициирующих событиях эндоцитоза на плазматической мембране.

Интересно, что HIP14 — не единственный белок, с которым взаимодействует htt, который участвует во внутриклеточном транспорте. Другие htt-взаимодействующие белки, играющие роль во внутриклеточном транспорте, включают α-адаптин, компонент комплекса AP-2, который связывается с клатрином и участвует в эндоцитозе на плазматической мембране (25), и HAP1 (9), который, в свою очередь, связывает к p150 приклеена субъединица динактина (29), белка, участвующего в ретроградном транспорте.HAP1 также непосредственно участвует в регуляции везикулярного транспорта из ранних эндосом в поздний эндоцитарный компартмент (11). Также было показано, что htt связывает HIP1 (21), чьи мутанты по гомологу дрожжей (Sla2p) обнаруживают дефекты в эндоцитозе и организации цитоскелета (30,31). Недавно было показано, что HIP1 связывается с F-актином, клатрином и адаптерным белком 2 (32–35), все из которых являются белками, необходимыми для сборки везикул и организации цитоскелета в клетках млекопитающих, что дает дополнительные доказательства схожести функций между млекопитающими и дрожжами. гомологи во внутриклеточных путях транспорта.Кроме того, htt взаимодействует с Sh4GL3, белком, принадлежащим к семейству белков, содержащих домен Sh4, который играет роль в транспорте синаптических везикул (13). Интересно, что HAP1, HIP1, Sh4GL3 и HIP14 демонстрируют измененные взаимодействия с мутантом htt, подтверждая возможность того, что патогенез HD включает дисфункцию внутриклеточного транспорта в пораженных нейронах. Наше исследование предоставляет дополнительные доказательства роли htt во внутринейрональных транспортных процессах.

Для htt.К ним относятся роли в регуляции транскрипции, внутриклеточного транспорта и регуляции клеточного цикла. Интересно, что почти все партнеры по взаимодействию htt, участвующие в функциях внутриклеточного транспорта и регуляции транскрипции, демонстрируют измененное взаимодействие с htt в присутствии экспансии поли (Q), что подразумевает нарушение этих двух предполагаемых функций htt как способствующих патогенезу в HD. Напротив, htt не обнаруживает измененных взаимодействий с белками, такими как HIP2 и p53, предполагая, что функции htt в контроле клеточного цикла и выживании клеток являются частью его нормальной функции и не вносят непосредственного вклада в патогенез.Выделение и характеристика HIP14 как htt-взаимодействующего белка с измененным взаимодействием в присутствии мутации, вместе с тем фактом, что htt и HIP14 совместно локализуются, и что HIP14 способен восстанавливать дефект эндоцитоза в клетках Akr1Δ , предполагает еще одно звено в функции htt во внутриклеточном транспорте и эндоцитозе. Несмотря на свою важность, это исследование не обеспечивает четкого механизма того, как HIP14-расширенное htt-взаимодействие может способствовать избирательной уязвимости кортикальных и стриатальных нейронов при HD.Однако измененные взаимодействия с HIP14, вызванные мутацией в htt, в дальнейшем вовлекают измененные пути внутринейронального транспорта и эндоцитоза в патологию HD, гипотеза, которая теперь заслуживает формальной оценки.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Скрининг двугибридных дрожжей

N-концевую плазмидную конструкцию htt pGBT9–1955-44 (16) трансформировали в дрожжевой штамм Y190 ( MATa , ura3-52 , his3-200 , ade2-101 , lys2-801 , trp1-901 , leu2-3 , 112 , гал4 Δ, гал80 Δ, cyh r 2 , LYS2 AL — HIS3 TATA HIS3 , URA3 :: GAL1 UAS GAL1 TATA lacZ ).Библиотеку кДНК Matchmaker мозга взрослого человека (Clontech) затем трансформировали в клетки Y190, уже несущие конструкцию pGBT9–1955-44 (36). Трансформанты высевали на синтетическую полную (SC) среду (Trp / Leu / His ) с 25 мм3-аминотриазолом (3-AT) для подавления роста ложных колоний His + . . Были выполнены анализы с фильтром β-галактозидазы, и плазмиды, содержащие кДНК активирующего домена, были выделены путем электропорации бактериального штамма KC8 с лизатом дрожжей (37).Полученные колонии трансформировали в DH5-α для дальнейших манипуляций.

Дрожжевые двугибридные взаимодействия

Штамм дрожжей Y190 был котрансформирован pGAD HIP14 -500, клоном, выделенным в результате скрининга двух гибридных библиотек дрожжей, и pGBT9–1955-15, pGBT9–1955-128 (38) или pGBT9 с использованием модифицированного ацетата лития. протокол трансформации, как описано ранее (36). Анализ хромогенного фильтра β-галактозидазы (16,37) и полуколичественный анализ жидкости с использованием -нитрофенил-β-d-галактопиранозида (ONPG) в качестве субстрата выполняли, как рекомендовано (Clontech).Статистический анализ проводился с использованием критерия множественного сравнения Ньюмана – Кеулса.

In vitro Анализы связывания

Вставка ДНК pGAD HIP14 -500 была повторно клонирована в pGEX4T2 (Pharmacia), выращена и индуцирована 1 мМ IPTG. Осадки клеток ресуспендировали в 5 мл лизирующего буфера [150 мМ NaCl, 50 мМ Tris – HCl (pH 7,5), 0,5% NP40, 2,5 мМ MgCl 2 , 2,5 мМ KCl, 1,5 мМ CaCl 2 и ингибиторе протеаз. коктейль (Boehringer Mannheim)], содержащий 0.5 мг / мл лизоцима, обработали ультразвуком и центрифугировали. Полученный супернатант связывали с гранулами GST-Sepharose 4B (Pharmacia). Для получения htt клетки эмбриональной почки человека (HEK) 293T трансфицировали pCI1955-15 или pCI1955-128 (38). Осадки клеток ресуспендировали в 250 мкл буфера HEPES [10 мМ HEPES (pH 8,3), 1,5 мМ MgCl 2 и коктейль ингибиторов протеазы], гомогенизировали и центрифугировали. 500 мкг белка связывали с шариками и тщательно промывали. Гранулы GST – HIP14 или только GST кипятили в буфере для образцов SDS, разрешение 7.5% полиакриламидных гелей и перенесенных на мембраны из поливинилидендифторида (ПВДФ) (39). Антитело против htt BKP1 (1: 100) (16) использовали для иммунодетекции.

Совместная иммунопреципитация HIP14 с htt

Двадцать пять микролитров на образец гранул сефарозы протеина G (Pharmacia) были промыты четыре раза буфером для лизиса (5 мм HEPES и 1% Triton X-100) и связаны с антителом против htt 2166 (Chemicon) вместе с контроль без антител. Затем шарики промывали и для каждой реакции использовали 100 мкл суспензии.Для экспрессии htt и HIP14 клетки HeLa котрансфицировали HIP14 и htt pCI1955-15 или pCI1955-128 с использованием реагента для трансфекции FuGene 6 (Roche), как указано производителем. Двадцать четыре часа спустя клетки лизировали, к шарикам добавляли 400 мкл лизата (~ 2 мг белка) и инкубировали конец за концом при 4 ° C в течение ночи. Образцы промывали пять раз буфером RIPA [50 мМ Трис (pH 8), 150 мМ NaCl, 0,1% SDS, 1% NP-40 и 0,5% дезоксихолевой кислоты], кипятили в буфере для образцов SDS, разделяли на 7.5% акриламидный гель переносится на PVDF мембрану (Bio-Rad). Вестерн-блоттинг выполняли с использованием поликлонального антитела против HIP14 и проявляли с использованием хемилюминесцентного реагента ECL (Amersham).

клонирование кДНК и идентификация клонов EST

Приблизительно 1 × 10 6 БОЕ из двух библиотек кДНК человеческого мозга (предоставленных докторами Монталом и Джонстоном из Университета Джона Хопкинса) подвергали скринингу с использованием стандартных процедур (40). КДНК HIP14 из pGAD HIP14 -500 использовали в качестве зонда.После вторичного скрининга все положительные клоны были субклонированы в pBluescript SK (-) с использованием процедуры удаления in vivo (41).

Чтобы идентифицировать дополнительные клоны кДНК, мы провели поиск в базе данных EST (dbEST) с помощью программы BLAST (42) в NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Клоны EST 41870 и 838424 были получены от Research Genetics Inc. Вся кодирующая область была собрана в pBluescriptII SK (-).

Секвенирование ДНК и анализ ДНК / аминокислотной последовательности

ДНК

секвенировали с использованием секвенатора ДНК ABI 373A.Последовательность ДНК и транслированные аминокислотные последовательности сравнивали с базами данных последовательностей с использованием BLASTN и BLASTP соответственно (42). Колинеарное выравнивание предсказанных аминокислотных последовательностей было выполнено с использованием Pileup [Wisconsin Package Version 10.0, Genetics Computer Group (GCG), Wisconsin] и отображено с помощью BOXSHADE (http://www.isrec.isb-sib.ch/software/BOX_form .html). Трансмембранные спирали были предсказаны с использованием PSORTII (http://www.genome.ad.jp) и TMpred (http: //www.hgsc.bcm.tmc.edu:8088/search-launcher/launcher.html).

