Коробка обернута в прозрачную пленку. Она прочная, но не грубая. Такая обёртка защищает картонную упаковку от загрязнения и деформации. Края плёнки идут внахлест – это заметно с каждой стороны. Обертку фиксируют термическим методом.

Цветовое исполнение упаковки аромата может быть любым. Одни и те же духи поставляются в 2-3 вариациях. Для французского производителя это норма. Даже флаконы у одинакового аромата могут быть разными в зависимости от объема ёмкости.

Заводы (на территории Франции функционирует 4 предприятия) выпускают фирменную продукцию в нескольких вариациях. Старый дизайн обновляют, появляются интересные детали и, соответственно, упаковка, отличная от привычных образцов. Завод производит товары со знакомым и обновленным внешним видом одновременно.

В 2017 Montale Paris добавила на тыльную часть коробки штрих-код, а на заднюю часть флакона стали наносить серийный номер. Выпуск продукции без этих опознавательных знаков продолжается до сих пор. Как будет оформлен аромат, какой номер батч-кода укажет производитель, зависит от страны импорта.

Отдельного внимания заслуживает цена продукции. Оригинальный парфюм от мирового бренда стоит дорого – заниженная стоимость товара или большие скидки вызывают подозрения.

Контрафактная парфюмерия может нанести непоправимый вред организму, как и поддельные лекарства. В составе подделок имеются синтетические компоненты, которые неблагоприятно сказываются на здоровье человека. Лучше купить оригинал в маленьком объеме, чем поддельный товар в большом.

Видео

Видео сравнение качественной подделки (копии) и настоящих духов Montale:

Введение

11-цис-вакценилацетат (cVA) представляет собой летучий мужской феромонный компонент плодовой мухи Drosophila melanogaster. Это специфический для мужчин липид, синтезируемый в семявыбрасывающем канале [1, 2], и один зрелый самец имеет на кутикулярной поверхности от 200 нг до 2 мкг cVA [3, 4]. Наличие или отсутствие cVA используется для дискриминации по признаку пола и контролирует репродуктивное поведение мужчин и женщин [5]. cVA является антиафродизиаком для самцов и подавляет ухаживания [4–8], в то время как cVA, выделяемая ухаживающим самцом, является афродизиаком для самок и усиливает восприимчивость к совокуплению [8].Также известно, что cVA вызывает внутривидовую агрегацию [3] и мужскую агрессию [9, 10].

Антиафродизиакальная функция cVA не только способствует подавлению гомосексуальных ухаживаний между мужчиной и мужчиной [8], но также помогает мужчине отличить девственную женщину от спарившейся самки. Ранее мы обнаружили, что cVA передается самке во время совокупления с другими компонентами семенной жидкости и снижает сексуальную привлекательность спарившейся самки из-за небольшого количества cVA, которое она представляет [4].Масс-спектрометрический анализ кутикулярных поверхностей показал, что среднее количество cVA на одной спарившейся самке через 24 часа после спаривания составляло 9–200 нг [4, 6, 11, 12]. Поскольку спариваемая самка не принимает второго самца ухаживания и избегает дальнейшего совокупления, самец может судить о статусе спаривания партнера по наличию или отсутствию cVA и соответствующим образом корректировать свою деятельность по ухаживанию. Однако было неясно, как самцы мух отличает присутствие или отсутствие крошечного количества cVA у самки-мишени от других ближайших самцов в сложной обонятельной среде и принимают соответствующее решение об ухаживании.

У насекомых, включая Drosophila, запахи первоначально воспринимаются пахучими рецепторами (OR), экспрессируемыми на поверхности нейронов обонятельных рецепторов (ORN), расположенных на антеннах. ORN, экспрессирующие любое данное OR, проецируют свои аксоны в определенные клубочки в антеннальной доле (AL), первичном обонятельном центре. Эти аксоны образуют синаптические контакты с проекционными нейронами (PN), которые посылают аксоны в грибовидное тело, и локальными нейронами (LN), которые устанавливают связи между множественными клубочками [13].К настоящему времени два OR, Or65a и Or67d, были идентифицированы как рецепторы cVA [14]. Среди них было показано, что функция Or67d необходима для острой реакции агрессии на cVA, в то время как хроническая функция нейронов Or65a имеет решающее значение для социального подавления агрессии [10]. Хроническое подавление активности нейронов Or65a, но не активности Or67d, также привело к нарушению ответа cVA на подавление ухаживания [4]. Напротив, недостатка рецептора Or67d достаточно, чтобы блокировать острый контроль ухаживания [8].Недавно было обнаружено, что рецепторы Or65a и Or67d имеют разные потребности в белке, связывающем запах, для их активности, что может быть искажено высокими концентрациями cVA [15], что указывает на функциональное подразделение этих двух рецепторов.

В этом исследовании мы исследовали, как самцы реагируют на cVA в изменчивой обонятельной среде и как это приводит к адаптивным решениям об ухаживании. Во-первых, мы обнаружили, что присутствие другого самца или cVA в этой области снижает мотивацию ухаживания самца по отношению к самке.Это ингибирование можно было преодолеть путем предварительного воздействия запаха и обонятельного привыкания к cVA или мужскому запаху. Визуализация в реальном времени ORN Or67d, которые обладают высокой чувствительностью cVA, с использованием маркера нейральной активности GCaMP, показала, что длительное воздействие cVA в окружающей среде снижает уровни ответов cVA в AL. Фармакологический и генетический скрининг показал, что рецепторы GABA _A в небольшом подмножестве LN вносят вклад в обонятельное привыкание. Мы также обнаружили, что привыкание позволило самцам дикого типа получить сексуальное преимущество в конкурентной среде ухаживания, которое самцы с мутантом GABA _A не смогли получить.

Чтобы определить антиафродизиакальную активность cVA, мы провели поведенческий анализ с использованием двухслойной камеры (рис. 1A), в которой наивный самец, находящийся в верхней клетке, подвергался воздействию различных количеств cVA. в нижней ячейке под сетчатым барьером и исследовали его поведение по отношению к девственной самке как объекту ухаживания, размещенному в верхней ячейке. Мы обнаружили, что девственные самки без или всего лишь 0,02 нг cVA вызывали у самцов высокий уровень ухаживания, в то время как присутствие cVA над сетчатым барьером снижало уровень ухаживания самцов (рис. 1B).В предыдущих исследованиях было показано, что 150 нг — это минимальная cVA, необходимая для подавления ухаживания [4, 7, 8, 12, 16–19]. В нашей системе анализа 0,2 нг cVA было достаточно, чтобы вызвать значительное подавление ухаживания (рис. 1B), демонстрируя высокую чувствительность самцов к cVA. Мощность подавления была постоянной, о чем свидетельствует отсутствие значимых различий между уровнями ухаживания в присутствии различных количеств cVA, за исключением 0,02 нг (P> 0,05, рис. 1B). Мы также подтвердили, что присутствие не только синтетической cVA, но и другого самца в качестве источника запаха в нижней ячейке камеры снижает ухаживающее поведение подопытного самца (макет на рис. 1C).

(A) Схема анализов с использованием двухслойной камеры для измерения поведения самцов при ухаживании. Верхняя ячейка камеры содержала тестируемого самца для обучения запаху и тестирования ухаживания, а нижняя ячейка под сетчатым барьером содержала cVA или обезглавленного самца в качестве источника запаха. Для предварительного обучения запаху испытуемого самца помещали в верхнюю камеру без (имитация) или с (обучением) другого самца мухи в нижней камере на 60 минут.Затем его переносили в испытательную камеру для проверки уровня ухаживания за обезглавленной девственной самкой в ​​качестве партнера по ухаживанию в присутствии / отсутствии cVA или обезглавленного самца в нижней ячейке. В качестве контроля был протестирован неопытный мужчина (Наивный). Мухи и фильтровальная бумага в мультфильме не в масштабе. (B) Индекс ухаживания самцов мух, подвергшихся воздействию различного количества экзогенного cVA. Концентрация cVA ≥0,2 нг подавляла ухаживающее поведение подопытных самцов. (C) Индекс ухаживания при различных источниках запаха между ложным и обученным самцом.Брачное поведение необученных самцов-имитаторов подавлялось присутствием 200 нг cVA по сравнению с присутствием гексанового растворителя (Sol) или обезглавленным самцом (M) по сравнению с отсутствием самца (-) в нижней ячейке. Напротив, обученный самец демонстрировал неразличимые уровни ухаживания независимо от присутствия обезглавленного самца (M) или cVA после переживания запаха самца. (D) Тренировочный эффект сохранялся в течение 20 минут после тренировки, но не 30 минут. Данные без интервала были взяты из C в качестве справочных.(E) Восприятие запаха в течение 30 минут привело к обонятельному привыканию, в то время как 15 минут или 20 минут были недостаточны, чтобы вызвать этот эффект. (F) Хроническое воздействие cVA также привело к привыканию к запахам. Подопытных самцов выращивали индивидуально в пробирке, содержащей стеклянный капилляр, заполненный 2 мкг cVA в 15 мкл гексана или 15 мкл только гексана в течение 5 дней. Перед введением в пробирку гексану давали испариться в течение 2 минут. В B-F столбцы указывают среднее значение ± SEM. Значимые различия обозначены буквами B и D (тест Tukey HSD).*, P <0,05; нс, не значимо для C, E и F (t-критерий Стьюдента).

Эта острая чувствительность к cVA поднимает вопрос о том, как самец мухи отличает небольшое количество экзогенного cVA у спарившейся самки от собственной cVA и как самец поддерживает высокий уровень ухаживания в присутствии конкурентов-самцов. . Одним из потенциальных механизмов является привыкание, определяемое как уменьшение поведенческой реакции на стимул после повторных воздействий, что позволяет животному отфильтровывать постоянные стимулы и сосредотачиваться на новых и / или альтернативных стимулах.

Чтобы определить, являются ли ответы cVA при ухаживании самцами привычными, мы предварительно подвергали самцов запаху другого самца в течение 60 минут и тестировали их последующие реакции ухаживания на cVA или запах самцов (рис. 1A). В отличие от контрольных самцов, которые оставались одних в камере и демонстрировали подавление ухаживания при наличии мужского запаха или cVA (макет на рис. 1C), обученные самцы, которые подвергались воздействию мужского запаха, сохраняли высокую активность ухаживания независимо от присутствия. мужчины или cVA (Рис. 1C обучен).Задержки ухаживания, определяемые как временная задержка между спариванием и первым началом ухаживания самца, были значительно задержаны у контрольных самцов в присутствии другого самца или cVA, в то время как обученный самец начал ухаживание без задержки (S1, рис.). Поскольку эксперименты проводились при тусклом красном свете, в условиях, когда мухи не могут использовать визуальные сигналы, это означает, что самцы полагались на обоняние, чтобы заметить присутствие целевой самки и инициировать ухаживание. Эти результаты предполагают, что на обонятельную обработку повлияло привыкание к запаху самцов.

Поведенческое привыкание к запаху самцов сохранялось по крайней мере через 20 минут после обучения запаху, но к 30 минутам самцы оправились от опыта до воздействия и снова показали снижение уровня ухаживания за самками в сочетании с запахом самцов, что эквивалентно таковому у контрольной группы. имитируйте самцов (рис. 1D). Мы подтвердили, что 30 минут тренировки либо с запахом мужчин, либо с 200 нг cVA было достаточно, чтобы изменить поведенческие реакции на одновременное присутствие запаха мужчин или cVA (рис. 1E и S2, рис.).Мы также обнаружили, что хроническое воздействие cVA в течение 5-6 дней приводило к такому же эффекту (рис. 1F). Однако 15 или 20 минут воздействия было недостаточно, чтобы эффективно изменить подавление в нашей системе.

Чтобы определить, как cVA-чувствительные ORN реагируют на различные количества cVA и как динамически контролируются ответы ORN, мы сначала выполнили визуализацию в реальном времени с использованием чувствительного к Ca ⁺ флуоресцентного маркера ( GCaMP3.0) экспрессируется в cVA-чувствительных ORN Or67d [8, 20] для изучения дозозависимой нервной активности при стимуляции cVA. Нейронные ответы ORN и PN на cVA контролировались либо электрофизиологией, либо визуализацией in vivo с использованием относительно высоких концентраций cVA: 0,1–10% [21], 1% [22], 1–100% [23], 0,1– 100% [24] или 1–100% [8]. В этих экспериментах конечная концентрация запаха после прохождения через трубки доставки была неясной.