Хромосомное картирование гена

HIP14

Хромосомное картирование гена HIP14 было выполнено с помощью флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) с хромосомами нормальных лимфоцитов человека, окрашенных йодидом пропидия и 4 ‘, 6-диамидин-2-фенилиндол дигидрохлоридом (DAPI) (43). Были идентифицированы два клона HIP14 геномной бактериальной искусственной хромосомы (ВАС) (44), 363B17 и 463M12.Биотинилированные геномные клоны были обнаружены с помощью авидин-флуоресцеинизотиоцианата (FITC). Изображения были получены камерой устройства с термоэлектрическим охлаждением с зарядовой связью (CCD) (Photometrics, Tucson, AZ). Были получены отдельные изображения хромосом с полосами DAPI и хромосом, нацеленных на FITC. Псевдоцветные изображения DAPI и FITC накладывались и объединялись в электронном виде (45).

Токсичность

HIP14 Клетки

HEK293T культивировали и трансфицировали pCIneoHIP14.Токсичность измеряли через 48 часов после трансфекции CaPO 4 с использованием модифицированного анализа МТТ, как описано ранее (46). htt со 128 повторами (1955-128) и вектор, экспрессирующий LacZ, использовали в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

Нозерн-блот анализ

Множественные нозерн-блоты тканей взрослого человека (Clontech) гибридизовали с [α- 32 P] dCTP-меченным HIP14 -500 или кДНК актина человека в растворе для гибридизации ExpressHyb (Clontech) при 68 ° C.Мембраны промывали в строгих условиях (0,1 × SSC, 0,1% SDS, 55 ° C) и подвергали воздействию рентгеновской пленки (X-OMAT, Kodak) при -80 ° C с усиливающими экранами (DuPont).

Образование антител

Создание htt-специфического антитела BKP1 описано в другом месте (16). Для создания поликлонального антитела к HIP14 (HIP14PEP1) был синтезирован пептид, соответствующий аминокислотам 49-60 (RKTHIDDYSTWD), который представляет собой уникальную аминокислотную последовательность, который был соединен с гемоцианином лимфы улитки (KLH) (Pierce) с сукцинимидилом 4- ( N -малеимидометил) циклогексан-1-карбоксилат (Pierce).Самкам новозеландских белых кроликов вводили пептид HIP14 и адъювант Фрейнда. Антитело очищали с использованием стандартных аффинных колонок с тиол-сефарозой (Pharmacia).

Вестерн-блоттинг

Белок из замороженных тканей человека и свежих тканей мыши выделяли, как указано выше, денатурировали в буфере для образцов SDS, загружали на 7,5% акриламидный гель SDS и переносили на мембраны из PVDF. Вестерн-блоттинг проводили с использованием очищенного антитела HIP14PEP1 (1:50), а затем детектировали с использованием усиленной хемилюминесценции (Amersham).Эквивалентную белковую нагрузку оценивали с помощью иммуноблоттинга мембран PVDF с помощью GAPDH (Chemicon).

Иммуноцитохимия в нейрональных клетках-предшественниках NT2 и нейронах, происходящих из ES-клеток

Двойную иммунофлуоресценцию проводили с нейронными клетками NT2 и нейронами, происходящими из ES-клеток. Клетки фиксировали в 4% (мас. / Об.) Параформальдегиде, повышали проницаемость в PBS, содержащем 1% параформальдегида и 0,3% Triton X-100, в течение 5 минут, промывали и инкубировали с антителом против HIP14 в течение ночи при 4 ° C.Срезы инкубировали с моноклональными антителами (mAb), направленными против GM130 (Transduction Laboratories), β-COP (Sigma), тяжелой цепи клатрина (Transduction Laboratories), γ-адаптина (Transduction Laboratories), кальретикулина или Grp78 (StressGen, BC) в фосфате. забуференный физиологический раствор (PBS) и 2% нормальная козья сыворотка в течение 2 часов. Затем слайды инкубировали с козьим антителом против кролика Alexa 488 и / или с козьим антителом против мыши Alexa 568, соответственно (Molecular Probes), контрастировали с пропидиум йодидом или DAPI и помещали в Mowiol (Aldrich).Иммунофлуоресценцию детектировали с помощью лазерного конфокального микроскопа (Biorad) или обычной иммунофлуоресцентной микроскопии. Изображения были получены в цифровом виде с помощью камеры CCD (Princeton Instruments Inc.).

Инъекции Fluorogold

Инъекции ретроградного индикатора флуороголда были выполнены для маркировки популяции проекционных нейронов в полосатом теле, которые первыми дегенерируют при HD (47), и для определения локализации HIP14 в этих нейронах. Индикатор флюорозолота, введенный в бледный шар, ретроградно транспортируется в тело клетки стриатопаллидных нейронов в полосатом теле.Для выполнения инъекций мышей анестезировали ингаляционным изофлуораном и помещали в стереотаксический аппарат, а в месте инъекции выполняли небольшую трепанацию черепа. С помощью пипеток с вытянутым стеклом и микроинжектора наножектора (World Precision Instruments) 20 нл 1% фторсодержащего золота (Fluorochrome Inc.) в dH 2 O медленно вводили (10 нл / мин) в бледный шар (от Bregma: anterior). −2,63 мм, поперечный ± 1,8 мм, глубина 4,33 мм под углом 30 °). Через пять минут после инъекции стеклянную пипетку медленно извлекали и на кожу головы накладывали хирургические швы.Послеоперационный уход за животным проводился в отапливаемой камере перед возвращением в домашнюю клетку. Через 24 ч выживания мышей умерщвляли изофлуораном и перфузировали внутрикардиально 3% параформальдегидом. Головной мозг удаляли и оставляли на 24 часа для фиксации в 3% параформальдегиде. Срезы мозга размером 25 мкм были вырезаны на вибратоме, а затем окрашены на HIP14 и htt (антитело к HD3) (1) с использованием стандартных иммуногистохимических методов. Изображения были получены либо с помощью Zeiss Axioscope, либо с помощью конфокальной системы визуализации Bio-Radiance 2000.

Иммуногистохимический анализ мозга мышей

Для оценки экспрессии HIP14 in vivo мозг взрослых мышей FVB / N обрабатывали либо нейрон-специфическим антителом (NeuN, Chemicon), либо астроглиальным маркером (GFAP, Sigma) и HIP14PEP1. Мышам перфузировали холодным 3% параформальдегидом в 0,1 м PBS, мозг подвергали последующей фиксации и на вибрационном микротоме (Vibratome) вырезали срезы размером 30 мкм. Срезы промывали в 0,1 м PBS с 0.3% Tween-20, блокированный (0,1% PBS с 0,3% Tween-20, 3% цельная козья сыворотка и 5% бычий сывороточный альбумин) и помещенный в первичную антисыворотку против HIP14PEP1 и NeuN или GFAP на 24 часа при 4 ° C. Затем образцы блокировали и инкубировали либо 1: 100 козьих антител против кроличьего CY-3 (молекулярные зонды) с антителом против HIP14, либо 1: 250 козьих антител против мышиных антител Alexa 488 с NeuN или GFAP. Срезы помещали на покрытые желатином предметные стекла, обезвоживали путем серийных промывок этанолом, закрепляли с помощью Fluoromount (Gurr) и анализировали с помощью лазерного конфокального микроскопа (Bio Rad).Цифровые изображения были сняты на камеру CCD (Princeton Instruments Inc.) и преобразованы в двойные фигуры иммунофлуоресценции с использованием программы NIH-Image.

Световой и электронно-микроскопический иммуноцитохимический анализ головного мозга мышей

Мышам перфузировали внутрикардиально 200 мл 3% параформальдегида и 0,15% глутарового альдегида в 0,1 м фосфатном буфере (PB) при pH 7,2 для электронно-микроскопического анализа. Мозг обрабатывали, как описано в другом месте (1,48).Контроль включал отсутствие первичной антисыворотки. После визуализации с помощью DAB некоторые срезы осмифицировали [1% тетроксид осмия (OsO 4 ) в 0,1 м какодилатном буфере], промывали и окрашивали в течение ночи в 2% водном уранилацетате.

Для ультраструктурного анализа использовали сверхмалые вторичные антитела, конъюгированные с коллоидным золотом (Aurion, Wageningen, Нидерланды). После постфиксации 2,5% глутаровым альдегидом частицы золота были усилены с использованием набора для усиления серебра R -gent SE-EM (Aurion).Срезы дополнительно фиксировали 0,5% OsO 4 в 0,1 М PB, дегидратировали в этаноле и пропиленоксиде (1: 1) и плоско заливали в Eponate 12 (Ted Pella, Redding, CA). Ультратонкие срезы (90 нм) вырезали с использованием ультрамикротома Leica Ultracut S и окрашивали 5% водным раствором уранилацетата в течение 5 минут, а затем цитратом свинца в течение 5 минут. Тонкие срезы исследовали с помощью электронного микроскопа HITACHI H-7500. После окрашивания DAB некоторые срезы были помещены для световой микроскопии.

Трансформация HIP14 в

akr1Δ дрожжи

Вся кодирующая область HIP14 была выделена из pBluescript HIP14 и лигирована с pAD5 (2µ, промотор ADh2, LEU2). AKR1 и akr1 Δ дрожжевые клетки были трансформированы pAD5 – HIP14, pPB575 (2µ, LEU2, AKR1) (22) и pAD5. Клетки высевали на SD-leu, выращивали при 25 ° C и дважды очищали штрихом. Случайные колонии отбирали из каждой полосы и инкубировали при 25 ° C и 37 ° C. Через 72 часа наблюдали за ростом и размером колонии.

Анализ стабильности Ste3p

Индивидуальные колонии из трансформантов, указанных выше, инокулировали и выращивали в течение ночи, повторно инокулировали и выращивали до тех пор, пока OD 600 не достигнет 0.8. Добавляли циклогексимид 10 мкг / мл и аликвоту удаляли в «момент времени 0» и другие моменты времени. Белковые экстракты готовили, как описано ранее (15). Десять микролитров образца разделяли на 7,5% акриламидном геле и переносили на мембраны из ПВДФ. Блоты подвергали иммунореагированию против моноклонального антитела против Ste3p и визуализировали с помощью ECL (Pharmacia), как описано ранее (15).

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим Майкла Калчмана за организацию этих исследований, доктора Филипа Хитера за полезные обсуждения на протяжении всей работы, доктора Стивена Шерера за анализ картирования хромосом и доктора Дэна Гитца за руководство по скринингу библиотеки дрожжей.С.Г. — докторант в лаборатории доктора Филипа Хитера. Эта работа финансировалась Канадской сетью генетических заболеваний, Центром молекулярной медицины и терапии (CMMT), Советом медицинских исследований (MRC) Канады, действующим грантом M.R.H., Национальным институтом здравоохранения, грантом NS35255 S.M.H. и C.-A.G., и Американское общество болезни Хантингтона (M.M., C.-A.G., S.M.H. и M.R.H.). М.Р.Х. является заведующим кафедрой исследований Канады.

Рисунок 1. Схематическое изображение белковой структуры человеческого HIP14 (hHIP14), человеческого HIP14L (hHIP14L), Saccharomyces cerevisiae AKR1, S. cerevisiae AKR2 и родственных белков в Caenorhabditis elegereans, Drosophila melanogaster 907 Schizosaccharomyces pombe. Показаны положения пептидной последовательности HIP14PEP1, анкириновых повторов и предсказанных трансмембранных спиралей.

Рисунок 1. Схематическое изображение белковой структуры человеческого HIP14 (hHIP14), человеческого HIP14L (hHIP14L), Saccharomyces cerevisiae AKR1, S.cerevisiae AKR2 и родственные белки Caenorhabditis elegans, Drosophila melanogaster, Mortierella alpina и Schizosaccharomyces pombe. Показаны положения пептидной последовательности HIP14PEP1, анкириновых повторов и предсказанных трансмембранных спиралей.

Рисунок 2. ( A ) Жидкие тесты β-галактозидазы взаимодействия между htt и HIP14. Слитые белки GAL4-BD htt с 15 и 128 повторами CAG (1955-15 и 1955-128) и контроль вектора pGBT9 были котрансформированы pGAD- HIP14 -500.Каждая полоса представляет объединенные результаты 15 независимо проанализированных колоний трех независимых трансформаций. ( B ) Связывание in vitro GST– HIP14 с N-концом htt в экстрактах, приготовленных из клеток эмбриональной почки человека (HEK 293T), трансфицированных htt 1955-15 и 1955-128. Фрагменты htt были иммунодетектированы антителом BKP1. Фрагменты htt в экстрактах были связаны специфически с GST-HIP14, но не только с GST. ( C ) Совместная иммунопреципитация HIP14 с htt in vivo. Клетки, трансфицированные HT дикого типа (pc3-1955-15), иммунопреципитировали больше HIP14, чем клетки, трансфицированные мутантом htt (pc3-1995-128) ( n = 2). htt был иммунопреципитирован антителом против htt 2166, и иммуноблоттинг выполнялся с антителом против HIP14.

Рис. 2. ( A ) Жидкие анализы β-галактозидазы взаимодействия между htt и HIP14. Слитые белки GAL4-BD htt с 15 и 128 повторами CAG (1955-15 и 1955-128) и контроль вектора pGBT9 были котрансформированы pGAD- HIP14 -500.Каждая полоса представляет объединенные результаты 15 независимо проанализированных колоний трех независимых трансформаций. ( B ) Связывание in vitro GST– HIP14 с N-концом htt в экстрактах, приготовленных из клеток эмбриональной почки человека (HEK 293T), трансфицированных htt 1955-15 и 1955-128. Фрагменты htt были иммунодетектированы антителом BKP1. Фрагменты htt в экстрактах были связаны специфически с GST-HIP14, но не только с GST. ( C ) Совместная иммунопреципитация HIP14 с htt in vivo. Клетки, трансфицированные HT дикого типа (pc3-1955-15), иммунопреципитировали больше HIP14, чем клетки, трансфицированные мутантом htt (pc3-1995-128) ( n = 2). htt был иммунопреципитирован антителом против htt 2166, и иммуноблоттинг выполнялся с антителом против HIP14.

Фигура 3. Нозерн-блот-анализ мРНК HIP14 человека. Нозерн-блоты, содержащие 2 мкг мРНК поли (A) + из различных тканей взрослого человека, гибридизовали с клоном кДНК HIP14 -500.Нижняя панель представляет собой тот же блот, гибридизованный с кДНК β-актина человека для подтверждения качества РНК и относительной нагрузки. Маркеры размера РНК показаны слева. HIP14 кодирует основной транскрипт размером 6 т.п.н. и второстепенный транскрипт размером 9 т.п.н. Уровни транскрипта размером 6 т.п.н. являются самыми высокими в мозге, причем самые высокие уровни демонстрирует мозжечок.

Фигура 3. Нозерн-блот-анализ мРНК HIP14 человека. Нозерн-блоты, содержащие 2 мкг мРНК поли (A) + из различных тканей взрослого человека, гибридизовали с клоном кДНК HIP14 -500.Нижняя панель представляет собой тот же блот, гибридизованный с кДНК β-актина человека для подтверждения качества РНК и относительной нагрузки. Маркеры размера РНК показаны слева. HIP14 кодирует основной транскрипт размером 6 т.п.н. и второстепенный транскрипт размером 9 т.п.н. Уровни транскрипта размером 6 т.п.н. являются самыми высокими в мозге, причем самые высокие уровни демонстрирует мозжечок.

Фигура 4. Экспрессия белка HIP14 в ( A ), областях мозга нормального человека, ( B ), нормальных периферических тканях человека и ( C ), тканях мыши.Все анализы вестерн-блоттинга проводили с поликлональным антителом HIP14PEP1, и эквивалентную нагрузку белка оценивали с помощью иммуноокрашивания GAPDH. Уровни HIP14 наиболее высоки в коре головного мозга, хвостатом отделе, мозжечке и затылочной доле в тканях человека. В периферических тканях человека уровни HIP14 наиболее высоки в головном мозге. У мышей распределение HIP14 в периферической ткани по существу аналогично, при этом самые высокие уровни наблюдаются в головном мозге.

Фигура 4. Экспрессия белка HIP14 в ( A ), областях мозга нормального человека, ( B ), нормальных периферических тканях человека и ( C ) тканях мыши.Все анализы вестерн-блоттинга проводили с поликлональным антителом HIP14PEP1, и эквивалентную нагрузку белка оценивали с помощью иммуноокрашивания GAPDH. Уровни HIP14 наиболее высоки в коре головного мозга, хвостатом отделе, мозжечке и затылочной доле в тканях человека. В периферических тканях человека уровни HIP14 наиболее высоки в головном мозге. У мышей распределение HIP14 в периферической ткани по существу аналогично, при этом самые высокие уровни наблюдаются в головном мозге.

Рисунок 5. Иммунолокализация HIP14.( A I ) Типичная нейрональная клетка-предшественник NT2 показана с помощью конфокальной микроскопии. HIP14 визуализировали с использованием антитела HIP14PEP1 с последующей инкубацией с вторичными антителами A, D и G, меченными Alexa 488, зеленого цвета. Экспрессия цис--маркера Гольджи GM130 (B, красный) и маркеры везикул γ-адаптин (E, красный) и клатрин (H, красный) были обнаружены с помощью вторичного антитела, конъюгированного с Alexa 568. Изображения были сняты камерой CCD, наложены и объединены в электронном виде (C, F и I).( J L ) Иммунолокализация HIP14 (красный) с ядерным окрашиванием с помощью mAb neu-N (зеленый) в коре головного мозга мыши (J), полосатом теле (K) и гиппокампе (L).

Рис. 5. Иммунолокализация HIP14. ( A I ) Типичная нейрональная клетка-предшественник NT2 показана с помощью конфокальной микроскопии. HIP14 визуализировали с использованием антитела HIP14PEP1 с последующей инкубацией с вторичными антителами A, D и G, меченными Alexa 488, зеленого цвета. Экспрессия цис--маркера Гольджи GM130 (B, красный) и маркеры везикул γ-адаптин (E, красный) и клатрин (H, красный) были обнаружены с помощью вторичного антитела, конъюгированного с Alexa 568.Изображения были сняты камерой CCD, наложены и объединены в электронном виде (C, F и I). ( J L ) Иммунолокализация HIP14 (красный) с ядерным окрашиванием с помощью mAb neu-N (зеленый) в коре головного мозга мыши (J), полосатом теле (K) и гиппокампе (L).