В этом исследовании мы разработали новую систему визуализации в реальном времени для мониторинга реакции кальция на широкий диапазон запахов, представленных перед объектом-самцом (рис. 2A и рис. S3A – S3C).Стимулирующий запах наносили на кончик зубочистки, расположенный на расстоянии 25 мм перед испытуемым мужчиной, и легкую струю воздуха в течение 2 секунд подавали из кончика воздушного сопла в 5 мм от кончика зубочистки. Ответы непосредственно отслеживались в клубочках DA1 головного мозга, где cVA-чувствительные ORNs Or67d проецируют свои аксоны [8, 25, 26] (S3D и S3E Fig). Интенсивность флуоресценции GCaMP увеличивалась после доставки cVA через затяжку воздуха и возвращалась к базальному уровню после выключения затяжки с задержкой менее 2 секунд (рис. 2B).Нанесения 10 пг cVA было достаточно, чтобы привести к значительному увеличению пиковой флуоресценции по сравнению с 0 пг контролем, содержащим только растворитель (фиг. 2C). Уровень нейронного ответа увеличивался по мере увеличения количества применяемой cVA и достигал плато при 100 пг cVA (рис. 2C). Это указывает на то, что сила запаха передается как интенсивность нейронных ответов ORN в AL. В качестве справки мы также отслеживали реакцию на запах, исходящий от живого самца после ампутации крыла, зафиксированного на зубочистке (S4, рис.).Среднее изменение флуоресценции при стимуляции запаха у мужчин составило 6,6%, что сопоставимо с интенсивностью от 0 до 10 пг cVA (рис. 2C).

(A) Система стимуляции запаха с визуализацией in vivo нервных ответов в клубочках DA1 (см. Методы и S3 фиг.). Нервные реакции на cVA контролировали с помощью флуоресцентного микроскопа после стимуляции запаха. cVA наносили на зубочистку картриджа, и струя воздуха из воздушного сопла доставляла улетученный cVA к антеннам мухи.(B) Типичные флуоресцентные изменения, вызванные стимуляцией запаха различными количествами cVA (в данном случае от 0 до 100 пг) у самца мухи. (C) Пик флуоресцентных изменений в ответ на cVA и живого мужчины. Пиковые значения кратковременного флуоресцентного изменения в ответ на стимуляцию запахом показаны в виде прямоугольных диаграмм, представляющих 25-й, 50-й и 75-й процентили с усами от минимума до максимума и кружками (среднее значение). Логистическая кривая была построена на основе средних значений пиков флуоресцентных изменений в каждом количестве cVA (см. Методы).EC ₅₀ составляет 27,5% при 22,3 пг cVA. Стимуляция запаха с использованием живого самца показана на рис. S4. (D) Типичные нейронные реакции на 10 пг cVA ORN Or67d до (Наивно) и после непрерывного воздействия (после CE) 200 нг cVA (синий) или контроль растворителя гексана ( красный) в течение 15 минут. В течение 15 минут CE ответ на 200 нг cVA снижался, а после этого острый ответ на 10 мкг cVA также уменьшался. (E) Пиковые ответы на 10 пг cVA до (наивно), сразу после (после CE) и через 30 минут после непрерывного воздействия (30 минут после CE).

Затем мы исследовали, как на нервные ответы ORN Or67d повлияло постоянное воздействие cVA, используя визуализацию в реальном времени. После кратковременной стимуляции 10 пг cVA субъектная муха получала 200 нг cVA непрерывно в течение 15 минут и была протестирована на реакцию на 10 пг cVA. Во время непрерывного воздействия (CE, Рис. 2D) интенсивность флуоресценции в клубочках DA1 постепенно снижалась с течением времени и, наконец, достигла базального уровня, что соответствовало воздействию только растворителя через 15 минут.После непрерывного воздействия cVA интенсивность острого ответа на 10 пг cVA снизилась примерно на 58% по сравнению с тем, что наблюдалось до CE, и примерно на 59% по сравнению с тем, что наблюдалось с контролем с растворителем (рис. 2E), что ясно показывает феномен десенсибилизации. Этот уменьшенный ответ начал восстанавливаться через 30 минут после прекращения воздействия cVA с увеличением интенсивности примерно на 25% (рис. 2E).

Or67d. Затем мы провели фармакологический скрининг, чтобы определить нейротрансмиттер (ы), участвующий в нейронной десенсибилизации, вызванной воздействием cVA.В качестве контроля для внесения лекарственного средства в солевую ванну, окружающую мозг мухи, подвергшейся воздействию (фиг. S5A), мы заменили только физраствор и обнаружили, что сама замена ванны уменьшала ответ на 10 пг cVA (фиг. S5B, дозировка до КЭ). После непрерывного воздействия cVA ответ дополнительно уменьшился, в то время как после воздействия растворителя никаких изменений не обнаруживалось (S5B, фиг., После CE). Амплитуда эффекта CE, помимо общего эффекта лечения дозированием, была рассчитана путем вычитания значения относительного флуоресцентного изменения «до CE» из значения «после CE» (S5 фиг.) У каждого индивидуума и суммирована на фиг. 3.У мух, которые получали замену ванны без лекарственного средства, значение «CE-эффекта» после cVA CE (синий) было значительно меньше, чем после воздействия растворителя (красный), демонстрируя, что cVA CE приводил к нейронной десенсибилизации также в этом контроле. летать.

Было исследовано влияние пяти антагонистов нейромедиаторов на нервную десенсибилизацию, вызванную воздействием запаха. Изменения ответа после каждого CE рассчитывали путем вычитания значений относительного флуоресцентного изменения «Доза до CE» из значения «после CE» у отдельных мух (S5B – S5G фиг.).Пикротоксин, CGP54626, мекамиламин, MK801 и бутакламол использовали в качестве антагонистов ГАМК _A , ГАМК _B , никотинового ацетилхолина, NMDA и дофаминовых рецепторов соответственно. Коробчатые диаграммы представляют 25-й, 50-й и 75-й процентили с усами от минимума до максимума и средним значением с кружками. Достоверные различия обозначены *, P <0,05; нс, не значимо (t-критерий Стьюдента). Экспериментальная процедура, включая нанесение лекарства, указана на S5 Рис.

Внутри AL LN в основном являются ГАМКергическими и глутаматергическими [27–31], некоторые из них являются холинергическими [32, 33] и еще несколько являются дофаминергическими [30].Напротив, ORN и PN являются холинергическими [34, 35], и также указано присутствие и / или функция нескольких других нейротрансмиттеров и нейропептидов, например, серотонина, тахикинина и малого нейропептида F (sNPF) [36–38]. В нашем анализе активности применение пяти антагонистов нейротрансмиттеров показало значительный эффект в ответ на cVA после CE (рис. 3, P <0,0001; df = 1 в состоянии CE, P <0,05; df = 5 при взаимодействии с применением лекарств. и условие CE с помощью двустороннего дисперсионного анализа).При более тщательном изучении действия каждого препарата, применение антагонистов ГАМК, пикротоксина против рецептора GABA _A и CGP54626 против рецептора GABA _B привело к незатронутым ответам cVA после воздействия cVA, что указывает на нарушенное действие нейронная десенсибилизация. Однако следует отметить, что изменения ответа после каждого CE в присутствии этих препаратов оставались на тех же уровнях, что и в контроле (P> 0,05 по t-критерию Стьюдента с поправкой Холма в каждом состоянии CE), что означает Альтернативная возможность, что вариации ответа, вызванные применением этих препаратов (S5C и S5D фиг.), косвенно уменьшали эффект cVA CE.Поэтому мы выполнили дальнейший анализ с использованием генетических инструментов, чтобы подтвердить функцию ГАМК в нейронной десенсибилизации в следующем разделе. С другой стороны, хотя участие глутамата и дофамина для обработки информации внутри AL было указано [30, 31], антагонисты против N-метил-d-аспартата (NMDA) (MK 801) и дофаминовых (бутакламоловых) рецепторов не повлияли на нейронную десенсибилизацию. Между тем, ингибирование поступления ацетилхолина мекамиламином имело общий стимулирующий эффект, который постепенно увеличивал уровни базального ответа нейронов (рис. S5E) и, следовательно, увеличивал значение «эффекта CE» у контрольных мух, подвергшихся воздействию растворителя (рис. 3, P <0.05 по сравнению с контролем без лекарств по t-критерию Стьюдента с поправкой Холма), в то время как на десенсибилизацию не повлияло (P <0,05 по t-критерию Стьюдента с поправкой Холма, сравнение двух условий CE). В целом было высказано предположение, что CE cVA десенсибилизирует обонятельные нейроны независимо от действия глутамата, дофамина или ацетилхолина.

. Чтобы подтвердить участие ГАМК в пластическом контроле чувствительности к запаху, а также определить обонятельные нейроны, которые получили вход ГАМК для действия, мы провели генетический скрининг с использованием РНКи.Экспрессируя РНКи против рецептора GABA _A Rd1 под контролем различных драйверов GAL4, мы искали условия, при которых на чувствительность мужчин не влияло привыкание. Используя пан-нейронный драйвер (рис. 4A), два драйвера ORN (рис. 4B), пять драйверов LN (рис. 4C) и три драйвера PN (рис. 4D), экспрессия Rdl подавлялась с помощью Rdl-RNAi и его влияние на были изучены реакции на ухаживание после тренировки привыкания. Затем мы обнаружили, что подавление Rdl драйвером LN Mz97 привело к нарушению привыкания, о чем свидетельствует подавление ухаживания при наличии мужского запаха даже после обучения мужскому запаху (P <0.05 t-критерий Стьюдента с поправкой Холма, сравнение двух условий теста; Рис 4C). Штамм Mz97 маркирует 3–4 AL-ассоциированных нейрона, типы клеток которых еще не идентифицированы [39]. Это сведение к нулю тренировки привыкания не было обнаружено у мужчин, экспрессирующих конструкции РНКи с какими-либо другими драйверами (рис.4), что указывает на то, что входы ГАМК, действующие через рецептор ГАМК _и на конкретную подгруппу LN, маркированных Mz97, играют важную роль в обонятельном привыкании. в cVA.

Дефект поведенческого привыкания к cVA был проанализирован путем вмешательства в экспрессию рецепторов GABA _A в основном классе обонятельных нейронов с использованием пан-нейронов (A), ORN (B), LN (C) и PN (D). ) драйверы. Все самцы мух были обучены запаху самцов в течение 60 минут, а затем были измерены реакции ухаживания за самками без (- M) или с (+ M) запахом самцов в нижней ячейке камеры (см. Рис. 1A).Столбцы указывают среднее значение ± SEM. *, P <0,05; нс, не значимо по t-критерию Стьюдента с поправкой Холма.

Наконец, чтобы определить, есть ли репродуктивная польза от привыкания к запаху самцов, мы измерили успех копуляции у самцов с обучением привыканию или без него. В конкурентной ситуации, когда тестируемый самец был спарен с самкой и другим самцом, обученные самцы дикого типа показали больший успех совокупления по сравнению с контрольными самцами (рис. 5А).Задержка совокупления, то есть задержка во времени до начала совокупления, была значительно меньше для обученного самца (рис. 5В), предполагая, что предварительный опыт предоставил самцам некоторые сексуальные преимущества в ситуации конкурентного ухаживания, в которой самец встречает потенциального партнера для спаривания. наличие сексуального конкурента. Напротив, трансгенные самцы, у которых вход ГАМК в LN блокировался Rd1-RNAi, не показали разницы в успешности копуляции и латентности ухаживания независимо от предыдущего опыта запаха (рис. 5C и 5D), что указывает на отсутствие сексуальной выгоды, полученной у этих мутантных самцов. .Таким образом, функция привыкания имеет решающее значение для их репродуктивного успеха.

Количество успешных копуляций, латентность копуляции и временной лаг между спариванием и копуляцией измеряли у самцов дикого типа (A, B) и мутанта рецептора GABA _A , Mz97 / Rdl-RNAi (C, D ). Во время 30-минутного наблюдения обученные самцы дикого типа показали высокое соотношение успешности совокупления (А) и снижение латентности (В) по сравнению с таковым у контрольных имитирующих самцов.Напротив, самцы с мутантным рецептором GABA _A , у которых вход GABA в подмножество LN блокировался с помощью Rd1-RNAi, демонстрировали незаметные уровни успеха копуляции и латентности в условиях конкурентного ухаживания (C, D). *, P <0,05; нс, не значимо по t-критерию Стьюдента.

Привыкание определяется как уменьшение поведенческой реакции на повторяющийся стимул и рассматривается как простейшая форма обучения и запоминания; он позволяет животным отфильтровывать нерелевантные стимулы, которые теряют актуальность, и избирательно сосредотачиваться на важных стимулах [40–44].

У Drosophila melanogaster привыкание было изучено в генетическом, молекулярном и нервном контроле поведения, связанного с побегом, например, прыжок, испуг, движение ног или побег при стимуляции сильным запахом [28, 45–47]. Однако биологической значимости привыкания для животного с точки зрения выживания и репродуктивной вероятности уделялось меньше внимания. В этом исследовании мы продемонстрировали, что обонятельное привыкание к запаху самца или cVA, феромону, препятствующему ухаживанию, позволяет самцу поддерживать высокий уровень сексуальной мотивации и, следовательно, увеличивает вероятность успеха совокупления в конкурентной среде (рис. 5).Это первый отчет о привыкании, положительно влияющем на сексуальное преимущество в полунатуральных экспериментальных условиях.