Рис. 6. Субклеточная локализация htt ( A , зеленый) и HIP14 ( B , красный) в средних шиповатых нейронах полосатого тела. Наблюдается частичное перекрытие htt и HIP14 ( C , желтый).Показано маломощное изображение совместно окрашенного полосатого тела ( D ). HIP14 локализован в средних шиповатых нейронах, которые проецируются в бледный шар ( E ) и специфически затрагиваются при HD. Флюороголд вводили в бледный шар, собирали и транспортировали, и он присутствует в полосатом теле (синий) вместе с HIP14 (красный) в подмножестве стриатопаллидных нейронов.

Рис. 6. Субклеточная локализация htt ( A , зеленый) и HIP14 ( B , красный) в средних шиповатых нейронах полосатого тела.Наблюдается частичное перекрытие htt и HIP14 ( C , желтый). Показано маломощное изображение совместно окрашенного полосатого тела ( D ). HIP14 локализован в средних шиповатых нейронах, которые проецируются в бледный шар ( E ) и специфически затрагиваются при HD. Флюороголд вводили в бледный шар, собирали и транспортировали, и он присутствует в полосатом теле (синий) вместе с HIP14 (красный) в подмножестве стриатопаллидных нейронов.

Рисунок 7. HIP14 — иммунозолото-мечение медиальной части Гольджи. ( A ) Микрофотография мечения иммуноголотом HIP14 в кортикальном нейроне мыши. Частицы иммунозолота в основном связаны со стопками цистерн аппарата Гольджи. Некоторые частицы связаны с покрытыми везикулами в окружающей цитоплазме. В ядре не было видно никаких частиц. ( B ) Большое увеличение аппарата Гольджи со многими частицами иммунозолота, связанными с медиальными цистернами Гольджи, и некоторым окрашиванием, связанным с цистернами цис и транс цистернами.Масштаб: (A) 1 мкм; (B) 160 нм.

Рис. 7. Мечение иммунным золотом HIP14 медиальной части Гольджи. ( A ) Микрофотография мечения иммуноголотом HIP14 в кортикальном нейроне мыши. Частицы иммунозолота в основном связаны со стопками цистерн аппарата Гольджи. Некоторые частицы связаны с покрытыми везикулами в окружающей цитоплазме. В ядре не было видно никаких частиц. ( B ) Большое увеличение аппарата Гольджи со многими частицами иммунозолота, связанными с медиальными цистернами Гольджи, и некоторым окрашиванием, связанным с цистернами цис и транс цистернами.Масштаб: (A) 1 мкм; (B) 160 нм.

Рис. 8. HIP14 участвует в эндоцитозе дрожжей. HIP14 (pAD5 – HIP14), AKR1 (pPB575) и контрольный вектор (pAD5) были трансформированы в клетки akr1Δ , которые проявляют чувствительный к температуре фенотип при удалении AKR1. ( A ) В присутствии либо Akr1p (положительный контроль), либо HIP14 происходит восстановление чувствительного к температуре фенотипа, проявляемого клетками akr1Δ , о чем свидетельствует восстановленный рост дрожжевых колоний.( B ) HIP14 устраняет дефект эндоцитоза Ste3p в клетках akr1Δ , на что указывает более быстрое исчезновение полосы Ste3p в клетках, несущих pAD5-HIP14, по сравнению с pAD5. Клетки akr1Δ , содержащие контрольный вектор (pAD5), HIP14 или AKR1, инкубировали с циклогексимидом для предотвращения синтеза белков. Экспрессию дрожжевого белка Ste3p детектировали иммуноблоттингом. В клетках с контрольным вектором отсутствует эндоцитоз Ste3p и, следовательно, не происходит исчезновения белка Ste3 с течением времени.В клетках, содержащих AKR1 положительного контроля, происходит эндоцитоз, о чем свидетельствует исчезновение белка Ste3. В клетках HIP14 также происходит эндоцитоз, что доказывает, что HIP14 способен устранять дефект эндоцитоза у дрожжей.

Рис. 8. HIP14 участвует в эндоцитозе дрожжей. HIP14 (pAD5 – HIP14), AKR1 (pPB575) и контрольный вектор (pAD5) были трансформированы в клетки akr1Δ , которые проявляют чувствительный к температуре фенотип при удалении AKR1. ( A ) В присутствии либо Akr1p (положительный контроль), либо HIP14 происходит восстановление чувствительного к температуре фенотипа, проявляемого клетками akr1Δ , о чем свидетельствует восстановленный рост дрожжевых колоний.( B ) HIP14 устраняет дефект эндоцитоза Ste3p в клетках akr1Δ , на что указывает более быстрое исчезновение полосы Ste3p в клетках, несущих pAD5-HIP14, по сравнению с pAD5. Клетки akr1Δ , содержащие контрольный вектор (pAD5), HIP14 или AKR1, инкубировали с циклогексимидом для предотвращения синтеза белков. Экспрессию дрожжевого белка Ste3p детектировали иммуноблоттингом. В клетках с контрольным вектором отсутствует эндоцитоз Ste3p и, следовательно, не происходит исчезновения белка Ste3 с течением времени.В клетках, содержащих AKR1 положительного контроля, происходит эндоцитоз, о чем свидетельствует исчезновение белка Ste3. В клетках HIP14 также происходит эндоцитоз, что доказывает, что HIP14 способен устранять дефект эндоцитоза у дрожжей.

Таблица 1.

Попарные сравнения аминокислотных последовательностей HIP14, HIP14RP, AKR1, AKR2 и подобных белков, которые, как предсказано, кодируются генами Caenorhabditis elegans , Drosophila melanogaster , Mortierella pina os и с использованием GAP (GCG)

33 314 IP 57 914 914 914 36 914 914 914 914 914 914 914 914 914 33 — pombe 1

0

0

0 .

33 314 IP 57 914 914 914 36 914 914 914 914 914 914 914 914 914 33 — pombe 9162 9162 парных аминокислотных последовательностей HIP14, HIP14RP, AKR1, AKR2 и подобных белков, которые, как предсказано, кодируются генами Caenorhabditis elegans , Drosophila melanogaster , Mortierella alpina и Schizosaccharomyces pombe

36 с использованием GAP 3 .

33 314 IP 57 914 914 914 36 914 914 914 914 914 914 914 914 914 33 — pombe 1

0

0

0 .

33 314 IP 57 914 914 914 36 914 914 914 914 914 914 914 914 914 33 — pombe Ссылки
. hHIP14 . hHIP14L . Акр1 . Akr2 . C. elegans . D. melanogaster . M. alpina . S. pombe .
Идентификационные данные
hHIP14 48 30 28 27 48 30 27 26 38 32 28
Akr1 41 38 41 27 30 2914 Акр2 38 37 51 25 29 30 28
C.elegans 38 35 38 37 27 26 29
D. melanogaster 32 28
M. alpina 45 41 41 40 37 42 42 39 43 39 39 40 43
Сходства 6
hHIP14 . hHIP14L . Акр1 . Akr2 . C. elegans . Д.melanogaster . M. alpina . S. pombe .
Идентификационные данные
hHIP14 48 30 28 27 48 30 27 26 38 32 28
Akr1 41 38 41 27 30 2914 Акр2 38 37 51 25 29 30 28
C.elegans 38 35 38 37 27 26 29
D. melanogaster 32 28
M. alpina 45 41 41 40 37 42 42 39 43 39 39 40 43
Сходства
hHIP14 . hHIP14L . Акр1 . Akr2 . C. elegans . D. melanogaster . M. alpina . S. pombe .
Идентификационные данные
hHIP14 48 30 28 27 48 30 27 26 38 32 28
Akr1 41 38 41 27 30 2914 Акр2 38 37 51 25 29 30 28
C.elegans 38 35 38 37 27 26 29
D. melanogaster 32 28
M. alpina 45 41 41 40 37 42 42 39 43 39 39 40 43
Сходства 6
hHIP14 . hHIP14L . Акр1 . Akr2 . C. elegans . Д.melanogaster . M. alpina . S. pombe .
Идентификационные данные
hHIP14 48 30 28 27 48 30 27 26 38 32 28
Akr1 41 38 41 27 30 2914 Акр2 38 37 51 25 29 30 28
C.elegans 38 35 38 37 27 26 29
D. melanogaster 32 28
M. alpina 45 41 41 40 37 42 42 39 43 39 39 40 43
Сходства
922 1

Gutekunst, C.A., Levey, A.I., Heilman, C.J., Whaley, W.L., Yi, H., Nash, N.R., Rees, H.D., Madden, J.J. и Hersch, S.M. (

1995

) Идентификация и локализация хантингтина в линиях лимфобластоидных клеток мозга и человека с помощью антител против слитого белка.