Мы подозреваем, что привыкание к cVA приносит пользу самцам в дикой природе, поскольку количество cVA, присутствующее в окружающей среде, варьируется. Вновь появившийся неполовозрелый самец не содержит обнаруживаемой cVA, но через 4 часа появляются небольшие количества cVA (20 нг), которые постепенно увеличиваются и достигают 2,9 мкг в возрасте 4 недель [3]. Количество cVA у спарившейся самки варьируется в зависимости от интервала после копуляции [6].Есть также штамм-зависимые различия, обнаруженные у самцов, отловленных в дикой природе [48]. При таких изменчивых условиях запаха, включая его собственный запах, пластичность чувствительности cVA может дать животному разумную пользу при выборе адаптивного поведения.

Привыкание к cVA влияло на мужское поведение только в контексте ухаживания самок — оно не увеличивало гомосексуальное поведение при ухаживании между мужчинами (S6, рис.). Хотя считается, что наличие cVA способствует дискриминации по признаку пола, это не единственный фактор, препятствующий афродизиаку, и другие факторы «мужественности», включая поведенческий паттерн [49] или вкусовую информацию [50, 51], могут компенсировать этот фактор. снижение уровня чувствительности к запахам, вызванное привыканием.

Из генетических исследований было показано участие нескольких внутриклеточных и межклеточных сигнальных молекул. Мутации гена брюквы, которые снижают синтез цАМФ, снижают привыкание к реакции бегства на зрительный стимул, в то время как бессмысленные мутации, повышающие уровень цАМФ, усиливают привыкание [45]. В реакции избегания запаха рианодиновый рецептор и инозитол (1,4,5) -трифосфатный рецептор в ORN [52]; брюква, синапсин, везикулярный переносчик глутамата и кальций / кальмодулин-зависимая протеинкиназа II (CaMKII) в LN [47, 53]; входы атаксина-2, ГАМК и глутамата в PN [46, 53] необходимы для привыкания.Напротив, только несколько сообщений демонстрируют привыкание к ухаживанию самцов, при котором воздействие запаха молодых самцов приводило к снижению поведенческих реакций по отношению к молодым самцам [54–56]. Для этого контроля ухаживания было предложено участие болвана, бездельника, страдающего амнезией или брюквы; однако их локусы действия в головном мозге были неясными из-за того, что в то время не было обусловлено генетическими методами [54, 55]. В этом исследовании мы продемонстрировали, что постоянное воздействие запаха снижает интенсивность ответа ORN Or67d в терминалях аксонов, и идентифицировали участие тормозного нейромедиатора ГАМК с помощью фармакологического скрининга.В нашей визуализации в реальном времени применение обоих блокаторов ГАМК, пикротоксина (антагонист рецептора GABA _A ) и CGP54626 (антагонист рецептора GABA _B ) [27, 57] нарушило нейронную десенсибилизацию (рис. 3). С другой стороны, применение мекамиламина, антагониста никотиновых рецепторов ацетилхолина [57], MK801, антагониста рецепторов NMDA [58], и бутакламола, антагониста рецепторов дофамина [59], не повлияло на десенсибилизацию запаха (рис. 3). в то время как мекамиламин увеличивал базальные уровни нервной активности помимо десенсибилизации (S5E Fig).Это согласуется с предыдущими исследованиями, показывающими действие нейротрансмиттеров никотинового ацетилхолина и ГАМК в AL при избегании запаха [28, 53].

Обонятельная информация передается от ORN к PN, потенциально с модификацией от LN в клубочках AL, а затем передается в более высокие области мозга, латеральный рог и грибовидное тело [60–62]. Ранее записи электроантеннограмм показали, что предварительное воздействие запаха ослабляет амплитуду ответа ORN в антенне, указывая на локальное действие внутриклеточной модификации в сенсорной сенсилле [63, 64].Между тем, в других сообщениях предполагается, что никакая модификация обонятельной трансдукции не обязательно сопровождает привыкание к реакции избегания запаха [65, 66]. Также сообщалось, что привыкание к агрессивному поведению посредством cVA не сопровождалось модификацией активности дендритных рецепторов в антенне, что указывает на вклад высших функций мозга в контекстно-зависимые поведенческие изменения [10]. Недавние данные указывают на то, что межклеточная обработка информации об запахе в AL играет критическую роль в обонятельном привыкании к ответным реакциям бегства [28, 47, 53], которые также могут быть применены к привыканию cVA при контроле ухаживания.

Используя визуализацию в реальном времени, мы обнаружили, что десенсибилизация ORN Or67d была чувствительна к антагонистам нейротрансмиттеров. Это говорит о том, что место действия привыкания находится внутри нейронной сети в AL. Чтобы определить, каким обонятельным нейронам требуется ввод ГАМК для обонятельного привыкания, мы экспрессировали конструкции РНКи против рецептора Rd1 GABA _A с использованием различных драйверов GAL4 и обнаружили, что привыкание блокировалось, когда экспрессия рецептора GABA _A Rdl была нарушена под контролем Драйвер Mz97 (рис 4).Штамм Mz97 экспрессирует GAL4 примерно в трех нейронах, расположенных в вентролатеральной области по отношению к AL, и в одном нейроне, который разветвляется во множестве клубочков AL, включая DA1, и оканчивается в механосенсорном и моторном центре антенн (AMMC) контралатерального полушария [39]. . Следовательно, можно предположить, что этот Mz97-LN, иннервирующий DA1 клубочки, участвует в десенсибилизации ORNs Or67d.

Предыдущие отчеты показали, что вход ГАМК в PN из LN был критическим для привыкания реакции избегания к вредным материалам, таким как углекислый газ и этилбутират, указывая на то, что привыкание было усиленной активностью ингибирующих LN (iLN) [28, 53].Напротив, в нашем скрининге РНКи экспрессия конструкций РНКи против рецептора GABA _A в PN под тем же драйвером Gh246 GAL4 не показала никакого эффекта на привыкание к запаху самцов (рис. 4D), что подразумевает отдельный процессинг для привыкания к побегу. контроль поведения и ухаживания. Между тем, в нашей визуализации в реальном времени, непрерывный стимул cVA приводил к подавлению амплитуды ответа ORN Or67d (рис. 2D и 2E), который был чувствителен к нескольким антагонистам нейротрансмиттеров, что свидетельствует о действии ингибирующей обратной связи с ORN в AL.Однако мы не обнаружили нарушения привыкания к запаху самцов у трансгенных самцов, у которых вход ГАМК в ORNs Or67d был заблокирован. Это указывает на то, что другие ингибирующие механизмы опосредуют десенсибилизацию ORNs Or67d.

Одним из возможных механизмов привыкания к запаху у мужчин является повторяющееся торможение, определяемое как зависимая от активности регуляция возбуждающих нейронов с помощью тормозящего интернейрона, как показано в сифонном рефлексе абстиненции аплизии [67–71]. В AL Drosophila большинство LN чувствительны к пикротоксину, и было предсказано ингибирование между LN [27, 57, 72].Тот факт, что интерференция входа ГАМК в LN Mz97 сохранила чувствительность к запаху самцов даже после тренировки привыкания (рис.4), позволяет нам предсказать, что LN Mz97 являются возбуждающими (eLN) у наивной мухи, обеспечивая положительную обратную связь с пресинаптической. терминалы ORN для облегчения передачи сигналов запаха, когда ORN активируются (рис. 6A). Учитывая, что eLN в AL проявляют спонтанную активность [57], возможно, что eLN также хронически стимулируют передачу сигналов cVA и поддерживают низкую мотивацию ухаживания независимо от воздействия cVA.Участие eLN также подтверждается нашими результатами визуализации в реальном времени; десенсибилизация ORNs Or67d была нарушена применением пикротоксина и CGP54626 (рис. 3), как и активность eLN в предыдущем исследовании [57]. Подводя итог, мы предлагаем модель рекуррентной схемы, показанную на рис. 6. Во-первых, LN Mz97 обеспечивают пресинаптические возбуждающие входы в ORNs Or67d у простой мухи (рис. 6A). При непрерывной стимуляции запаха усиленный сигнал запаха способствует ГАМКергическим iLN, которые имеют ингибирующие связи с LN Mz97 (рис. 6B).Впоследствии подавление активности Mz97 (пресинаптическое возбуждение) ослабляет сигнал запаха от ORN и в конечном итоге снижает последующие поведенческие реакции (рис. 6C).

(A) LN Mz97 обеспечивают пресинаптические возбуждающие входы в ORN Or67d у простой мухи. (B) Непрерывное воздействие запаха облегчает iLN, которые обеспечивают подавляющее воздействие на LN Mz97. (C) Подавление активности Mz97 ослабляет сигнал запаха от ORN и последующие поведенческие реакции.

В дополнение к ГАМК участие ацетилхолина в обработке информации было показано фармакологическим скринингом (S5E Рис.). Учитывая, что подавляющее большинство нейронов AL, ORN, некоторых LN и PN являются холинергическими [33–35], вполне вероятно, что этот нейромедиатор играет критическую роль в контроле активности обонятельных нейронов. Однако в нашем препарате для визуализации, поскольку лекарство проникало по всему мозгу, мы не могли определить целевые нейроны, на которые воздействует мекамиламин, антагонист никотиновых рецепторов ацетилхолина в данный момент.Дальнейшие исследования покажут прямой молекулярный процессинг для контроля уровней активности обонятельных нейронов и приведет к успеху репродуктивного здоровья.

мух Canton S (CS) использовали в качестве контрольных объектов дикого типа и объектов ухаживания. Использовались трансгенные линии: UAS-Rdli-8-10J [73], orco-GAL4 (ранее известный как Or83b-GAL4 [74]), NP842-GAL4, NP1068-GAL4, NP1350, Mz19-GAL4 [39], NP3056. -GAL4 [30], h34-GAL4 [75], Gh246-GAL4 [32] и Mz9-GAL47 [76].Штамм Or67d-GAL4 57.3 был щедро предоставлен Leslie Vosshall (Университет Рокфеллера, Нью-Йорк, Нью-Йорк, США). Исходная РНКи для гена рецептора GABA _A (устойчивость к дильдрину, Rdl), UAS-Rdli-8-10J, была получена от Лесли Гриффит (Университет Брандейса, Уолтем, Массачусетс, США) [77]. Мухи NP842-GAL4 и Mz97-GAL4 были щедро предоставлены Кей Ито (Токийский университет, Токио, Япония). Мухи Gh398-GAL4 и Mz19-GAL4 были щедро предоставлены Рэйчел Уилсон (Гарвардская медицинская школа, Бостон, Массачусетс, США).elav ^C155 -GAL4 (инвентарный номер 105921), NP1350-GAL4 (инвентарный номер 112640), NP3056-GAL4 (инвентарный номер 113080) и NP1068-GAL4 (инвентарный номер 112482) были получены из Центра генетических ресурсов дрозофилы (Киото, г. Япония). Мухи h34-GAL4 (запас № 51632), Gh246-GAL4 (запас № 30026) и UAS-GCaMP3.0 (запас № 32116) были получены из Bloomington Drosophila Stock Center (Блумингтон, Индиана, США).

Все мухи выращивались на стандартной среде кукурузной муки, сахарозно-агаровой смеси при 25 ° C и 12/12 часовом цикле свет / темнота.Взрослых самцов девственных мух собирали в течение 4 часов после выделения с использованием анестезии CO ₂ и выдерживали в течение 4–6 дней в отдельных пробирках, содержащих виноградный сок (виноград Велча 100, Calpis) с 10% агаром до испытания. В эксперименте использовали только самцов с неповрежденными крыльями.

Все поведенческие эксперименты проводились при тусклом красном свете (> 700 нм), если не указано иное, в помещении с окружающей средой (25 ° C, влажность 70%). Двухслойная камера ухаживания представляет собой модифицированную колесную камеру [78, 79], состоящую из двух слоев оргстекла с 8 ячейками наблюдения (диаметром 8 мм, глубиной 3 мм каждая), разделенных тонкой нейлоновой сеткой (Tetko, 3-180). / 43), что предотвращает прямой контакт мух в верхней ячейке с источником запаха в нижней ячейке (рис. 1A) и перекрывается верхним и нижним слоями.4-6-дневный самец был помещен с обезглавленной зрелой (4-6-дневной) самкой-испытателем в качестве «объекта ухаживания» в верхнюю камеру двухслойной камеры, и его действия по ухаживанию записывались на видео с помощью ПЗС-камера (Allied, Guppy) на 5 минут. Индекс ухаживания рассчитывали как долю времени, в течение которого самец проявлял ухаживание в течение 5-минутного периода наблюдения. Задержка ухаживания была временной задержкой до первого проявления ухаживания (ориентации ухаживания) после спаривания. Значение задержки 300 секунд регистрировалось, когда ухаживания не проводились в течение 5-минутного наблюдения.cVA (Pherobank) разбавляли гексановым растворителем. Непосредственно перед тестированием 6 мкл раствора cVA наносили на кусок фильтровальной бумаги в нижней ячейке камеры и гексан выпаривали в течение 2 минут при комнатной температуре.

Для тренировки привыкания в верхнюю камеру двухслойной камеры помещали самца, который в течение 60 минут подвергали воздействию источника запаха, помещенного в нижнюю камеру. Сразу после обучения самцов переводили в чистую камеру и объединяли с обезглавленной зрелой самкой-испытателем на 5 минут.Дрессированные самцы в течение первого часа содержались в камере одних, а затем в паре с тестером.

Для экспериментов по копуляции самец был спарен с интактной самкой и обезглавленным самцом в возрасте 4–6 дней в однослойной камере (диаметром 8 мм, глубиной 6 мм) при тусклом красном свете. Время совокупления и временные задержки до успешного совокупления регистрировались в течение 30 минут. Значение задержки 1800 секунд было дано, когда во время наблюдения не производилось копуляции.

Использовались самцы мух в возрасте от одного до пяти дней, которых выращивали в отдельных пробирках, упомянутых выше.Мух анестезировали путем переноса в стеклянный флакон на льду, а затем удерживали на чашке из оргстекла (S3A, фиг.) При комнатной температуре. Прикрепили крылья и ножки к посуде из оргстекла; хоботок был прикреплен к серебряному волокну с помощью воска (S3B и S3C фиг.). Кусок алюминиевой фольги вставлялся между верхней частью головы мухи, включая усики, и нижней частью тела мухи и фиксировался эпоксидным уплотнением (S3B и S3C, рис.). Муху, закрепленную на чашке из оргстекла, оставляли в пластиковой чашке для культивирования с увлажненной фильтровальной бумагой до застывания эпоксидной смолы (около 10 минут).После затвердевания эпоксидной смолы верхняя поверхность чашки из оргстекла была заполнена 1 мл физиологического раствора. С помощью щипцов под микроскопом удалили верхнюю кутикулу головы мухи, чтобы образовалось отверстие. Затем удаляли воздушные мешочки и жир и разрезали мышцы, связанные с движением мозга. Облученную мозгом муху, зафиксированную на чашке из оргстекла, устанавливали на изготовленную на заказ подставку (Urin Seisakusho Co., Ltd.), и на чашку из оргстекла добавляли 1 мл физиологического раствора. Физиологический раствор состоял из следующих (в мМ): 103 NaCl, 3 KCl, 5 TES [N-трис (гидроксиметил) метил-2-аминоэтансульфоновая кислота], 10 трегалозы, 10 глюкозы, 7 сахарозы, 26 NaHCO ₃ , 1 NaH. ₂ PO ₄ , 1.5 CaCl ₂ и 4 MgCl ₂ [80] доводят до pH 7,25 с помощью HCl и затем фильтруют. Осмоляльность физиологического раствора не регулировалась (приблизительно 305 мОсм).

Флуоресцентные сигналы на основе GCaMP3 клубочков, иннервируемых ORN-ORN (DA1) в антеннальной доле [7, 19] (S3E и S3F Fig), отслеживали с помощью микроскопа (BX51WI, Olympus) с водно-иммерсионным объективом 40 × NA 0.8) (LUMPLFLN 40XW, Olympus), систему механического затвора (Physio-Tech), ультрафиолетовый (УФ) лазерный блок и цифровую камеру CCD (ORCA-R2, Hamamatsu Photonics).Сигнал собирали в виде монохроматического возбуждающего света с использованием программного обеспечения для визуализации (HCImage, Hamamatsu Photonics). Изображения были получены с разрешением 512 × 512 пикселей каждые 250 мсек на кадр. Один цикл визуализации состоял из трех повторов по 10 секунд (40 кадров), сбора сигнала с 2-секундной затяжкой воздуха (кадры 9–16) и 20-секундного интервала с выключенным УФ-светом. Таким образом, за один цикл визуализации было получено 120 кадров. Лабораторный аппарат для напуска воздуха состоит из шести компонентов: ресивера с регулятором, насоса (PV820 Pneumatic PicoPump, World Precision Instruments), расходомера (P-200-L0-4N-R2, Tokyo Keiso), фильтр с активированным углем, флакон с фильтровальной бумагой, смоченной дистиллированной водой, и воздушное сопло из иглы для подкожных инъекций (NN-1838R, Terumo).Все компоненты были соединены силиконовыми трубками. Воздушное сопло располагалось на 30 мм впереди мухи. Воздух подавали со скоростью 30 мл / мин (скорость ветра: 0,18 м / сек).

Типичные переходы сигналов отслеживались во время непрерывной экспозиции в течение 15 минут, и изображения получали непрерывно при УФ-облучении. Во всех остальных случаях получение изображения и УФ-облучение не производились во время непрерывной экспозиции. Последовательное переключение между сбором сигналов, УФ-облучением и выдуванием воздуха контролировалось стимулятором (Мастер-8, А.М.П.И.). После экспериментов по визуализации на каждой мухе измеряли максимальную флуоресцентную реакцию клубочков DA1 для численной коррекции нервной реакции среди людей путем замены 1 мл физиологического раствора на эквивалентное количество 400 мМ раствора KCl на лету, прикрепленного к чашке из оргстекла.

cVA разбавляли гексаном и хранили в пробирках объемом 1,5 мл при -30 ° C. При использовании раствор cVA хранили на льду. Запах подавали с помощью настольного картриджа, состоящего из наконечников зубочисток и пипетки (рис. 2А).На верхнюю часть зубочистки наносили один микролитр различных разведений cVA. После испарения гексана картридж, покрытый cVA, помещали между воздушным соплом и антеннами мухи (рис. 2A) с помощью манипулятора (M-3, Narishige), прикрепленного к подставке (Z-1, Narishige). cVA подводился к антеннам с помощью затяжки из воздушного сопла. Картридж заменяли после каждого цикла визуализации.

Пикротоксин (Sigma), гидрохлорид CGP54626 (Tocris Bioscience), мекамиламина гидрохлорид (Sigma-Aldrich), (+) — гидрокомалеат MK-801 (Sigma-Aldrich) и (+) — гидрохлорид бутакламола (Sigma-Aldrich). используются в качестве антагонистов рецепторов ГАМК _А , ГАМК _В , никотинового ацетилхолина, NMDA и дофамина соответственно.Пикротоксин, гидрохлорид мекамиламина и (+) — гидрокомалеат MK-801 растворяли в физиологическом растворе до 500 мкМ, 200 мкМ и 200 мкМ соответственно. И гидрохлорид CGP54626, и гидрохлорид (+) — бутакламола растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до 100 мМ и затем разбавляли физиологическим раствором до 100 мкМ. Эти лекарственные растворы хранили при -30 ° C до использования. Во время нанесения лекарства сначала выбрасывали 1 мл физиологического раствора, нанесенного на фиксированную муху, а затем применяли эквивалентные количества растворов лекарства или физиологического раствора в качестве контроля.Конечные концентрации пикротоксина, гидрохлорида CGP54626, гидрохлорида мекамиламина, (+) — MK-801 гидромалеата и (+) — бутакламола гидрохлорида составляли 250 мкМ, 50 мкМ, 100 мкМ, 100 мкМ и 50 мкМ, соответственно.

Интенсивность флуоресценции на изображениях клубочков DA1 (фиг. S3E) была преобразована в числовые значения с использованием программного обеспечения (изображение J 1.46r). Значения F были рассчитаны путем усреднения значений для одних и тех же кадров при повторении циклов одиночного изображения. Затем были рассчитаны процентные значения ΔF / F по формуле ∆F / F% = Ft / (∑t = 58Ft / 4) где Ft — усредненная интенсивность флуоресценции в заданный момент времени (кадр) одного цикла визуализации.

Средние значения пика флуоресцентных изменений при каждом количестве cVA использовались для подгонки логистической кривой к данным о зависимом от концентрации ответе на cVA на фиг. 2C. Кривая рассчитывалась по формуле у = K1 + be-cx где y — прогнозируемое значение флуоресцентного изменения при заданном количестве cVA (x), e — число Эйлера, а K, b и c — произвольные константы. Оптимальные константы были рассчитаны методом наименьших квадратов с использованием Solver в Microsoft Excel для Mac 2011, что дало K = 47.919, b = 5,925 и c = 0,093.

Статистический анализ проводился либо с JMP 8.0 (Институт SAS), либо с R версии 3.0.2 [81]. Для сравнения данных между двумя группами и между несколькими группами, соответственно, применялись t-критерий Стьюдента с / без поправки Холма и тест честной значимой разницы Тьюки (HSD) с апостериорным тестом в ANOVA.

Montale Dark Purple: отзывы покупателей, описание аромата

Montale Dark Purple — французская парфюмированная вода, созданная знаменитым Пьером Монталь в 2011 году.За все это время аромат не потерял актуальности среди покупателей. Они ищут и приобретают его, чтобы испытать блаженство.

Что это за аромат и почему он считается одним из лучших в линейке «Монталь»?

Описание Montale Dark Purple

Представленный еще в 2011 году аромат французского парфюмера классифицируется как восточно-цветочная композиция. В нем гармонично сочетаются запахи фруктов, цветов и пряные нотки.

Аромат Montal Dark Purple по стойкости и открываемости сравнивается с арабскими духами без алкоголя.С теми, которые созданы исключительно в эфире. Помимо основных ароматических компонентов, духи также содержат экстракты уда, смолы гальбанума, непальской розы и египетского ветивера. Их концентрация способствует полному раскрытию букета на коже, его длительному сохранению.

Композиция «Монталь» — уникальный рецепт, известный единицам парфюмеров в мире, а это значит, что подобных ароматов не существует.

Многочисленные обзоры Montale Dark Purple определили его как очень насыщенного событиями.Даже одно прикосновение вызывает волну контрастных запахов, которые со временем успокаиваются и становятся на свои места. Поэтому двух нажатий на спрей достаточно, чтобы нюхать весь день и даже дольше.

Какие духи у Montale Dark Purple?

Верхние ноты

Сначала аромат представлен нотами сочной сливы в сочетании с перечным апельсином. Да и сливу выбрать непросто. Парфюмер нашел редчайший темный сорт, источающий невероятно сильный аромат и сочащийся при откусывании.Слива не только задает общее настроение аромату, но и повлияла на создание внешнего дизайна (подробнее об этом позже).

Но бодрящий апельсин, выбранный в качестве сливового партнера, добавлен, чтобы разбавить сладость аромата пурпурных фруктов и добавить яркости аромату. Получилось это противоречивое сочетание.

Для некоторых женщин, попробовавших Montal Dark Purple, начальный вкус слишком концентрирован. Но это только в первый раз.Буквально через несколько минут запах становится мягче.

Сердечные ноты

Яркое продолжение выражено сердечными нотами, представленными розой, геранью, красными ягодами и пачули. В цветочных ароматах обычно преобладает запах последнего, поэтому многие ошибочно относят Montal Dark Purple к разряду восточных.

Но и бархатистая медовая молодая роза не дает забыть о себе. Его запах прилипает к коже и прекрасно раскрывается под действием феромонов тела.Горько-терпкая герань в сочетании с другими компонентами подавляет эти качества, раскрывая тайный аромат и свежесть.

Пачули — восточная пряность, дающая сладость, но не приторная нотки сердца. На коже аромат также проявляется как природный афродизиак, поэтому духи Paris Dark Purple так привлекательны для противоположного пола.

Аромат нот сердца ощущается 3-4 часа, а затем плавно, почти незаметно перетекает в шлейф.Это свойство нравится многим женщинам.

Циклический звук

Мускус, тик индонезийского дерева и амбра — это базовое завершение Montal Dark Purple. Сладкий, головокружительный, манящий — так можно охарактеризовать шлейф, оставшийся после фруктово-цветочного запаха.

Основная композиция представлена ​​ароматами Востока. Стойкость этих запахов невероятно велика — от 5 до 8 часов. Многие считают мускус, тик и амбру мужскими ароматами, но сочетание их с фруктово-цветочными нотами придает им определенную женственность.

Шлейфовое послевкусие раскрывает всю роскошь этого парфюма, подчеркивает элегантность, раскрепощенность, изысканность его обладательницы.

Флакон и упаковка

Флакон от Montal Dark Purple свидетельствует о роскоши своего владельца. Причем начиная с коробки. Он полностью переливается золотистым оттенком. На лицевой стороне красуется название бренда «Montal», а внизу в фиолетовой рамке нанесено название серии. На упаковке оригинальных духов буквы спереди и сзади слегка вдавлены, в то время как они просто отпечатаны на подделке, поэтому буквы можно легко отклеить легким движением ногтя.Еще одна отличительная черта оригинала от подделки — на первом наклеено название серии (то есть в сиреневой рамке), а на втором просто напечатано.

В коробке находится бутылка, которая до сих пор спрятана в фирменной сумке Montail. Материал, из которого он сшит, напоминает плотный шелк. Он черного цвета, кое-где логотипы золотистые. Верх сумки регулируется с помощью золотого шнурка. Сбоку пришита белая этикетка с надписью Montale.