Proc. Natl Acad. Sci. США

,

92

,

8710

–8714,2

Троттье, Ю., Девис, Д., Имберт, Г., Сауду, Ф., Ан, И., Лутц, Ю., Вебер, К., Агид, Y., Hirsch, EC и Mandel, JL (

1995

) Белковая клеточная локализация белка болезни Хантингтона и различение нормальной и мутированной формы.

Nat. Genet.

,

10

,

104

–110,3

Бутелл, Дж. М., Томас, П., Нил, Дж. У., Уэстон, В. Дж., Дуче, Дж., Харпер, П.С. и Джонс, A.L. (

1999

) Аберрантные взаимодействия белков-репрессоров транскрипции с продуктом гена болезни Хантингтона, хантингтином.

Hum. Мол. Genet.

,

8

,

1647

–1655,4

Кегель, КБ, Мелони, АР, Йи, Й., Ким, Й.Дж., Дойл, Э., Куиффо, Б.Г., Сапп, Э., Ван, Й., Цинь, ZH, Chen, JD et al. (

2002

) Хантингтин присутствует в ядре, взаимодействует с транскрипционным корепрессорным C-концевым связывающим белком и подавляет транскрипцию.

J. Biol. Chem.

,

277

,

7466

–7476,5

Faber, PW, Barnes, GT, Srinidhi, J., Chen, J., Gusella, JF и MacDonald, ME (

1998

) Хантингтин взаимодействует с семьей WW доменные белки.

Hum. Мол. Genet.

,

7

,

1463

–1474,6

Nucifora, F.C. Мл., Сасаки, М., Питерс, М.Ф., Хуанг, Х., Купер, Дж. К., Ямада, М., Такахаши, Х., Цудзи, С., Тронкосо, Дж., Доусон, В.Л. et al. (

2001

) Вмешательство хантингтина и атрофина-1 в опосредованную CBP транскрипцию, приводящее к клеточной токсичности.

Science

,

291

,

2423

–2428,7

Стеффан, Дж. С., Бодаи, Л., Паллос, Дж., Пельман, М., Маккэмпбелл, А., Апостол, Б.Л., Казанцев, А., Шмидт, Э ., Zhu, YZ, Greenwald, M. et al. (

2001

) Ингибиторы гистондеацетилазы останавливают полиглутамин-зависимую нейродегенерацию у Drosophila .

Nature

,

413

,

739

–743,8

Метцлер, М., Лежандр-Гийемен, В., Ган, Л., Чопра, В., Квок, А., Макферсон, П.С. и Hayden, M.R. (

2001

) HIP1 функционирует в клатрин-опосредованном эндоцитозе посредством связывания с клатрином и адаптерным белком 2.

J. Biol. Chem.

,

276

,

39271

–39276,9

Ли, X.J., Ли, С.Х., Шарп, А.Х., Нуцифора, Ф.С., младший, Шиллинг, Г., Ланахан, А., Уорли, П., Снайдер, С.Х. и Росс, К.А. (

1995

) Связанный с хантингтином белок, обогащенный в головном мозге и влияющий на патологию.

Nature

,

378

,

398

–402.10

Li, S.H., Gutekunst, C.A., Hersch, S.M. и Ли, X.J. (

1998

) Ассоциация изоформ HAP1 с уникальной цитоплазматической структурой.

J. Neurochem.

,

71

,

2178

–2185,11

Ли, Ю., Чин, Л.С., Леви, А.И. и Li, L. (

2002

). Связанный с Хантингтином белок-1 взаимодействует с Hrs и функционирует в эндосомном переносе.

J. Biol. Chem.

,

277

,

28212

–28221,12

Бао, Дж., Шарп, А.Х., Вагстер, М.В., Бехер, М., Шиллинг, Г., Росс, К.А., Доусон, В.Л. и Доусон Т. (

1996

) Экспансия полиглутаминового повтора в хантингтине приводит к аномальным белковым взаимодействиям с участием кальмодулина.

Proc. Natl Acad. Sci. США

,

93

,

5037

–5042,13

Sittler, A., Walter, S., Wedemeyer, N., Hasenbank, R., Scherzinger, E., Eickhoff, H., Bates, GP, Lehrach, H . and Wanker, EE (

1998

) Sh4GL3 связывается с белком экзона 1 хантингтина и способствует образованию полиглн-содержащих белковых агрегатов.

Мол. Ячейка

,

2

,

427

–436,14

Бутелл, Дж. М., Вуд, Дж. Д., Харпер, П.С. and Jones, A.L. (

1998

) Хантингтин взаимодействует с цистатионин-β-синтазой.

Hum. Мол. Genet.

,

7

,

371

–378,15

Givan, S.A. и Sprague G.F., Jr (

1997

) Белок Akr1p, содержащий анкириновые повторы, необходим для эндоцитоза дрожжевых рецепторов феромонов.

Мол. Биол. Ячейка

,

8

,

1317

–1327.16

Kalchman, M.A., Graham, R.K., Xia, G., Koide, H.B., Hodgson, J.G., Graham, K.C., Goldberg, Y.P., Gietz, R.D., Pickart, C.M. и Hayden, M.R. (

1996

) Хантингтин убиквитинирован и взаимодействует со специфическим ферментом, конъюгированным с убиквитином.

J. Biol. Chem

,

271

,

19385

–19394,17

Hackam, AS, Yassa, AS, Singaraja, R., Metzler, M., Gutekunst, CA, Gan, L., Warby, S., Wellington, CL, Vaillancourt , J., Chen, N. et al. (

2000

) Белок 1, взаимодействующий с хантингтином, индуцирует апоптоз через новый эффекторный домен, зависимый от каспаз.

J. Biol. Chem.

,

275

,

41299

–41308.18

Жерве, Ф.Г., Сингараджа, Р., Ксантудакис, С., Гутекунст, Калифорния, Ливитт, Б.Р., Мецлер, М., Хакэм, А.С., Там, Дж., Вайланкур, JP, Houtzager, V. et al. (

2002

) Рекрутирование и активация каспазы-8 взаимодействующим с Хантингтином белком Hip-1 и новым партнером Hippi.

Nat. Cell Biol.

,

4

,

95

–105,19

Li, H., Li, S.H., Yu, Z.X., Shelbourne, P.и Ли, X.J. (

2001

) Дегенерация аксонов, связанная с агрегатами Хантингтина, является ранним патологическим событием у мышей с болезнью Гентингтона.

J. Neurosci.

,

21

,

8473

–8481,20

Накамура, Н., Лоу, М., Левин, Т.П., Рабуй, К. и Уоррен, Г. (

1997

) Белок стыковки везикул p115 связывает GM130, a цис — матричный белок Гольджи, митотически регулируемый.

Ячейка

,

89

,

445

–455.21

Kalchman, MA, Koide, HB, McCutcheon, K., Graham, RK, Nichol, K., Nishiyama, K., Lynn, FC, Kazemi-Esfarjani, P., Wellington, CL, Metzler, M. et al. al. (

1997

) HIP1, человеческий гомолог S. cerevisiae Sla2p, взаимодействует с мембранно-ассоциированным хантингтином в головном мозге.

Nat. Genet.

,

16

,

44

–53,22

Kao, LR, Peterson, J., Ji, R., Bender, L. и Bender, A. (

1996

) Взаимодействие между белком Akr1p, содержащим анкириновые повторы. и путь ответа феромона в Saccharomyces cerevisiae .

Мол. Cell Biol.

,

16

,

168

–178,23

Nance, MA (

1997

) Клинические аспекты повторных заболеваний CAG.

Brain Pathol.

,

7

,

881

–900,24

Росс, C.A. (

1995

) Когда больше значит меньше: патогенез нейродегенеративных заболеваний с глютаминовыми повторами.

Neuron

,

15

,

493

–496,25

Velier, J., Kim, M., Schwarz, C., Kim, T.-W., Sapp, E., Chase, K., Aronin, N .и DiFiglia, M. (

1998

) Хантингтины дикого типа и мутантные участвуют в переносе пузырьков секреторным и эндоцитарным путями.

Exp. Neurol.

,

152

,

34

–40,26

Фенг, Ю. и Дэвис, Н.Г. (

2000

) Akr1p и казеинкиназы типа I действуют до стадии убиквитинирования эндоцитоза дрожжей: Akr1p необходим для локализации киназы на плазматической мембране.

Мол. Cell Biol.

,

20

,

5350

–5359.27

Bonifacino, J.S. и Вайсман А. (

1998

) Убиквитин и контроль судьбы белков в секреторных и эндоцитарных путях.

Annu. Rev. Cell Dev. Биол.

,

14

,

19

–57,28

Hicke, L. (

1999

) Принятие убиквитина: отключение рецепторов, транспортеров и каналов на клеточной поверхности.

Trends Cell Biol.

,

9

,

107

–112,29

Энгелендер, С., Шарп, А.Х., Коломер, В., Токито, М.К., Ланахан, А., Уорли, П., Хольцбаур, Э.Л.Ф. и Росс, К.А. (

1997

) Связанный с гентингтином белок 1 (HAP1) взаимодействует с субъединицей динактина p150 , склеенной .

Hum. Мол. Genet.

,

6

,

2205

–2212.30

Виейра А.В., Ламаз К. и Шмид С.Л. (

1996

) Контроль передачи сигналов рецептора EGF посредством клатрин-опосредованного эндоцитоза.

Science

,

274

,

2086

–2089,31

Wesp, A., Hicke, L., Palecek, J., Lombardi, R., Aust, T., Munn, AL и Riezman, H. (

1997

) End4p / Sla2p взаимодействует с актин-ассоциированными белками для эндоцитоза в Saccharomyces cerevisiae. .

Мол. Биол. Ячейка

,

8

,

2291

–2306,32

Лежандр-Гийемен, В., Мецлер, М., Шарбонно, М., Ган, Л., Чопра, В., Фили, Дж., Хайден, М. Р. и Макферсон , PS (

2002

) HIP1 и HIP12 демонстрируют дифференциальное связывание с F-актином, AP2 и клатрином.Идентификация нового взаимодействия с легкой цепью клатрина.

J. Biol. Chem.

,

277

,

19897

–19904,33

Рао, Д.С., Чанг, Дж.К., Кумар, П.Д., Мизуками, И., Смитсон, Г.М., Брэдли, С.В., Парлоу, А.Ф. и Росс, Т.С. (

2001

) Белок 1, взаимодействующий с хантингтином, представляет собой белок, связывающий клатриновую оболочку, необходимый для дифференцировки поздних сперматогенных предшественников.

Мол. Cell Biol.

,

21

,

7796

–7806,34

Мишра, С.К., Агостинелли, Н.Р., Бретт, Т.Дж., Мизуками, И., Росс, Т.С. и Traub, L.M. (

2001

) Сайты связывания клатрина и AP-2 в HIP1 раскрывают общую сборочную роль для дополнительных белков эндоцитов.

J. Biol. Chem.

,

276

,

46230

–46236,35

Вельтер, С., Шерзингер, Э., Хасенбанк, Р., Нордхофф, Э., Лурц, Р., Гелер, Х., Гаусс, К., Сатхасивам, К. ., Bates, GP, Lehrach, H. и Wanker, EE (

2001

). Взаимодействующий с хантингтином белок HIP1 представляет собой клатрин и α-адаптин-связывающий белок, участвующий в рецептор-опосредованном эндоцитозе.

Hum. Мол. Genet.

,

10

,

1807

–1817,36

Gietz, R.D. and Woods, R.A. (

1998

) Трансформация дрожжей методом ацетата лития / одноцепочечной ДНК-носителя / ПЭГ. В Брауне, A.J.P. и Tuite, M.F. (eds),

Методы микробиологии.

Academic Press, Нью-Йорк,

26

,

18

–26,37

Гитц, Р.Д., Триггс-Рейн, Б., Роббинс, А., Грэм, К. и Вудс, Р.А. (

1997

) Идентификация белков, которые взаимодействуют с интересующим белком: приложения двухгибридной системы дрожжей.

Мол. Cell Biochem.

,

172

,

67

–79,38

Веллингтон, Калифорния, Эллерби, Л.М., Хакам, А.С., Марголис, Р.Л., Трифиро, Массачусетс, Сингараджа, Р., Маккатчеон, К., Салвесен, Г.С., Пропп, СС, Bromm, M. et al. (

1998

) Расщепление каспазой продуктов генов, связанных с нарушениями триплетной экспансии, генерирует усеченные фрагменты, содержащие полиглутаминовый тракт.

J. Biol. Chem.

,

273

,

9158

–9167,39

Towbin, H., Staehelin, T. и Gordon, J. (

1979

) Электрофоретический перенос белков из полиакриламидных гелей на нитроцеллюлозные листы: процедура и некоторые применения.

Proc. Natl Acad. Sci. США

,

76

,

4350

–4354,40

Сэмбрук, Дж., Фрич, Э. Ф. и Маниатис, Т. (

1989

)

Молекулярное клонирование: лабораторное руководство.

Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк, 41

Шорт, Дж. М., Фернандес, Дж. М., Зорге, Дж.A. и Huse, W.D. (

1988

) Lambda ZAP: вектор экспрессии лямбда бактериофага с in vivo и свойствами вырезания.

Nucleic Acids Res.

,

16

,

7583

–7600,42

Альтшул, С.Ф., Мэдден, Т.Л., Шаффер, А.А., Чжан, Дж., Чжан, З., Миллер, В. и Липман, Д.Дж. (

1997

) Gapped BLAST и PSI – BLAST: новое поколение программ поиска в базе данных белков.

Nucleic Acids Res.

,

25

,

3389

–3402.43

Лихтер, П., Танг, С.Дж., Колл, К., Хермансон, Г., Эванс, Г.А., Хаусман, Д. и Уорд, округ Колумбия (

1990

) Картирование хромосомы человека 11 с высоким разрешением по в situ гибридизация с космидными клонами.

Science

,

247

,

64

–69,44

Шизуя, Х., Биррен, Б., Ким, У. Дж., Мансино, В., Слепак, Т., Тачиири, Ю. и Саймон, М. (

1992

) Клонирование и стабильное поддержание фрагментов ДНК человека длиной 300 тыс. Пар оснований в Escherichia coli с использованием вектора на основе F-фактора.

Proc. Natl Acad. Sci. США

,

89

,

8794

–8797,45

Бойл, А.Л., Фелтквит, Д.М., Дракополи, Северная Каролина, Хаусман, Д. и Ward, D.C. (

1992

) Быстрое физическое картирование клонированной ДНК на полосчатых хромосомах мыши с помощью флуоресценции in situ гибридизации.

Genomics

,

12

,

106

–115,46

Hackam, AS, Singaraja, R., Wellington, CL, Metzler, M., McCutcheon, K., Zhang, T., Kalchman, M. и Hayden, M .R. (

1998

) Влияние размера белка хантингтина на ядерную локализацию и клеточную токсичность.

J. Cell Biol.

,

141

,

1097

–1105,47

Райнер, А., Альбин, Р.Л., Андерсон, К.Д., Д’Амато, К.Дж., Пенни, Дж. Б. и Янг, А. Б. (

1988

) Дифференциальная потеря проекционных нейронов полосатого тела при болезни Хантингтона.

Proc. Natl Acad. Sci. США

,

85

,

5733

–5737,48

Gutekunst, C.A., Li, S.H., Йи, Х., Ферранте, Р.Дж., Ли, X.J. и Hersch, S.M. (

1998

) Клеточная и субклеточная локализация хантинтин-ассоциированного белка 1 (HAP1): сравнение с хантингтином у крысы и человека.

J. Neurosci.

,

18

,

7674

–7686.

Montale Roses Musk Eau de Parfum | Парфюмированная вода Montale Roses Musk

от Bloomingdale | Bloomingdale’s | Полная информация с фото и видео

Парфюмированная вода Montale Roses Musk | Блумингдейл

Купите парфюмированную воду Roses Musk Eau de Parfum в магазине Bloomingdales.com. КЛЮЧЕВЫЕ НОТЫ: — Верхние ноты: Роза — Средние ноты: Жасмин, Роза — Базовые ноты: Серая амбра, Мускус СЕМЬЯ АРОМАТОВ: Цветочные О … Посмотреть все · Коляски · Автокресла и середина …

Вид

Самые популярные

FM713 Pure Royal Parfum ~ Вдохновленный Montale — Roses Musk …

FM713 Pure Royal Parfum ~ Вдохновленный Montale — Roses Musk. 1,50 — 26,50 фунтов стерлингов. Если вам нравится Montale — Roses Musk, он вам обязательно понравится! … База: древесные ноты, мускус, амбра… Последующий уход и инструменты 45; Освежитель автомобилей 2; Клиренс 33; Подарочные пакеты …

Вид

Розы | Магазин Roses в Vans

333 предмета … Найдите розы в Vans. Покупайте розы, популярные стили обуви, одежду, аксессуары и многое другое!

Вид

видов роз — 3 розы, необходимые каждому саду

Что вы должны знать о различных типах роз для вашего сада Каждый элемент на этой странице был выбран редактором House Beautiful.Мы можем получать комиссию за некоторые товары, которые вы решите купить. Что вы должны знать о различ …

Вид

Как выращивать розы — Выращивание роз

Розы очень просты в выращивании и устойчивы к большинству условий.Узнайте, когда сажать розы, как сажать розы, а когда обрезать розы. Мы получаем комиссию за товары, приобретенные по ссылкам в этой статье. С правильным автомобилем …

Вид

Что означают черные розы и другие факты о розах

Что означают черные розы? Узнайте интересные факты о розах, от того, что легче всего вырастить, до того, какое отношение они имеют к розарию.Некоторые из наших фактов о розах будут интересны широкой аудитории. Например, как человек, который …

Вид

Все, что вам нужно знать об Илоне Маске за минуту

Илон Маск стремится разрабатывать оборудование нашего будущего. Tesla, Solar City, Hyperloop, Open AI, SpaceX: вот кто за всем этим стоит. Отмеченная наградами команда журналистов, дизайнеров и видеооператоров, рассказывающих истории бренда с помощью Fast Compa …

Вид

Белый мускус | Магазин Body Shop®

Стильно очищайте и увлажняйте с помощью нашего геля для душа, лосьона для тела и пудры или используйте парфюмерное масло с белым мускусом для создания фирменного аромата. Также есть …

Вид

Как познакомились Илон Маск и Граймс?