Сама бутылка алюминиевая, темно-фиолетового цвета, что соответствует названию серии.Колер напоминает сливу — символ этих духов. Золотой спрей имеет знаменитую прищепку Montalev, которая предотвращает случайное распыление аромата. Название серии Dark Purple, расположенное на дне флакона, также приклеено (если мы говорим об оригинальных духах). Крышка, закрывающая распылитель, закручена. На нем и на шейке краскопульта для этого есть специальная резьба. Но если колпачок не закрутить, а просто надеть, при этом имея нитку, то это говорит о подделке.

Алюминиевая бутылка очень легкая, внутри создается иллюзия пустоты, но это не так. Он наполнен ароматической жидкостью точно так, как это предусмотрено производителем.

Темно-фиолетовый колдовской цвет флакона не только создает имидж парфюма, но и является надежной защитой от попадания прямых солнечных лучей на его содержимое.

Отличительных черт подделки от оригинала не так много, но запомнить их несложно. При этом следует учитывать, что даже копии под брендом могут иметь все вышеперечисленные симптомы.Но если они есть, то их немного, как правило, под оригинал выполняется только коробка.

Для кого это?

Женская аудитория любого возраста смело может пользоваться ароматом Montale Dark Purple, отзывы о котором будут ниже. Но многие покупатели для себя отметили, что сочная слива и роза сочетаются с молодым возрастом от 20 до 35 лет.

И по характеру «Монталь» не делает предпочтений. И скромная милая девушка, и дерзкая хулиганка, и бизнес-леди, и пожилая женщина со спокойным и опытным взглядом — все желающие могут попробовать манящие духи от французского бренда.

Когда лучше использовать?

Montale Dark Purple Описание аромата предполагает, что «Dark Purple Montal» создан «под пальто», чтобы придать «тепло и уют» любому демисезонному образу. Яркие акценты сливы и розы прекрасно сочетаются с осенней верхней одеждой, красивыми сапогами и уютными шарфами.

Использование аромата также подходит для периода ранней весны (март, начало апреля), когда природа только-только пробуждается от спячки.

Насчет времени суток не беда.И днем ​​и вечером парфюм будет уместен для выхода. И неважно, что вы наденете, элегантное вечернее платье или консервативный деловой костюм. Montal Dark Magenta в любом случае подчеркнет важность изображения.

Стойкость и насыщенность

Отзывы о Montale Dark Purple отмечают, что полное раскрытие качеств духов происходит ближе к вечеру, ближе к ночи, когда воздух прохладнее и свежее. Придает аромату на коже полную силу и позволяет максимально раскрыться.В этом случае количество парфюма, нанесенного на кожу, может быть небольшим, даже пара капель дополнит образ.

На теле духи сохраняют действие от 8 до 12 часов, а на одежде — от 1 до 2 дней. И, как говорят многие женщины, даже после стирки запах «Монталь» не исчезает полностью.

Но в дневное время духи нужно наносить в большем количестве, чем вечером. Только тогда «Монталь» проявит все свои характеристики, дополнит образ своей обладательницы, подчеркнет ее независимость и не оставит незамеченной.

Удивительно, но духи демонстрируют потрясающую стойкость, даже несмотря на то, что они содержат 70-80% алкоголя.

Где купить?

Приобрести бутылку известного бренда можно в бутиках Letual, Rive Gauche и других.

Вы также можете заказать эти духи в Интернете, но необходимо тщательно выбирать продавца. Ведь именно в интернет-магазинах высок риск приобрести подделку. В России есть официальный представитель компании Montal, у которой есть интернет-ресурс с товарами известного бренда.

Перед покупкой в ​​других магазинах не лишним будет прочитать о них отзывы. Тогда это значительно снизит риск быть пойманным мошенниками.

Ценовая ниша

Важным вопросом остается стоимость 100мл Montale Dark Purple. Именно в этом объеме продается аромат. В сети «Летуаль» бутылка известного бренда стоит 4600 рублей. При покупке у официального представителя через Интернет парфюм обойдется в 4900 рублей.

Стоит учесть, что можно найти варианты по очень привлекательным ценам — 2 000 — 2 500 рублей, но это не будет оригиналом. Однако есть качественные подделки, свойством которых является стойкость и насыщенность запаха. Но как это скажется на здоровье, можно только догадываться.

Ароматы по цене 1000 рублей уже должны насторожить покупателя, так как у Montal не может быть такой цены.

Montale Dark Purple Обзоры

С первого дня своего существования, а это 2011 год, парфюм Montal Dark Purple завоевал признание миллионов дам, которые остались им верны и по сей день.

Описание аромата и отзывы на парфюм Montale Dark Purple представляют его как роскошь, удовольствие, волшебство Востока с французской душой. Использование парфюмерии покупателями позволило выделить целый ряд преимуществ этого парфюма:

1. Насыщенный аромат, переливающийся нотами фруктов, цветов и восточными запахами.
2. Изумительная долговечность до 12 часов. Как отмечает значительное количество женщин, запах можно почувствовать уже на следующий день. И совершенно не важно, на волосы, кожу или легкий шелковый платок.
3. Оригинальность. Об этом упоминалось ранее. Состав Montale Paris Dark Purple разработан по рецепту, секрет которого известен единицам парфюмеров. Это делает аромат уникальным и ни на что не похожим. Это отметили заказчики.
4. Долгое приятное послевкусие, выраженное манящим шлейфом.
5. К достоинствам Montal многие приписывали не только аромат, но и красивый дизайн. И внешнее, и внутреннее содержание полностью дополняют друг друга.
6. Аромат считался богатым и роскошным.

Недостатки определены субъективно, поэтому для каждого они были свои. Но большинство женщин не нашли никаких минусов.

Судя по отзывам, минусы следующие:

1. Кто-то слишком зацикливается на аромате удового дерева, которое даже через некоторое время почти не выветривается.
2. Кто-то не пахнет ни сливой, ни апельсином. С чем это связано, сказать сложно.
3. Для кого-то слишком навязчивый мускус, который присущ парфюмерии.Сильная обонятельная восприимчивость затрудняет толерантность Монталь.
4. Кто-то определил Montale Dark Purple как тяжелый аромат, сочетающий в себе самые концентрированные ноты.
5. Для некоторых цена за бутылку была неприятным фактором при покупке.

Аромат «Montal Dark Purple» мужчины оценили как привлекательный женский парфюм, вызывающий желание как можно дольше находиться в присутствии своей обладательницы. Но они не считали эти духи женственными, как, например, более цветочные варианты от бренда Montal.

Заключение

Отзывы потребителей о Montale Dark Purple в подавляющем большинстве поощряют покупку этого аромата. Его противоречивость, сочетающая мужской и женский характер, делает аромат универсальным для дам любого темперамента.

Используйте аромат в течение дня, чтобы подчеркнуть свою деловую хватку или жизнерадостную женственную натуру. Нанесите вечером несколько капель духов и окунитесь в шлейф привлекательности, чувственности и желания.

Если хотите чего-то новенького, не битого, не похожего ни на что, приобретите флакон Montal Dark Purple и, поверьте, вы не пожалеете.

Программа по молекулярной медицине — Публикации — Медицинская школа Массачусетского университета | Программа по молекулярной медицине

Программа по молекулярной медицине Медицинской школы Массачусетского университета была основана в новом исследовательском здании в 1989 году. На факультете работают как клинические исследователи, так и фундаментальные ученые, многие из которых сосредоточивают свои исследования на процессах, связанных с болезнями человека. Лабораторные группы и основные объекты, составляющие молекулярную медицину, представляют многие дисциплины в биомедицинских науках: биохимия и молекулярная биология, клеточная биология, медицина, иммунология, молекулярная генетика и микробиология, педиатрия, фармакология, физиология, геномика, биоинформатика и протеомика.Эта разнообразная научная среда делает Программу исключительной тренировочной площадкой для аспирантов и докторантов, которые, в свою очередь, вносят большой вклад в ее жизнеспособность и увлекательность. В этой коллекции представлены публикации и презентации, написанные преподавателями и исследователями Программы молекулярной медицины.

Следовать

Публикации с 2020 года

PDF

Естественная вариация глюкуронозилтрансферазы модулирует чувствительность к пропионату у C.elegans модель пропионовой ацидемии, Huimin Na, Стефан Здральевич, Робин Э. Танни, Альберта Дж. М. Валхаут и Эрик К. Андерсен

PDF

Протеомные и транскрипционные профили бета-клеток, полученных из стволовых клеток человека после энтеровирусной инфекции, Джулиус О. Ньялвиде, Агата Юрчик, Басанти Сатиш, Самбра Д. Редик, Наташа Кайсар, Мелани И. Тромбли, Пранита Вангала, Риккардо Рачико, Рита Бортелл Дэвид М. Харлан, Дейл Л. Грейнер, Майкл А. Брем, Джерри Л. Надлер и Дженнифер П.Ван

PDF

TRIM34 ограничивает капсиды ВИЧ-1 и SIV TRIM5-альфа-зависимым образом, Молли Охайнл, Кюсик Ким, Севнур Комурлу Кечели, Эбби Фелтон, Эд Кэмпбелл, Джереми Любан и Майкл Эмерман

PDF

Хантингтин дикого типа регулирует функцию макрофагов человека, Грейс С. О’Реган, Сахар Х. Фараг, Гэри Р. Острофф, Сара Дж. Табризи и Ральф Андре

PDF

dagLogo: Пакет R / Bioconductor для идентификации и визуализации использования дифференциальных аминокислотных групп в данных протеомики, Jianhong Ou, Haibo Liu, Niraj K.Нирала, Алексей Стукалов, Уша Ачарья, Майкл Р. Грин и Лихуа Джули Чжу

Ссылка

Ответ антител к ВИЧ-1: след вирусного резервуара у детей, вертикально инфицированных ВИЧ, Паоло Пальма, Маргарет М. Макманус, Никола Котуньо, Сальваторе Рокка, Паоло Росси и Кэтрин Лузуриага

PDF

Adaptive Evolution нацелена на сеть транскрипции предшественников piRNA, Swapnil Parhad, Tianxiong Yu, Gen Zhang, Nicholas P. Rice, Zhiping Weng и William E.Theurkauf

PDF

Извлечение жизнеспособных эндокринно-специфических клеток и транскриптомов у мышей с привитыми островками поджелудочной железы человека, Самбра Д. Редик, Линда Лихи, Энн Р. Риттенхаус, Дэвид М. Блоджетт, Алан Г. Дерр, Альпер Кюкукурал, Мануэль Гарбер, Леонард Д. Шульц, Дейл Л. Грейнер, Дженнифер П. Ван, Дэвид М. Харлан, Рита Бортелл и Агата Юрчик

Ссылка

Антагонизм лекарств и доминирование одного агента являются результатом различий в кинетике смерти, Райан Ричардс, Ханна Р.Шварц, Меган Э. Ханиуэлл, Мэрайя С. Стюарт, Питер Круз-Гордилло, Анна Джойс, Бенджамин Д. Лэндри и Майкл Дж. Ли

PDF

Атлас типов клеток придатка яичка и семявыносящего протока млекопитающих [препринт], Вера Д. Ринальди, Элиза Доннард, Кайл Геллатли, Мортен Расмуссен, Альпер Кюкукураль, Онур Юкселен, Мануэль Гарбер, Упасна Шарма и Оливер Дж. Рандо

PDF

Атлас типов клеток придатка яичка и семявыносящего протока мыши, Вера Д. Ринальди, Элиза Доннард, Кайл Геллатли, Мортен Расмуссен, Альпер Кюкукурал, Онур Юкселен, Мануэль Гарбер, Упасна Шарма и Оливер Дж.Рандо

PDF

Выросшая бактериальная резистентность к фторпиримидинам может снизить воздействие химиотерапии у хозяина Caenorhabditis elegans, Бриттани Розенер, Серкана Сайина, Питера О. Олуоча, Ауриана Гарсиа-Гонсалеса, Хиротада Мори, Альберты Дж. М. Уолхаут и Амира Митчелла

PDF

SREBP1 регулирует метаболизм митохондрий в онкогенных KRAS, экспрессирующих NSCLC [препринт], Кристиан Ф. Руис, Эмили Д. Монталь, Джон А. Хейли и Джон Д. Хейли

PDF

Новый препарат на основе парапробиотиков для борьбы с Haemonchus contortus у овец, Джон Сандерс, Дэвид Газзола, Ханчен Ли, Амбили Абрахам, Келли Фланаган, Флорентина Рус, Ян Ху, Гэри Р.Острофф и Раффи В. Ароян

PDF

Белок, взаимодействующий с тиоредоксином, необходим для хронической высококалорийной диеты, способствующей всасыванию фруктозы в кишечнике, Ану Шах, Сезин Дагдевирен, Джордан П. Левандовски, Анжела Б. Шмидер, Элизабет М. Риччи-Блер, Ниранджана Натараджан, Хенна Хундал, Хи Лим Но, Рэндалл Х. Фридлин, Чарльз Видудес, Джейсон К. Ким, Эми Дж. Вейджерс, Рой Дж. Соберман и Ричард Т. Ли