Илон Маск, мультимиллионер до 30 лет, известен своими эксцентричными хобби и предпринимательскими начинаниями.Родившийся в Южной Африке, гигант Tesla Motors переехал в Соединенные Штаты в 1992 году. Он стал очень успешным после запуска в …

Вид

Инсайдерские секреты о миллиардере Илоне Маске

С момента создания Zip2 Corporation в 1990-х годах Илон Маск сделал себе имя лидера в мире технологий. Сейчас он занимает пост генерального директора Tesla и участвует в бесчисленном множестве других успешных проектов, в том числе в космической сфере…

Вид

5 шагов к созданию презентаций, подобных Илону Маску | Inc.com

Основатель Tesla и SpaceX умудряется радовать публику после каждой выдвинутой им идеи. Секрет всего сводится к этим простым шагам. Крайний срок досрочной оценки самых быстрорастущих частных компаний в 2021 году: 26 марта Отличный шаг — …

Вид

Наиболее связанные ключи

Путеводитель по международному аэропорту Дубая 2018 и копия DXB Airport

Связывание рецептора глутамата у насекомых и млекопитающих

  • 1.

    Hayashi, T., 1953. Keio J. Med. 3: 183–192.

    Google Scholar

  • 2.

    Krnjevic, K. & Phillis, J. W., 1963. J. Physiol. (Лондон) 165: 274–304.

    Google Scholar

  • 3.

    Curtis, DR, 1979. Глутаминовая кислота: достижения в биохимии и физиологии (Filer, LJ, Garatini, S., Kare, MR, Reynolds, WA & Wurtman, RJ, ред.) Стр. 163–175 , Raven Press, Нью-Йорк.

  • 4.

    Usherwood, P. N. R., 1978. Adv. Комп. Physiol. Biochem. 7: 227–309.

    PubMed Google Scholar

  • 5.

    Дивак И., Фоннум Ф. и Сторм-Матисен Дж., 1977. Nature, 266: 377–378.

    PubMed Google Scholar

  • 6.

    МакГир Э. Г. и МакГир П. Л., 1976. Nature, 263: 517–519.

    PubMed Google Scholar

  • 7.

    Хадсон, Д. Б., Валкана, Т., Бин, Г., Тимирас, П. С., 1976. Neurochem. Res. 1: 83–92.

    Google Scholar

  • 8.

    Сторм-Матисен, Дж., 1977. Prog. Neurobiol. 8: 119–181.

    PubMed Google Scholar

  • 9.

    Керкут, Г. А., Шапира, А., Уокер, Р. Дж., 1965. Comp. Biochem. Physiol. 16: 37–48.

    PubMed Google Scholar

  • 10.

    Usherwood, P. N. R. & Machili, P., 1966. Nature 210: 633–636.

    Google Scholar

  • 11.

    Usherwood, P. N. R. & Machili, P., 1968. J. Exp. Биол. 49: 341–361.

    Google Scholar

  • 12.

    Беранек Р. и Миллер П. Л., 1968. J. Exp. Биол. 49: 83–93.

    Google Scholar

  • 13.

    Анвил Р.& Usherwood, P. N. R., 1976. J. Physiol. (Лондон) 254: 46–47.

    Google Scholar

  • 14.

    Андерсон, К. Р., Калл-Кэнди, С. Г. и Миледи, Р., 1976. Nature, 261: 151–153.

    PubMed Google Scholar

  • 15.

    Usherwood, P. N. R. (ed.), 1975. Insect Muscle, Academic Press, London.

    Google Scholar

  • 16.

    Лант, Г. Г., 1975. Биохимия и функции насекомых (Candy, D. J. & Kilby, B.A. eds.), Стр. 285–306, Chapman and Hall, London.

  • 17.

    Филбин М., Лант Г.Г. и Доннеллан Дж.Ф., 1980. Рецепторы нейротрансмиттеров гормонов и феромонов у насекомых (Sattelle, DB, Hall, LM & Hildebrand, JG, eds.) Стр. 153–160 , Эльзевир / Северная Голландия, Амстердам.

  • 18.

    Heidmann, T., & Changeux, J.-P., 1978. Annu. Rev. Biochem. 47: 317–357.

    PubMed Google Scholar

  • 19.

    Barnard, E. A., Dolly, J. O., Lang, B., Lo, M. & Shorr, R. G., 1979. Adv. Цитофармакол. 3: 409–435.

    PubMed Google Scholar

  • 20.

    Ямамура, Х. И., Энна, С. Дж. И Кухар, М. Дж. (Ред.), 1978. Связывание рецептора нейротрансмиттера, Raven Press, New York.

    Google Scholar

  • 21.

    Куатрекасас П. и Холленбург М. Д., 1975. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 62: 31–41.

    PubMed Google Scholar

  • 22.

    Беннетт, Дж. П., 1978. Связывание рецептора нейротрансмиттера (Ямамура, Х. Л., Энна, С. Дж. И Кухар, М. Дж., Ред.), Стр. 57–90, Raven Press, New York.

  • 23.

    Робертс П. Дж., 1974. Nature, 252: 399–401.

    PubMed Google Scholar

  • 24.

    Михаэлис, Э. К., Михаэлис, М. Л., Боярский, Л. Л., 1974. Biochim. Биофиз. Acta, 367: 338–348.

    PubMed Google Scholar

  • 25.

    Богдански Д. Ф., Тассари А. Х. и Броди Б. Б., 1970. Biochim. Биофиз. Acta, 219: 189–199.

    PubMed Google Scholar

  • 26.

    Логан У. Дж. И Снайдер С. Х., 1971. Nature, 234: 297–299.

    Google Scholar

  • 27.

    Балкар В. Дж. И Джонсон Г. А. Р., 1972. J. Neurochem. 19: 2657–2666.

    PubMed Google Scholar

  • 28.

    Фостер, А. К. и Робертс, П. Дж., 1978. J. Neurochem. 31: 1467–1477.

    PubMed Google Scholar

  • 29.

    Саймон Дж. Р., Контрера Дж. Ф. и Кухар М. Дж., 1976. J. Neurochem. 26: 141–147.

    PubMed Google Scholar

  • 30.

    Шариф, Н. А. и Робертс, П. Дж., 1980. J. Neurochem. 34: 779–784.

    PubMed Google Scholar

  • 31.

    Робертс П. Дж., 1981. Глутамат: передатчик в центральной нервной системе (Робертс П. Дж., Сторм-Мэтисен, Дж. И Джонстон, Г. А. Р., ред.) Стр. 35–54. Джон Вили и сыновья, Лондон.

  • 32.

    Михаэлис, Э. К., Граббс, Р. Д., Белье, Р. М., Михаэлис, М. Л., 1981. Proc. Nat. Акад. Sci. НАС.A.

  • 33.

    Sharif, N. A. & Roberts, P. J., 1980. Brain Res. 194: 594–597.

    PubMed Google Scholar

  • 34.

    Baudry, M. & Lynch, G., 1979. Eur. J. Pharmacol. 57: 283–285.

    PubMed Google Scholar

  • 35.

    Бодри М. и Линч Г., 1981. J. Neurochem. 26: 811–820.

    Google Scholar

  • 36.

    Baudry, M. & Lynch, G., 1980. Proc. Natl. Акад. Sci. USA 77: 2298–2304.

    PubMed Google Scholar

  • 37.

    Бодри М., Оливер М., Крегер Р., Вейраско А. и Линч Г., 1980. Life Sci. 27: 325–330.

    PubMed Google Scholar

  • 38.

    Бодри М. и Линч Г., 1979. Nature, 232: 748–750.

    Google Scholar

  • 39.

    Бизьер К., Томпсон Х. и Койл Дж. Т., 1980. Brain Res. 183: 421–433.

    PubMed Google Scholar

  • 40.

    Винсент С. Р. и МакГир Э. Г., 1980. Brain Res. 184: 99–108.

    PubMed Google Scholar

  • 41.

    Head, R. A., Tunnicliff, G., Matheson, G. K., 1980. Can. J. Biochem. 58: 534–538.

    PubMed Google Scholar

  • 42.

    Сандерсон К. и Мерфи С., 1980. Dev. Neurosci, 9: 233–234.

    Google Scholar

  • 43.

    De Barry, J., Vincendon, G. & Gombos, G., 1980. FEBS Letts. 109: 175–179.

    Google Scholar

  • 44.

    Михаэлис, Э. К., 1975. Biochem. Биофиз. Res. Comm. 65: 1004–1012.

    PubMed Google Scholar

  • 45.

    Линдстром Дж., Анхольт Р., Эйнарсон Б., Энгель А., Осаме М. и Монталь М., 1980. J. Biol. Chem. 255: 8340–8350.

    PubMed Google Scholar

  • 46.

    Wu, W. C. S. & Raftery, M. A., 1981. Biochemistry, 20: 694–701.

    PubMed Google Scholar

  • 47.

    Граббс Р. Д. и Михаэлис Е. К., 1979. Soc. Neurosci. Abst. 5: 304

    Google Scholar

  • 48.

    Кузнецов В. И., Могилянский Д. Н., 1975. Stud. Биофиз. 49: 61–66.

    Google Scholar

  • 49.

    Коломыткин О.В., Кузнецов В.И., Ермишкин Л.Н., 1979. Депонирован док. ВИНИТИ 1672–1679.

  • 50.

    Коломыткин О.В., Кузнецов В.И., Акоев И.Г., 1979. Ж. Биол. Хим. 1979 г. 5F 46.

  • 51.

    De Robertis, E., 1975. Synaptic Receptors, Marcel Dekker, New York.

    Google Scholar

  • 52.

    Левинсон С. Р. и Кейнс Р. Д., 1972. Biochim. Биофиз. Acta. 288: 241–247.

    PubMed Google Scholar

  • 53.

    Доннеллан Дж. Ф., еврейка П. Дж. И Кеттелл К. Дж., 1975. J. Neurochem. 25: 623–629.

    PubMed Google Scholar

  • 54.

    Тейлор Р.Ф., 1978.J. Neurochem, 31: 1183–1198.

    PubMed Google Scholar

  • 55.

    De Robertis, E. & Fiszer de Plazas, S., 1976. J. Neurochem. 26: 1237–1243.

    PubMed Google Scholar

  • 56.

    Lunt, G. G., 1973. Comp. Gen. Pharmacol. 4: 75–79.

    Google Scholar

  • 57.

    Джеймс, Р. У., Лант, Г. Г. и Доннеллан, Дж.F., 1977. Insect Biochem. 7: 247–255.

    Google Scholar

  • 58.

    Джеймс Р. У., Лант Г. Дж. И Доннеллан Дж. Ф., 1974. Abst. Commun. 9-е Мтг. Кормили. Europ. Biochem. Soc. Венгрия. п. 258.

  • 59.

    Fiszer de Plazas, S., De Robertis, E. & Lunt, G.G., 1977. Gen. Pharmac. 8: 133–137.

    Google Scholar

  • 60.

    Fiszer de Plazas, S. & De Robertis, E., 1973. FEBS Letts. 33: 45–48.

    Google Scholar

  • 61.

    Fiszer de Plazas, S. & De Robertis, E., 1974. J. Neurochem. 23: 1115–1120.

    PubMed Google Scholar

  • 62.

    Джеймс Р. В., Лант Г. Г. и Доннеллан Дж. Ф., 1977. Biochem. Soc. Пер. 5: 170–172.

    PubMed Google Scholar

  • 63.

    Брайли П. А., Филбин М. Т., Лант Г. Г. и Доннеллан Дж. Ф., 1980. В нейробиологии насекомых и действии пестицидов, стр. 177–184, Soc. Chem. Промышленность, Лондон.

    Google Scholar

  • 64.

    Клворт, Дж. Ф., Робинсон, Н. Л. и Ашервуд, П. Н. Р., 1980. В нейробиологии насекомых и действии пестицидов, стр. 280–281, Soc. Chem. Промышленность, Лондон.

    Google Scholar

  • 65.

    Калл-Кэнди, С. Г. и Ашервуд, П. Н. Р., 1973. Nature, 246: 62–64.

    Google Scholar

  • 66.

    Калл-Кэнди, С.Г. и Ашервуд, П.Н.Р., 1976. J. Physiol. (Лондон) 255: 449–464.

    Google Scholar

  • 67.

    Калл-Кэнди, С. Г. и Ашервуд, П. Н. Р., 1974. Neuropharmacol 13: 455–461.

    Google Scholar

  • 68.

    Крогсгаард-Ларсен, П., Оноре, Т., Хансен, Дж. Дж., Кертис, Д. Р., Лодж, Д., 1980. Nature, 284: 64–66.

    PubMed Google Scholar

  • 69.

    Крогсгаард-Ларсен, П., Оноре, Т., Хансен, Дж. Дж., Кертис, Д. Р. и Лодж, Д., 1981. In Glutamate as a Neurotransmitter (Di Chiara, G. & Gessa, GL, ред. .) стр. 285–294, Raven Press, Нью-Йорк.

  • 70.

    Оноре, Т., Лауридсен, Дж. И Крогсгаард-Ларсен, П., 1981. J. Neurochem. 36: 1302–1304.

    PubMed Google Scholar

  • 71.

    Калл-Кэнди, С. Г., Доннеллан, Дж. Ф., Джеймс, Р. У. и Лант, Г. Г., 1976. 262: 408–409.

  • 72.

    Bioulac, B., De Tinguy-Moreaud, E., Vincent, J.-D. & Neuzil, E., 1979. Gen. Pharmacol. 10: 121–125.

    PubMed Google Scholar

  • 73.

    Уоткинс, Дж. К., Кертис, Д.R. & Brand, S. S., 1977. J. Pharm. Pharmacol. 29: 324.

    PubMed Google Scholar

  • 74.

    Дэвис, Дж., Эванс, Р. Х., Фрэнсис, А. А., Джонс, А. В. и Уоткинс, Дж. К., 1980. В нейротрансмиттерах и их рецепторах (Littauer, UZ, Dudai, Y., Silman, I., Teichberg , VI и Vogel, Z., ред.), Стр. 333–347, John Wiley and Sons Ltd., Лондон.

  • 75.

    Johnston, G.A.R., 1979. In Glutamic Acid: Advances in Biochemistry and Physiology (Filer, L.J., et al., Eds.), Стр. 177–185, Raven Press, New York.

  • 76.

    Snodgrass, S. R., 1979. Soc. Neurosci. Abst. 5: 572.

    Google Scholar

  • 77.

    Вальтер, К., 1980. В нейробиологии насекомых и действии пестицидов, стр. 153–160, Soc. Chem. Промышленность, Лондон.

    Google Scholar

  • 78.

    Мэй, Т. Э. и Пик, Т., 1979. J. Insect. Physiol. 25: 685–691.

    PubMed Google Scholar

  • 79.

    Peik, T., Mantel, P. & Jas, 1980. J. Insect Physiol. 26: 345–349.

    Google Scholar

  • Часто задаваемые вопросы — Montale Parfums

    1. Как выбрать духи?

    Духи — это больше, чем запах, это обонятельная подпись.
    Выбор духов — это индивидуальный подход, основанный на ваших привычках, вкусах или обонятельной памяти.

    — Определите, что вам нравится, чтобы выбрать свой парфюм:
    Выберите сначала свою «обонятельную вселенную» (цветочный, древесный, восточный, гесперидный, шипровый, кожаный …) или просто ваше желание на данный момент.

    — Попробуйте духи на своей коже:
    Начнем с распыления духов на лист бумаги. Тебе нравятся духи? Примерьте его на внутренней стороне запястья. Не трите запястья друг о друга, так как вы рискуете сломать обонятельные молекулы и исказить сок …
    Если амулет сработает, не поддавайтесь искушению купить его немедленно и оставить на несколько часов.

    — Оставьте духи постоять:
    Уровень pH кожи действительно меняет ароматы и играет их роль.
    Через несколько часов аромат раскрывает свои основные ноты, которые вы можете почувствовать через 4 часа после испарения, и нижние ноты, которые иногда могут длиться несколько дней.

    — Вы также можете воспользоваться нашей ДИАГНОСТИКОЙ ЗАВОДА на этом веб-сайте.

    2. Как мне выбрать аромат без мужской / женской категории, которая могла бы мне помочь?

    В Montale Parfums неважно, какого пола, если у вас есть эмоции…
    Наши ароматы созданы, чтобы вызывать эмоции и ощущения. Вот почему мы не навязываем гендер. Как объяснялось выше, ароматизаторы различны по типу кожи (мужская, женская). Духи, которые априори женственны, могут потрясающе воздействовать на мужскую кожу, и наоборот.

    Не стесняйтесь обращаться за советом, если он вам нужен, по электронной почте: [email protected]

    3. Что мне делать, если я больше не чувствую запах духов по прошествии определенного времени?

    Прежде всего, имейте в виду, что это нормально.Это можно просто объяснить привычкой, порожденной духами, которые вы носите годами. Эта привычка больше не позволяет вам воспринимать духи так, как когда вы их впервые использовали.

    Однако не волнуйтесь, ваше окружение останется чувствительным к вашему ароматному шлейфу.

    Еще одно решение для улучшения вашего парфюма?
    Регулярно чередуйте и меняйте свой парфюм, чтобы заново открыть для себя удовольствие от ароматизации себя и своих любимых ароматов, или просто используйте дополнительные продукты в ассортименте, например, крем для тела.

    4. Как сохранить духи как можно дольше, не изменяя его?

    Алюминиевый флакон Montale был специально создан для защиты и сохранения ценных эссенций и содействия их развитию.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    Следующая запись

    Мышление на деньги: как настроить подсознание на получение денег? — Блог Викиум

    Сб Окт 16 , 1971
    Содержание как настроить подсознание на получение денег? — Блог ВикиумИспользуйте силу воображенияПоэтапная реализация целиПравильная мотивация и активная позицияМедитация на деньгиКак работает подсознание?«Человек наследует не нищету, а способ мышления “бедного”» — ИА «Пресс-Лайн»Как правильное мышление о деньгах может сделать вас богаче!Татьяна Дёмина — международный бизнес коуч и консультант для малого и […]