PDF

FMRP связывает оптимальные кодоны со стабильностью мРНК в нейронах [препринт], Huan Shu, Elisa Donnard, Botao Liu, Ruijia Wang и Joel D.Рихтер

Ссылка

Геномная характеристика эндотелиальных энхансеров выявляет многофункциональную роль NR2F2 в регуляции артериовенозной экспрессии генов, Самир Сиссауи, Джун Ю, Аймин Ян, Руи Ли, Онур Юкселен, Альпер Кюкукурал, Лихуа Джули Чжу и Натан Д. Лоусон

PDF

Бета-клеточная резистентность к инсулину способствует стимулированной глюкозой гиперсекреции инсулина [препринт], Сёс Сковсо, Хе Лим Но, Суджин Сук, Брайан Габласки, Джейсон К. Ким и Джеймс Д.Джонсон

PDF

YAP1 при гепатобластоме стимулирует терапевтическую дифференцировку опухолевых клеток в функциональные гепатоцитоподобные клетки, Джордан Л. Смит, Томас Родригес, Хайвэй Моу, Сует-Ян Кван, Генри Э. Пратт, Сяо-Оу Чжан, Юйин Цао, Шунь-Цин Лян, Дениз М. Озата, Тяньсюн Ю, Цянцзун Инь, Макс Хазельтин, Чжипин Вэн, Эрик Дж. Сонтхаймер и Вэнь Сюэ

Ссылка

Редактирование основания аденина в модели тирозинемии у взрослых мышей, Chun-Qing Song, Tingting Jiang, Michelle Richter, Luke H.Рим, Люк В. Коблан, Мария Пас Зафра, Эмма М. Шатофф, Джордан Л. Доман, Юэин Цао, Лукас Э. Доу, Лихуа Джули Чжу, Дэниел Г. Андерсон, Дэвид Р. Лю, Хао Инь и Вэнь Сюэ

PDF

Инновации, проблемы и минимальная информация для стандартизации гуманизированных мышей, Рената Стрипеке и Майкл А. Брем

PDF

Ремоделлер INO80C поддерживает геномную стабильность, предотвращая беспорядочную транскрипцию в истоках репликации, Салих Топал, Кристофер Ван, Йонг Сюэ, Майкл Ф.Кэри и Крейг Л. Петерсон

PDF

CRISPR-усиленное «потемнение» адипоцитов человека как клеточная терапия для метаболических заболеваний [препринт], Эммануэла Цагкараки, Сара М. Николоро, Тиффани ДеСуза, Хавьер Соливан-Ривера, Ананд Десаи, Юэфэй Шен, Марк Келли, Адилсон Л. Гильерме, Фелипе Энрикес, Раед Ибрагейм, Надя Амрани, Кевин Лук, Стейси Мейтленд, Рэндалл Х. Фридлин, Лорен Тауэр, Сяоди Ху, Джейсон К. Ким, Скот А. Вулф, Эрик Дж. Зонтхаймер, Сильвия Корвера и Майкл П.Чешский

Ссылка

Анализ с высоким разрешением дифференциальной экспрессии генов во время атрофии скелетных мышц и запрограммированной гибели клеток, Джунко Цуджи, Трэвис Томсон, Элизабет Чан, Кристин К. Браун, Джулия Оппенгеймер, Кэрол Бигелоу, Сяньцзюнь Донг, Уильям Э. Тёркауф, Чжипинг Вен и Лоуренс М. Шварц

PDF

Эпителиально-специфическая делеция Jun-N-концевой киназы 1 в дыхательных путях ослабляет легочный фиброз в двух независимых моделях мышей, Jos L.ван дер Вельден, Джон Ф. Алкорн, Дэвид Г. Чепмен, Леннарт К. А. Лундблад, Чарльз Г. Ирвин, Роджер Дж. Дэвис, Келли Батнор и Ивонн М. В. Янссен-Хейнингер

Ссылка

Картирование с высоким разрешением многосторонних взаимодействий энхансер-промотор, регулирующих обнаружение патогенов, Пранита Вангала, Рэйчел Мерфи, София А. Квинодоз, Кайл Дж. Геллатли, Патрик Э. МакДонел, Митчелл Гуттман и Мануэль Гарбер

PDF

Pseudomonas aeruginosa расщепляет центр декодирования рибосом Caenorhabditis elegans, Алехандро Васкес-Рифо, Эмилиано П.Риччи и Виктор Р. Амброс

PDF

WormPaths: аннотация и визуализация метаболического пути Caenorhabditis elegans [препринт], Мелисса Д. Уокер, Габриэль Э. Гизе, Эми Д. Холдорф, Сушила Бхаттачарья, Седрик Диот, Ауриан Гарсия-Гонсалес, Брент Хоровиц, Томас Йонг-Ук Ли , Сюхан Ли, Зейнеп Мирза, Хуйминь На, Шивани Нанда, Ольга Пономарова, Хэфэй Чжан, Цзинъянь Чжан, Л. Сафак Йылмаз и Альберта Дж. М. Уолхаут

PDF

Экзогенный GDF11, но не GDF8, снижает массу тела и улучшает гомеостаз глюкозы у мышей, Райан Г.Уокер, Хе Лим Но, Тэкён Ким, Джейсон К. Ким и Ричард Т. Ли

Ссылка

Цитокины, индуцированные ВИЧ-1, истощают гомеостатические врожденные лимфоидные клетки и увеличивают TCF7-зависимые NK-клетки памяти, Йетао Ван, Лоуренс М. Лифшиц, Кайл Геллатли, Шон М. Макколи, Пранита Вангала, Кюсик Ким, Алан Г. Дерр, Смита Джайсвал , Альпер Кюкукурал, Патрик МакДонел, Томас С. Гриноу, Джин-Мэри Хоутон, Мануэль Гарбер и Джереми Любан

Ссылка

Аномальная фертильность, образование акросом, экспрессия и локализация IFT20 у мышей с условным нокаутом Gmap210, Zhenyu Wang, Yuqin Shi, Suheng Ma, Qian Huang, Yi Tian Yap, Lin Shi, Shiyang Zhang, Ting Zhou, Wei Li, Bo Hu, Ling Zhang , Стивен А.Кравец, Грегори Дж. Пазур, Рекс А. Гесс и Чжибин Чжан

PDF

DGAT1 — онкопротеин метаболизма липидов, который позволяет раковым клеткам накапливать жирные кислоты, избегая липотоксичности [препринт], Дэниел Дж. Уилкок, Мелисса Кашета и Крейг Дж. Сеол

PDF

Раковый микробиом: различение прямых и косвенных эффектов требует системного подхода, Жоао Б. Ксавье и Амир Митчелл

Ссылка

Быстрая, чувствительная и воспроизводимая модель гуманизированных мышей in vivo PBMC для определения терапевтического синдрома высвобождения цитокинов, Chunting Ye, Hongyuan Yang, Mingshan Cheng, Leonard D.Шульц, Дейл Л. Грейнер, Майкл А. Брем и Джеймс Г. Кек

PDF

DolphinNext: платформа распределенной обработки данных для высокопроизводительной геномики, Онур Юкселен, Осман Туркилмаз, Ахмет Р. Озтюрк, Мануэль Гарбер и Альпер Кюкукурал

Ссылка

Структурный и функциональный анализ варианта белка-шипа D614G SARS-CoV-2, Леонид Юрковецкий, Томас Нялиле, Йетао Ван, Уильям Э. Диль, Энн Дофин, Клаудиа Карбон, Кристен Вейнотт, Шон Б. Эгри, Джеймс Б.Манро, Пардис К. Сабети, Христос А. Киратсус, Наталья В. Дудкина, Куанг Шен и Джереми Любан

PDF

SARS-CoV-2 Spike-вариант белка D614G увеличивает инфекционность и сохраняет чувствительность к антителам, которые нацелены на рецептор-связывающий домен [препринт], Леонид Юрковецкий, Томас Ньялиле, Йетао Ван, Уильям Э. Дил, Анн Дофин, Клаудиа Карбон, Кристен Вейнотт, Шон Б. Эгри, Пардис К. Сабети, Христос Киратсус, Джеймс Б. Манро, Куанг Шен и Джереми Любан

PDF

Геномы бобра и голой кротовой крысы раскрывают общие пути к долголетию, Сюмин Чжоу, Элинор К.Карлссон, Вадим Николаевич Гладышев

PDF

Рецептор SARS-CoV-2 ACE2 представляет собой стимулируемый интерфероном ген в эпителиальных клетках дыхательных путей человека и обнаруживается в определенных клеточных субпопуляциях в тканях, Карли Г.К. Циглер, Юмин Цао, Чжиру Го, Дженнифер П. Ван, Роберт В. Финберг, Мануэль Гарбер, Алекс К. Шалек, Хосе Ордовас-Монтанес и HCA Lung Biological Network

PDF

Мультитул сравнительной геномики для научных открытий и сохранения, Zoonomia Consortium, Дайан П.Женере, Мануэль Гарбер, Керстин Линдблад-То и Элинор К. Карлссон

Публикации за 2019 год

PDF

Новая платформа вакцины, использующая частицы глюкана для индукции защитных реакций против Francisella tularensis и других патогенов, Амбили Абрахам, Гэри Р. Острофф, Стюарт М. Левитц и П. К. Ф. Ойстон

Ссылка

Модели мышей с гуманизированной иммунной системой: прогресс, проблемы и возможности, Тодд М. Аллен, Майкл А.Брем, Сандра Бриджес, Стейси Фергюсон, Прити Кумар, Олег Мирочниченко, Каролина Палука, Роберта Пеланда, Бриджит Сандерс-Бир, Леонард Д. Шульц, Лишан Су и Мерси Прабхудас

Ссылка

Химический каркас двухвалентной siRNA для мощной и устойчивой модуляции экспрессии генов в центральной нервной системе, Джулия Ф. Альтерман, Бруно MDC Годиньо, Мэтью Р. Хасслер, Шанталь М. Фергюсон, Димас Эчеверрия, Эллен Сапп, Река А. Харасти, Эндрю Х. Коулз, Фейт Конрой, Рэйчел Миллер, Лоик Ру, Пол Ян, Эмили Г.Нокс, Антон А. Туранов, Роберт М. Кинг, Глэдис Герну, Кристиан Мюллер, Хизер Грей-Эдвардс, Ричард П. Мозер, Н. Бишоп, Самер М. Джабер, Мэтью Дж. Гунис, Мигель Сена-Эстевес, Атма А. Пай , Мариан ДиФилья, Нил Аронин и Анастасия Хворова

PDF

Прогрессивное выравнивание с Cactus: выравниватель нескольких геномов для эпохи тысячи геномов [препринт], Джоэл Армстронг, Элинор К. Карлссон и Бенедикт Патен

PDF

Использование гуманизированных мышей для изучения специфических врожденных иммунных ответов человека в иммуноонкологии, Кен-Эдвин Арье

PDF

Многомерное ремоделирование транскрипции с помощью физиологического инсулина in vivo, Thiago M.Батиста, Рубен Гарсия-Мартин, Вейкан Кай, Масахиро Кониси, Брайан Т. О’Нил, Масаджи Сакагути, Чон Хун Ким, Дэ Ён Чжон, Джейсон К. Ким и К. Рональд Кан

PDF

Различные липидные конъюгаты для функциональной внепеченочной доставки миРНК in vivo, Аннабель Бисканс, Эндрю Х. Коулз, Река А. Харасти, Димас Эчеверриа, Мэтью Р. Хасслер, Мэйр Ф. Осборн и Анастасия Хворова

Ссылка

Потеря презентации антигена в макрофагах жировой ткани или в адипоцитах, но не в обоих, улучшает метаболизм глюкозы, Alecia M.Блащак, Валери П. Райт, Каджол Анандани, Джои Лю, Анахита Джалилванд, Стивен Бергин, Сара М. Николоро, Майкл П. Чех, Уильям Лафузе, Туо Денг, Дэвид Брэдли и Уилла А. Сюэ

Ссылка

Ограниченный выбор мутаций аминокислот в эволюции протеазы ВИЧ-1, Джеффри И. Баучер, Трой В. Уитфилд, Энн Дофин, Гили С. Нахум, Карл Холлинс III, Константин Б. Зельдович, Рональд Свонстром, Селия А. Шиффер, Джереми Любань, и Даниэль Болон

Ссылка

Нарушение суточной регуляции температуры у мышей с боковым амиотрофическим склерозом, Maurine C.Браун, Александра Кастильо-Руис, Премананда Индик, Дэ Янг Юнг, Джейсон К. Ким, Роберт Х. Браун-младший, Стивен Дж. Своп и Уильям Дж. Шварц

PDF

Детектор персистентности для перенастройки метаболической сети у животного, Джоте Т. Булча, Габриэль Э. Гизе, Зульфикар Али, Йонг-Ук Ли, Мелисса Д. Уокер, Эми Д. Холдорф, Л. Сафак Йилмаз, Роберт К. Брюстер, и Альберта Дж. М. Вальхаут

Ссылка

Циркулирующие профили микроРНК при токсичности ацетаминофена, Стефани Каррейро, Джеймс Марвел-Коэн, Розалинд Ли, Бриттани Чепмен и Виктор Р.Амброс

Ссылка

Bacillus thuringiensis Cry5B активен против Strongyloides stercoralis in vitro, Sarit Charuchaibovorn, Vivornpun Sanprasert, Nataya Sutthanont, Yan Hu, Ambily Abraham, Gary R. Ostroff, Raffi V. Aroian, Tegegn G.

PDF

TRIM5alpha ограничивает репликацию флавивирусов путем нацеливания вирусной протеазы на протеасомную деградацию, Абхилаш И. Чирамель, Николас Р. Мейерсон, Кристин Л. МакНалли, Ребекка М.Брокель, Ванесса Р. Монтойя, Омайра Мендес-Солис, Шелли Дж. Робертсон, Гейл Л. Стердевант, Кирк Дж. Любик, Винод Наир, Брайан Х. Юсефф, Робин М. Айрлэнд, Кэтрин М. Босио, Кюсик Ким, Джереми Любан , Ванесса М. Хирш, Р. Трэвис Тейлор, Фадила Буамр, Сара Л. Сойер и Соня М. Бест

PDF

Гетерохронный ген lin-28 C. elegans координирует синхронизацию гиподермальных и соматических гонадных программ для морфогенеза репродуктивной системы гермафродитов, Сунгук Чой и Виктор Р.Амброс

PDF

Члены семейства Toll связывают несколько белков Spatzle и активируют экспрессию гена антимикробного пептида у Drosophila, Munmun Chowdhury, Chun-Feng Li, Zhen He, Yuzhen Lu, Xu-Sheng Liu, Yu-Feng Wang, Y. Tony Ip, Michael R. Strand , и Сяо-Цян Юй

PDF

Подход с использованием больших данных к пониманию скорости метаболизма и реакции на ожирение у лабораторных мышей [препринт], Джун К. Корриган, Дипти Рамачандран, Ючен Хе, Колин Палмер, Майкл Дж.Юрчак, Биншан Ли, Рэндалл Х. Фридлин, Джейсон К. Ким, Джон Дж. Рэмси, Луиза Лантье, Оуэн П. МакГиннесс, Александр С. Бэнкс и рабочая группа

PDF

Минимальная система CRISPR-Cas3 для геномной инженерии [препринт], Балинт Чорго, Лина М. Леон, Илеа Дж. Чау-Ли, Алехандро Васкес-Рифо, Джоэл Д. Берри, Кэролайн Махендра, Эмили Д. Кроуфорд, Дженнифер Д. Льюис и Джозеф Бонди-Деноми

Ссылка

Переработка эндосом в зрелом эпителии ограничивает передачу онкогенных сигналов, Лука Д’Агостино, Инчао Ни, Ци Ли, Ю.Тони Ип и Нан Гао

PDF

Использование роботизированной автоматизации и веб-технологий для модернизации научных исследований, Орна Дахан, Бат-Шахар Дорфман, Серкан Сайин, Бриттани Розенер, Тиффани Хуа, Анат Ярден и Амир Митчелл

PDF

Структурная организация и динамика факторов обмена гомодимерных цитогезинов Arf GTPase в растворе и на мембранах, Sanchaita Das, Andrew W. Malaby, Agata Nawrotek, Wenhua Zhang, Mahel Zeghouf, Sarah Maslen, Mark Skehel, Srinivas Chakravarthy, Thomas C.Ирвинг, Осман Бильсель, Жаклин Черфилс и Дэвид Г. Ламбрайт

Ссылка

Технологии оказания медицинской помощи при заболеваниях сердца, легких, крови и сна от Центра передовых технологий оказания медицинской помощи, Эрик Ю. Динг, Эмили Энсом, Натаниэль Хафер, Брайан Буххольц, Мэри Энн Пикард, Дениз Данлэп, Юджин Роджерс, Карл Лоутон, Айнат Корен, Крейг М. Лилли, Тимоти П. Фицгиббонс и Дэвид Д. Макманус

PDF

Диета с высоким содержанием жиров в модели мыши, резистентной к инсулину, вызывает повсеместную перестройку сигнальной сети фосфотирозина, Антье Диттманн, Норман Дж.Кеннеди, Нина Л. Солтеро, Надер Моршед, Миеко Д. Мана, Омер Х. Йилмаз, Роджер Дж. Дэвис и Форест М. Уайт

Ссылка

Ловушка Rab GTPase хвостом, Цзяньцзюнь Дуань и Дэвид Г. Ламбрайт

Ссылка

Интерлейкин-6, полученный из-за кожного дефицита стеароил-КоА-десатуразы-1, может опосредовать перекрестное взаимодействие органов метаболизма между кожей, жировой тканью и печенью, Сабрина Н. Дюма, Чанг-Ан Го, Джейсон К. Ким, Рэндалл Х. Фридлин и Джеймс М. Нтамби

Ссылка

Компактный высокоточный Cas9 с динуклеотидным PAM для редактирования генома in vivo, Алиреза Эдраки, Аамир Мир, Раед Ибрахейм, Ильдар Гайнетдинов, Ёнсу Юн, Чун-Цин Сон, Юэин Цао, Джудит Галлант, Вен Сюэ, Хайме А.Ривера и Эрик Дж. Сонтхаймер

Ссылка

Влияние старения на чувствительность к инсулину и его клиренс у мышей и людей, не зависящие от ожирения, Николь Эрхардт, Джинруи Цуй, Сезин Дагдевирен, Сухаорн Сангнипанткул, Хелен С. Гудридж, Джейсон К. Ким, Луиза Лантье, Сюцин Го, Юй-Дер И. Чен, Лесли Дж. Раффель, Томас А. Бьюкенен, Уилла А. Сюэ, Джером И. Роттер, Марк О. Гударци и Миклош Петерфи

Ссылка

Долгосрочная профилактика фиброза имплантатов у грызунов и нечеловеческих приматов с помощью кристаллизованных лекарственных форм, Shady Farah, Dale L.Грейнер и Дэниел Г. Андерсон

PDF

Члены семьи сиртуинов дрожжей поддерживают гомеостаз транскрипции для обеспечения стабильности генома, Джессика Л. Фельдман и Крейг Л. Петерсон

PDF

Adipocyte ACLY способствует переработке углеводов в рационе для поддержания метаболического гомеостаза у женщин, Салли Фернандес, Джон М. Виола, АннМэри Торрес, Мартина Уоллес, Софи Трефели, Стивен Чжао, Хейли К. Аффронти, Дживани М. Генгатаран, Дэвид А. Гертин, Дэвид А. Гертин, W.Снайдер, Кристиан М. Металло и Кэтрин Э. Веллен

Ссылка

Вывод динамики популяции из данных временных рядов секвенирования одноклеточной РНК, Дэвид С. Фишер, Анна К. Фидлер, Эрик М. Кернфельд, Райан Дженга, Эйми Бастидас-Понсе, Мостафа Бахти, Хайко Ликерт, Ян Хасенауэр, Рене Маер, и Фабиан Дж. Тайс

PDF

Ишемическая болезнь сердца не связана со значительными изменениями экспрессии воспалительных генов в эпикардиальном жире человека, Тимоти П. Фитцгиббонс, Нэнси Ли, Ханх-Ван Т.Тран, Сара М. Николоро, Марк Келли, Стэнли К.С. Тэм и Майкл П. Чех

PDF

Anti-CRISPR AcrIIA5 мощно ингибирует все гомологи Cas9, используемые для редактирования генома, Бьянка Гарсия, Джуён Ли, Алиреза Эдраки, Юрима Идальго-Рейес, Стивен Эрвуд, Аамир Мир, Шантель Н. Трост, Ури Серусси, Сабрина Д. Стэнли, . Кон, Джули М. Клейкомб, Эрик Дж. Сонтхаймер, Карен Л. Максвелл и Алан Р. Дэвидсон

Ссылка

Человеческие моноклональные антитела против ВИЧ-1 gp120 с нейтрализующей активностью, клонированные от гуманизированных мышей, инфицированных ВИЧ-1, Мелисса А.Гаврон, Марк Дюваль, Клаудиа Карбоне, Смита Джайсвал, Аарон Уоллес, Джозеф К. Мартин 3-й, Энн Дофин, Майкл А. Брем, Дейл Л. Грейнер, Леонард Д. Шульц, Джереми Любан и Лиза А. Кавачини

PDF

На пути к пониманию молекулярных основ развития эндодермы человека с использованием CRISPR-эффекторных и одноклеточных технологий, Райан М. Дженга

PDF

Скрининг CRISPRi на основе секвенирования одноклеточной РНК решает молекулярные факторы раннего развития эндодермы человека, Райан М.Дженга, Эрик М. Кернфельд, Кришна М. Парси, Тиган Дж. Парсонс, Майкл Дж. Циллер и Рене Маер

Ссылка

Гиперинсулинемия вызывает резистентность к инсулину у самцов мышей с печеночно-специфической делецией Ceacam1 независимо от липолиза, Хильда Э. Гадие, Люсия Руссо, Харрисон Т. Мутури, Симона С. Ганем, Ияд Х. Манасерх, Хай Лим Но, Суджин Сок, Джейсон К. Ким, Дженнифер В. Хилл и Соня М. Наджар

PDF

Регуляция развития меланоцитов рыбок данио с помощью лиганд-зависимой передачи сигналов BMP, Алек Граманн, Арвинд М.Венкатесан, Мелисса Герин и Крейг Дж. Сеол

Ссылка

Как стать главным исследователем: планирование и направление вашего академического приключения, Пол Л. Грир и Мелани А. Сэмюэл

Ссылка

Молекулярные пути, связывающие жировую иннервацию с действием инсулина при ожирении и сахарном диабете, Адилсон Л. Гильерме, Фелипе Энрикес, Александр Х. Бедард и Майкл П. Чех

Ссылка

Получение и характеристика наночастиц гуминовой кислоты, инкапсулированных в клеточную стенку дрожжей, инкапсулированных бета-глюканом в качестве усиленного связующего афлатоксина B1, Зейнаб Хамза, Махер Эль-Хашаш, Сохер Али, Амаль Хатхут, Эрнесто Сото, Бассем Сабри и Гэри Р.Острофф

PDF

Сывороточная депривация мезенхимальных стволовых клеток улучшает активность экзосом и изменяет липидный и белковый состав, Река А. Харасти, Рэйчел Миллер, Мишель Л. Дубьюк, Эндрю Х. Коулз, Мари К. Дидио, Димас Эчеверриа, Маттео Стоппато, Ив Ю. Сере , Джон Д. Лешик, Джулия Ф. Альтерман, Бруно MDC Годиньо, Мэтью Р. Хасслер, Рэйчел Уоллакотт, Ян Ван, Скотт А. Шаффер, Нил Аронин и Анастасия Хворова

Ссылка

Кукурузный Ag2 в качестве субъединичной вакцины от лихорадки долины, Селин А.Хайден, Чиунг-Ю Хунг, Хао Чжан, Остин Негрон, Раймонд Эскерра, Гэри Р. Острофф, Амбили Абрахам, Алехандро Габриэль Лопес, Джульетта Элизабет Гонсалес и Джон А. Ховард

PDF

Моделирование индуцированной цисплатином сигнальной динамики в тройных отрицательных раковых клетках молочной железы выявляет медиаторы чувствительности, Энн Маргриет Хейджинк, Марике Эвертс, Меган Э. Ханиуэлл, Райан Ричардс, Янник П. Кок, Элизабет Дж. Де Вриз, Майкл Дж. Ли, и Marcel ATM van Vugt

Ссылка

WormCat: онлайн-инструмент для аннотации и визуализации данных генома Caenorhabditis elegans, Эми Д.Холдорф, Дэниел П. Хиггинс, Энн С. Харт, Питер Р. Боаг, Грегори Дж. Пазур, Альберта Дж. М. Уолхаут и Эми К. Уокер (генетика, 06.12.2019)

PDF

WormCat: онлайн-инструмент для аннотации и визуализации данных генома Caenorhabditis elegans [препринт], Эми Д. Холдорф, Дэниел П. Хиггинс, Энн С. Харт, Питер Р. Боаг, Грегори Дж. Пазур, Альберта Дж. М. Уолхаут, и Эми К. Уокер

Ссылка

Липогенез De Novo как источник вторых мессенджеров в адипоцитах, Вэнь-Ю Сяо и Дэвид А.Гертен

PDF

Рецептор суперсемейства иммуноглобулинов регулирует адаптивный термогенез, Кармен Уртадо Дель Посо, Рэндалл Х. Фридлин, Хе Лим Но, Джейсон К. Ким и Энн Мари. Шмидт

PDF

Механизмы устойчивости темпоральной клеточной судьбы у C. Elegans, Orkan Ilbay

Ссылка

Феромоны и пищевые сигналы регулируют зависимость развития от микроРНК семейства let-7 у C. elegans, Orkan Ilbay and Victor R.Амброс

PDF

Регуляция ядерно-цитоплазматического разделения с помощью пути lin-28-lin-46 усиливает репрессию микроРНК HBL-1, обеспечивая устойчивую прогрессию клеточной судьбы у C. elegans, Orkan Ilbay и Victor R. Ambros

Ссылка

На переднем крае: раннее истощение Т-клеток памяти во время воспаления и блокады костимуляции регулируется одновременно проапоптотическими белками Fas и Bim, Сонал Джангалве, Варун Н. Капур, Цзя Сюй, Номеда Гирниус, Норман Дж.Кеннеди, Ивонн Дж. К. Эдвардс, Раймонд М. Уэлш, Роджер Дж. Дэвис и Майкл А. Брем

Ссылка

Неканоническая передача сигналов mTORC2 регулирует катаболизм липидов коричневых адипоцитов с помощью SIRT6-FoxO1, Су Мён Юнг, Чиен-Мин Хунг, Сэмюэл Р. Хильдебранд, Джоан Санчес-Гурмачес, Димпи Мукхопадхай, Камила Мартинес Калейман, Амелия К.-Люсиано Сяо, Юэфэн Тан, Huawei Ли и Дэвид А. Гертин

PDF

Консервативные особенности репертуара рецепторов Т-клеток способствуют сохранению ВЭБ-специфических Т-лимфоцитов CD8, Лариса Камга

PDF

CDR3alpha управляет отбором репертуара рецепторов Т-лимфоцитов CD8 иммунодоминантного вируса Эпштейна-Барра (EBV) BRLF1 при первичной инфекции, Лариса Камга, Анна Гил, InYoung Song, Робин М.Броуди, Дарио Герси, Нурай Аслан, Лоуренс Дж. Стерн, Лийза К. Селин и Кэтрин Лузуриага

PDF

Neural JNK3 регулирует восстановление кровотока после ишемии задних конечностей у мышей через ось Egr1 / Creb1, Шаши Кант, Шивон М. Крейдж, Кай Чен, Микаэлла М. Рейф, Хизер Лиджард, Марк Келли, Амада Д. Кализ, Хан-Ван Т. . Тран, Касмир Рамо, Оуэн М. Петерс, Марк Р. Фриман, Роджер Дж. Дэвис и Джон Ф. Кини-младший

Ссылка

Полногеномный анализ серовара Typhi Salmonella enterica у гуманизированных мышей выявляет ключевые особенности вирулентности, Джойс Э.Карлинси, Тейлор А. Степьен, Мэтью Мэйхо, Лариса А. Синглетари, Лейси К. Бингхэм-Рамос, Майкл А. Брем, Дейл Л. Грейнер, Леонард Д. Шульц, Ларри А. Галлахер, Мэтт Баун, Роберт А. Кингсли, Стивен Дж. Либби и Феррик К. Фанг

Ссылка

Циклофилин A защищает ВИЧ-1 от ограничения человеческим TRIM5alpha, Кюсик Ким, Энн Дофин, Севнур Комурлу, Шон М. МакКоли, Леонид Юрковецкий, Клаудиа Карбон, Уильям Э. Дил, Катерина Страмбио-Де-Кастилья, Эдвард М. Кэмпбелл, и Джереми Любан

PDF

DEBrowser: интерактивный инструмент дифференциального анализа и визуализации данных подсчета, Альпер Кучукурал, Онур Юкселен, Дениз М.Озата, Мелисса Дж. Мур и Мануэль Гарбер

PDF

Истощение TRRAP вызывает независимое от р53 старение при раке печени за счет подавления митотических генов, Suet-Yan Kwan, Ankur Sheel, Chun-Qing Song, Xiao-Ou Zhang, Tingting Jiang, Hien Dang, Yueying Cao, Deniz M. Ozata, Haiwei Моу, Хао Инь, Чжипин Вэн, Синь Вэй Ван и Вэнь Сюэ

HIP14, новый белок, содержащий анкириновый домен, связывает хантингтин с внутриклеточным переносом и эндоцитозом | Молекулярная генетика человека

Абстрактные

Болезнь Хантингтона (БХ) вызывается экспансией полиглутамина [поли (Q)] в белке хантингтине (htt).Хотя точный механизм прогрессирования заболевания еще предстоит выяснить, измененные взаимодействия мутантного htt с его белками-партнерами могут вносить вклад в заболевание. Используя дрожжевую двугибридную систему, мы выделили новый взаимодействующий с htt белок, HIP14. Взаимодействие HIP14 с htt обратно коррелирует с длиной поли (Q) в htt. мРНК длиной 9 и 6 п.н. транскрибируются из гена HIP14 , при этом транскрипт размером 6 т.п.н. преимущественно экспрессируется в головном мозге. Белок HIP14 обогащен в головном мозге, демонстрирует частичную локализацию с htt в полосатом теле и обнаруживается в нейронах со средними выступами шипов, подмножестве нейронов, пораженных при HD.HIP14 локализуется в Гольджи и везикулах цитоплазмы. Белок HIP14 имеет сходство последовательности с Akr1p, белком, необходимым для эндоцитоза в Saccharomyces cerevisiae. Экспрессия человеческого HIP14 приводит к снижению чувствительной к температуре летальности в дрожжевых клетках akr1Δ и, кроме того, восстанавливает их дефект в эндоцитозе, демонстрируя роль HIP14 во внутриклеточном перемещении. Наши результаты показывают, что снижение взаимодействия между htt и HIP14 может вносить вклад в дисфункцию нейронов при HD, нарушая нормальные пути внутриклеточного транспорта в нейронах.

DDBJ / EMBL / Genbank номера доступа AB024494, AB024495

ВВЕДЕНИЕ

Хотя экспансия полиглутамина [поли (Q)], причинная мутация при болезни Хантингтона (HD) была обнаружена несколько лет назад, до сих пор нет доказанного механизма избирательной уязвимости нейронов в полосатом теле и коре, наблюдаемой при этой болезни. Белок хантингтин (htt) экспрессируется повсеместно во всех тканях. В нейронах htt связан с синаптическими пузырьками и микротрубочками и обогащен дендритами и нервными окончаниями (1,2).

Чтобы понять нормальную функцию htt и механизмы патогенеза при HD, а также расширить пути взаимодействия с htt, мы провели двухгибридный скрининг дрожжей для идентификации htt-связывающих белков и определили, модулируется ли длина поли (Q) эти взаимодействия. В случае, если взаимодействие модулируется экспансией CAG, это может указывать на то, что взаимодействие явно нарушается в присутствии мутации и что, следовательно, это может вносить вклад в патогенез HD.В этом отношении примечательно, что определенные классы белков объединяются в кластеры в своем паттерне взаимодействия с htt. Например, функции нормального htt можно определить из анализа его белковых партнеров. Если эти партнеры не обнаруживают измененных взаимодействий в присутствии мутации, то эти взаимодействия вряд ли лежат в основе HD. Мутантный htt не обнаруживает измененного взаимодействия с белками, такими как HIP2 и p53, предполагая, что роль htt в контроле клеточного цикла и выживании клеток является частью его нормальной функции и не вносит непосредственного вклада в патогенез.

Семь белков, участвующих в регуляции транскрипции, взаимодействуют с htt. Это ко-репрессор ядерного рецептора (3), транскрипционный ко-репрессор C-концевого связывающего белка (4), HYP-A (FBP-11), HYP-B (p231HBP) (5), белок, связывающий элемент ответа цАМФ. (CREB) -связывающий белок (CBP) (6), mSin3a (7) и связанный с p300 / CBP фактор (P / CAF) (7). Интересно, что почти все взаимодействующие белки-партнеры htt, участвующие в регуляции транскрипции, обнаруживают измененное взаимодействие с htt в присутствии экспансии поли (Q), указывая тем самым, что нарушение этого взаимодействия может вносить вклад в наблюдаемый патогенез.

Более того, мутант htt демонстрирует измененное взаимодействие со всеми своими белками-партнерами, участвующими в функциях внутриклеточного нейронального транспорта, обеспечивая убедительные доказательства того, что измененный транспорт может вносить вклад в патогенез, наблюдаемый при HD. Доказательством этого является то, что несколько взаимодействующих белков, включая htt-взаимодействующий белок 1 (HIP1) (8), htt-связанный белок 1 (HAP1) (9-11), кальмодулин (12), Sh4GL3 (13) и цистатион β -синтаза (14), были идентифицированы с функциями в транспортной и цитоскелетной организации.Мы описываем здесь идентификацию и функциональное определение htt-взаимодействующего белка, HIP14, который также показывает измененное взаимодействие с мутантным htt и играет роль в эндоцитозе. HIP14 преимущественно экспрессируется в нейронах головного мозга, но не в глии, и локализуется в комплексе Гольджи и цитоплазматических пузырьках. HIP14 имеет высокую степень аминокислотного сходства с белками различных организмов, включая Akr1p, белок, необходимый для эндоцитоза феромонных рецепторов в дрожжах Saccharomyces cerevisiae (15).Клетки дрожжей, лишенные функционального AKR1 ( akr1Δ ), демонстрируют пониженную жизнеспособность при повышенной температуре и обнаруживают дефекты эндоцитоза. Мы определили, что HIP14 может восстанавливать чувствительную к температуре жизнеспособность дрожжевых клеток akr1Δ и восстанавливать их блокировку при эндоцитозе, предполагая, что HIP14 может играть роль во внутриклеточных транспортных процессах, и обеспечивая дополнительное доказательство роли htt в нейрональном транспорте. Эти данные приводят к гипотезе о том, что нарушенное взаимодействие между htt и HIP14 может приводить к изменениям нейронального транспорта, вносящего вклад в патогенез при HD.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Выделение

Мы выполнили скрининг двухгибридных библиотек дрожжей для идентификации белков-партнеров htt. Двухгибридный дрожжевой скрининг выявил 14 положительных клонов (16). Из них было обнаружено, что один клон HIP14 (pGAD HIP14 -500) специфически взаимодействует со слитым белком pGBT9–1955-44, поскольку дрожжевые ко-трансформанты давали His ⁺ , β-галактозидазу ⁺ фенотипа, и трансформация pGAD HIP14 -500 вектором pGBT9 не индуцировала активность β-галактозидазы.

Мы идентифицировали пять клонов кДНК, кодирующих HIP14 , путем скрининга библиотек кДНК человеческого мозга с помощью pGAD HIP14 -500. Поиск в базе данных выявил несколько клонов меток экспрессированной последовательности (EST), кодирующих области HIP14. Были определены и сопоставлены последовательностей ДНК этих клонов кДНК. Составная последовательность кДНК HIP14 включает 5272 нуклеотида, содержащих одну открытую рамку считывания (ORF) длиной 1902 нуклеотида, которая, как предполагается, кодирует белок HIP14, состоящий из 633 аминокислот.Сообщалось о взаимодействующем с htt белок HYPH , который идентичен 5′-части HIP14 (5), обеспечивая независимое подтверждение взаимодействия HIP14 и htt. Нуклеотидная последовательность HIP14 депонирована в базе данных DDBJ / EMBL / GenBank под номером доступа. AB024494.

Идентификация

выявил клоны EST человека, кодирующие ген, гомологичный HIP14. Из них один клон содержал одну ORF длиной 1869 нуклеотидов, кодирующую предсказанный белковый продукт из 622 аминокислот, с 48% идентичностью и 57% сходством с HIP14 (рис. 1 и таблица 1). Мы обозначили этот EST HIP14 — родственный белок ( HIP14L ). Нуклеотидная последовательность HIP14L депонирована в базе данных DDBJ / EMBL / GenBank под номером доступа. AB024495. Картирование гибридов соматических клеток на основе ПЦР показало, что HIP14L картирован на хромосоме 11 человека (данные не показаны).

Для определения хромосомной локализации HIP14 был проведен FISH-анализ, который показал, что HIP14 картирован в единственном геномном локусе в 12q14 – q15. Поиск в базе данных GDB и OMIM показал, что в этом регионе не было обнаружено генетических заболеваний (данные не показаны).

HIP14 и HIP14L демонстрируют гомологию с анкириновым повтором, содержащим белок

HIP14 и HIP14L были подвергнуты поиску гомологии, который выявил значительную гомологию между HIP14, HIP14L, двумя S.cerevisiae белки, содержащие анкириновые повторы (Akr1p, белок, необходимый для эндоцитоза рецепторов феромонов и Akr2p), и другие предсказанные транскрипты с неизвестной функцией у Caenorhabditis elegans (номер доступа AAD12801), Drosophila melanogaster no. ), Mortierella alpina (инвентарный номер CAB56510) и Schizosaccharomyces pombe (инвентарный номер CAA